Книга
← К списку книгЗагрузка разделов…
активнаАктивные записи участвуют в каталоге и синках. Неактивная книга скрыта, но не удалена из базы.
Книга
Предисловие
Витамины группы D относятся к классу биологически активных соединений стероидной природы и являются одним из главных регуляторов гомеостаза кальция в организме. Они широко применяются для лечения различных костных заболеваний— таких, как рахит, остеопороз, остеомаляция и др. Витамины D практически отсутствуют в природных источниках и вводятся в организм в виде синтетических препаратов. Поэтому только химический синтез витаминов D и их активных аналогов может обеспечить растущие потребности медицины и сельского хозяйства в этих препаратах.
За 50 лет, прошедших со времени открытия витаминов D, и особенно в последние годы, накоплен огромный фактический материал по химии, биохимии и технологии получения этих соединений. Однако в отечественной и зарубежной литературе до сих пор отсутствуют широкие обобщения научных достижений в этой области. Авторы монографий (Н. Rosenberg «Chemistry and physiology of the vitamins», 1945; H. Vogel, H. Knobloch «Chemie und technik dec vitamine», 1950; В. M. Березовский «Химия витаминов», 1959, 1973; Л. О. Шнайд- ман «Производство витаминов», 1958, 1973) в главах, посвященных витаминам D, дают лишь краткое изложение имеющегося материала и не отражают достижений последних лет в химии и биохимии витаминов D.
Настоящая монография является первой попыткой восполнить этот пробел. В ней обобщено большое количество отечественных и зарубежных публикаций и представлены результаты собственных исследований автора до конца 1976 года.
В монографии описаны история открытия витаминов D, их синтез и структурные особенности. Излагаются современные представления о механизме действия витаминов D в организме. Особое внимание уделено исследованиям метаболизма витаминов D и его регуляции, включая выделение, идентификацию активных метаболитов и изучение их биологических свойств. Рассмотрена зависимость между строением витаминов D и их биологической активностью.
Подробно изложены результаты исследований по фотохимической изомеризации провитаминов D и приведены различные схемы фотохимических превращений. Описаны химические свойства витаминов D — реакции фотохимической, термической и химической изомеризации, гидрирования и окисления. Дана краткая характеристика продуктов превращений провитаминов и витаминов D. Большое внимание уделено различным методам синтеза провитаминов D.
В монографии обобщены результаты исследований по синтезу активных аналогов, а также по полному синтезу витаминов D и родственных стеринов.
Описаны аналитические методы исследования витаминов О и подобных им соединений — различные цветные реакции, колориметрические методы определения, тонкослойная, колоночная и газожидкостная хроматография, УФ-, ИК-, ЯМР- и масс-спектроскопия.
Детально рассмотрены технология получения кристаллических витаминов D2 и D3 для медицины, D-витаминных препаратов для сельского хозяйства и промышленное получение провитаминов. В основу описанных методов получения витамина D3 и его провитамина
положены многолетние разработки автора, связанные с совершенствованием технологии производства витамина D3 на Киевском и Ереванском витаминных заводах.
В заключительной главе, которая может служить справочным пособием, приведены физико-химические константы (температура плавления, удельное вращение, условия кристаллизации), данные УФ-, ИК-, ЯМР- и масс-спектроскопии витаминов D, их метаболитов, провитаминов и других родственных им веществ (всего более 250 соедвнений).
Автор надеется, что представленные в монографии данные будут способствовать развитию таких важных исследований в области химии витаминов D, какими в настоящее время являются: синтез новых аналогов витаминов D, обладающих специфическим биологическим действием; поиски путей промышленного получения активных метаболитов витамина D3; дальнейшее совершенствование технологии и методов аналитического контроля в производстве провитаминов и витаминов D.
ГЛАВА । История открытия и исследования витаминов D
История открытия и исследования витаминов D тесно связана с изучением рахита — широко распространенного и известного с древности заболевания растущего организма. Признаками этой болезни являются нарушение роста костей и их размягчение, искривление позвоночника, верхних и нижних конечностей и грудной клетки, что связано с нарушением гомеостаза кальция в организме.
Основные этапы изучения рахита с начала XIX века были обобщены Rosenberg [7661.
1822 г.— Trousseau в книге «Клиническая медицина» для лечения рахита рекомендовал жир печени трески, a Sniadecki писал о целебном эффекте солнечного света.
1890 г.— Palm связывал распространение рахита с недостатком солнечного света.
1905 г.— Buchholz наблюдал случай излечивания рахита солнечным светом.
1906 г.— Hopkins предположил, что рахит обусловлен отсутствием в пище «некоторых компонентов» и причину рахита нужно искать в питании.
1913 г.— Raczynski установил благотворное влияние солнечного света на увеличение содержания кальция в крови.
1919 г.— Mellanby показал, что рахит может быть вь!зван у животных определенной диетой и его можно предотвратить или лечить жиром печени трески. Однако он неправильно приписал антирахитическую активность недавно открытому жирорастворимому витамину А.
Huldschinsky на основании изучения многочисленных клинических данных доказал большое значение облучения пищевых продуктов УФ-све- том для лечения рахита.
1920—1921 гг.— Sherman и Pappenheimer, а также McCollum и Simmonds успешно излечивали рахит у крыс специальной диетой.
1921 г.— Hess и Unger обнаружили, что облучение пациентов УФ-све- том, приводящее к излечиванию рахита, можно заменить облучением пищевых продуктов; следовательно, в пище и коже содержатся соединения, которые активируются УФ-светом в антирахитические вещества.
1922 г.— Zucker, Pappenheimer и Barnett установили, что антирахи- тический фактор содержится во фракции ненасыщенных жиров печени рыб.
McCollum и сотрудники впервые показали, что антирахитическое вещество жира печени трески отличается от витамина А, сохраняясь при нагревании и аэрации жира, тогда как витамин А разрушается. McCollum назвал это вещество витамином D. ■
1924 г.— Steenbock с сотрудниками и независимо от них Hess и Weinstock нашли, что антирахитическая активность может быть вызвана облучением животных или пищи УФ-светом. Последнее открытие имело огромное значение в терапии рахита и положило начало исследованиям по химии витаминов D.
В 1924—1925 гг. американские исследователи Hess, Weinstock и Helman (отдел патологии лечебного и хирургического колледжа Колумбийского университета) [411, 412, 4131 и Steenbock и Black (Сельскохозяйственная экспериментальная станция, Висконсинский университет) [832], а также Rosenheim и Webster (Национальный институт медицинских исследований в Англии) [7681 установили, что холестерин при облучении УФ-светом проявляет антирахитическое действие. Однако очищенный через дибромид холестерин теряет эту способность. Было высказано предположение, что холестерин содержит провитамин, который при облучении превращается в антирахитический витамин. Так как этот провитамин, вероятно, также относился к стеринам, то дальнейшие исследования сосредоточились в Геттингенском университете, где работал выдающийся немецкий химик Windaus, который в течение многих лет начиная с 1903 г. занимался'изуче- нием проблемы холестерина. После длительных исследований Windaus и Hess, который продолжал работу вместе с Windaus [946], а также Rosenheim и Webster [770], сотрудничавшие с Windaus, предположили, что провитамином D является эргостерин.
Работы по облучению эргостерина были связаны с большими трудностями, так как получалась низкоплавкая легкорастворимая смола, которая не кристаллизовалась и которую не удавалось разделить на компоненты [652, 933]. Эти исследования были прекращены с целью получить препарат витамина D из эргостерина другим путем. Сначала пробовали воздействовать на эргостерин видимым светом в присутствии фотосенсибилизаторов, например эозина. При этом в зависимости от наличия во время реакции кислорода получали либо пинакон, либо перекись эргостерина. Эти вещества не обладали антирахитическим действием [415] и не представляли интереса для проблемы получения витамина D. Далее были изучены термические реакции (при 225—300° С) и различные химические превращения эргостерина — окисление, гидрирование, дегидратация, изомеризация. В результате было получено много кристаллических производных и детально изучены химические свойства эргостерина. Оказалось, что все эти производные не обладали антирахитической активностью. Однако проведенные исследования способствовали установлению структуры эргостерина. ■
Неудачные попытки получить антирахитические вещества нефотохимическим путем заставили снова вернуться к облучению эргостерина. Первые работы по изучению фотохимического превращения эргостерина и выделению витамина D проводились в трех основных центрах: в Германии Windaus с сотрудниками работал в химической лаборатории Геттингенского университета; Askew, Bourdillon, Webster и др.— в Национальном институте медицинских исследований в Лондоне и Reerink и Van Wijk — в Голландии.
К 1930 г. работами Windaus с сотр. [949, 950] было установлено, что при облучении эргостерина возникает по крайней мере пять или шесть продуктов, которые в отличие от эргостерина не осаждаются дигитонином. Windaus считал [951], что фотохимическое превращение эргостерина представляет собой сложный процесс, при котором последовательно образуется целый ряд соединений.
Образование сложных 'смесей при фотолизе растворов эргостерина в то время объясняли влиянием кислорода. Вот почему Windaus [952] осуществил облучение эргостерина в атмосфере инертного газа, исключив также кислород при обработке реакционной смеси и выделении продуктов реакции. В результате такого облучения был получен высокоактивный маслообразный продукт. Затем Windaus и др. [955] провели обработку облученной смеси малеиновым или цитраконовым ангидридом для отделения в виде аддуктов ряда побочных веществ, после чего выделили кристаллический продукт, обладающий высокой антирахитической активностью. Windaus назвал его витамином Dj [954].
Витамин Dj Windaus представлял собой длинные иглы с температурой плавления 124—125°, Хмакс в УФ-спектре при 265 нм, [а]д +140,5° (ацетон) и [а] о +127° (спирт).
Практически одновременно с Windaus кристаллические препараты были получены Reerink и Wijk [760] в Голландии и Bourdillon с сотр. [116, 117, 112] в Англии. Голландские ученые, тщательно изучив фотохимическую изомеризацию эргостерина, установили условия получения максимально высокого выхода антирахитического вещества. Для этого оказалось необходимым применять для облучения УФ-свет с длиной волны не менее 284 нм, проводить конверсию эргостерина не более чем на 50%, а также полностью исключить кислород.
В 1931 г. Reerink и Wijk [760] получили кристаллический продукт с высокой антирахитической активностью при облучении эргостерина ^в указанных условиях до 25%-ной конверсии. После полного отделения не- превращенного эргостерина в виде дигитонида и упаривания фильтрата была получена белая кристаллическая масса, которую кристаллизовали из этанола или метанола, и получили продукт с т. пл. 115—117° и [а!о + + 100° (эфир).
В то же время в Лондоне Bourdillon с сотр. [116, 117, 112] провел облучение эргостерина УФ-светом и, применив высоковакуумную перегонку и фракционную конденсацию, выделил из многокомпонентной реакционной смеси кристаллический продукт с т. пл. 113—115° (из водного спирта или ацетона) с высоким оптическим вращением [alo +260°. Авторы назвали выделенное вещество кальциферолом [112]. Вскоре было установлено, что ни витамин Dj, полученный Windaus, ни кальциферол английских исследователей не являются чистым витамином D. Однако уже в 1932 г. в Германии [957] и Англии [119] был получен чистый кристаллический антирахитиче- ский препарат. Linsert [954, 957] из «И. Г. Фарбениндустри» выделил из витамина DT активное вещество и назвал его витамином D2. Оказалось, что витамин Di представлял собой молекулярный комплекс (1 : 1) витамина D2 с неактивным изомером, названным люмистерином [953, 958]. Витамин П2 имеет т. пл. 115—116°, [alo +102° (спирт), [а!о +85° (ацетон) и Хмакс в УФ-спектре при 265 нм.
Windaus сравнил свой витамин с английским препаратом и предположил, что последний содержит продукты термического разложения, образовавшиеся при высокотемпературной вакуумной перегонке. Вскоре Askew, Bruce и др. [1181 сообщили о разделении с помощью динитробензоатных эфиров их «старого» кальциферола на два компонента — «кальциферол новый» и изомер, названный «пирокальциферол». Последний образуется в результате нагревания витамина D2 и имеет высокое оптическое вращение lalo +502° (спирт). «Новый кальциферол» английских исследователей по температуре плавления и удельному вращению был полностью идентичен
витамину D2 Linsert. Эти два названия антирахитического витамина совершенно эквивалентны и оба употребляются в настоящее время. Получение кристаллического витамина D2 из продуктов облучения эргостерина сделало возможным его широкое терапевтическое применение.
Но идентичен ли синтетический препарат витамина D2 природному антирахитическому фактору жира печени рыб — оставалось неизвестным вплоть до 1936 г. Это объясняется тем, что в жире печени рыб антирахи- тическое вещество содержится в ничтожных количествах и выделение его связано с большими экспериментальными трудностями. Этим вопросом занимались многие исследователи, и Brockman [185] из биохимической лаборатории Геттингенского университета первым достиг успеха. Осенью 1935 г. по предложению Windaus он начал работу по выделению витамина из жира печени тунца. После 300-кратного обогащения жира Brockman удалось получить концентрат, который он этерифицировал 3,5- динитробензоилхлоридом. В результате хроматографического разделения эфиров на колонке с А12О3 в смеси бензол — бензин получено светложелтое масло, которое закристаллизовалось после обработки смесью ацетон — метанол. После многократной кристаллизации Brockman получил 3,5-динитробензоат в виде желтых игл с т. пл. 128—129° и [а]о +100°, который отличался от динитробензоата витамина D2.
В то же время Windaus, Lettre и Schenk [962, 963] начали исследования по получению 7-дегидрохолестерина и облучению его УФ-светом. Выделенный ими новый витамин, названный витамином D3 или холекальциферолом, и витамин, полученный Brockman из жира печени тунца, оказались идентичны.
Несколько позднее Brockman и Busse [186] выделили антирахитический витамин из жира печени палтуса, и он также оказался идентичным витамину D3. Grab [353] провел биологические испытания витаминов D2 и D3 и витамина из жира тунца и установил, что на крыс все препараты действуют одинаково, а у цыплят витамин D2 очень слабо активен, тогда как действие витамина D3 и витамина тунцового жира одинаковое и в десятки раз сильнее, чем витамина D2.
Таким образом, было установлено, что не витамин D2, полученный из облученного эргостерина, а витамин D3 является природным антирахити- ческим витамином. •
После выделения витамина D2 необходимо было установить его структуру. В 1932 г. еще не было окончательно выяснено даже строение эргостерина, поэтому Windaus, а также английские ученые из Манчестерского университета во главе с Heilbron провели многочисленные исследования по выяснению структуры эргостерина. Эти работы были завершены к 1934 г. [9611 и довольно подробно описаны в книге Л. Физер и М. Физер [68]. Было установлено, что эргостерин (I) является трижды ненасыщенным вторичным спиртом с эмпирической формулой С28Н44О, содержащим гидроксильную группу в кольце А при С3 в [3-положении и двойные связи в кольце В при С5—С6 и С7—С8 и в боковой цепи при С22—С23.
Строение витамина D2 было установлено в 1935—1936 гг. Windaus с сотр. [964, 965] и Heilbron с сотр. [397, 399]. Общепринятая в настоящее время пространственная конфигурация молекулы витамина D2 (II) была предложена Crowfoot Hodgkin с сотр. [219, 221, 222] в 1963 г.
В 1934—1935 гг. было установлено, что витамин D2, как и эргостерин, является вторичным спиртом, содержит двойную связь при С22 и С23, суммарная формула его С28Н44О. Витамин D2 способен присоединить малеиновый ангидрид и, следовательно, имеет по крайней мере две конъюгирован-
ные двойные связи. При гидрировании он поглощает 4 моля водорода, тогда как эргостерин — 3 моля и, очевидно, фотохимическое превращение сопровождается разрывом кольца с образованием еще одной ненасыщенной связи.
Для дальнейшего выяснения структуры витамина D2 (II) Windaus и Thiele [964] получили аддукт витамина D2 и малеинового ангидрида (Ш), а после мягкого гидрирования (III) — его дигидропроизводное (IV).
■Озонолизом последнего был получен ненасыщенный бициклический кетон Ci9H34O (V), который не содержал ни гидроксильной группы, ни остатка малеиновой кислоты, но имел кольца С и D, алифатическую боковую цепь СдН19. Окисление витамина D2 КМпО4 приводит к образованию ненасыщенного кетона (VI), при каталитическом гидрировании которого образуется насыщенный кетон (V), а при озонолизе витамина D2 происходит расщепление по двойной связи С22—С23 и образование кетокислоты (VII) [9651. Следовательно, витамин D2 содержит неизмененные кольца С и D и боковую цепь эргостерина, одна из двойных связей занимает положение при С,—Cg, а разрыв кольца В при фотохимическом превращении происходит, вероятно, по связи Сд—С10. Подтверждение этого было получено при дегидрировании дигидропроизводного (IV): с Pd на угле получали р-наф- тойную кислоту (VIII) и нафталин (IX), а с селеном — 2,3-диметилнафталин (X). Из этого следует, что (IV) имеет гидронафталиновую систему с |3-карбонильным заместителем. Такое гидронафталиновое кольцо может образоваться только при присоединении малеинового ангидрида по С6 и С19:
. Следовательно, в молекуле витамина D2 имеется двойная связь при С10—С19 и метиленовая группа при С10. На основании приведенных данных Windaus и сотр. [9641 определили формулу витамина Г)2 как (II).
Правильность этой формулы подтвердили Heilbron и сотр. [3991. При окислении витамина D2 хромовым ангидридом или перманганатом калия они получили альдегид, который был очищен в виде кристаллического семикарбазона. Для этого альдегида были установлены формула С21Н34О и строение (XI).
0 XII
Присутствие экзоциклической метиленовой группы подтверждено озонолизом витамина D2, в результате которого был получен формальдегид, охарактеризованный как димедоновое производное, а также выделена кетокислота XII — С13Н20О3 (в виде кристаллического семикарбазона), которая может быть получена при расщеплении молекулы витамина D2 по С22—С23 и С7—Сд ненасыщенным связям.
Строение витамина D3 (XIII) отличается только наличием боковой цепиСтроение витамина D3 (XIII) отличается только наличием боковой цепиВыяснению конфигурации гидроксильной группы при С3 витаминов D2 и D3 был посвящен ряд работ [141, 581, 142, 582], а в 1953 г. Prelog и др. [724, 725, 229] с помощью асимметрического синтеза доказали, что гидроксильная группа имеет 0-конфигурацию.
Строение витамина D3 (XIII) отличается только наличием боковой цепи
Строение витамина D3 (XIII) отличается только наличием боковой цепи
Конфигурация молекулы витамина D2 была установлена Crowfoot, Hodgkin и сотр. [219,221,222] в 1948—1963 гг. на основании кристаллографического анализа и рентгеноструктурных измерений, проведенных для 4-йод-5-нитробензоата витамина Г)2. Эти исследования показали, что витамины группы D имеют структуру (II) с S-транс-диеновой системой, а не стерически затрудненную S-цис-конфигурацию (XV), как изображали ее Windaus, Heilbron и др. [965, 399].
Диеновая система между С5 и С8 является трансоидной и копланарной, а между С6 и С19 — цисоидной и поэ
тому более реакционной. Витамин D является цис-изомером по С5—С6- двойной связи, так как С7 находится в цис-положении к С1о.
Согласно решению комиссии по номенклатуре биологической химии Международного союза чистой и прикладной химии (I UP АС) [501], витамины D2 и D3 определены как стероиды. Химические названия витамина D2: 9,10-секоэргоста-5,7,10(19), 22-тетраен-30-ол; витамина D3 — 9,10-секо- холеста-5,7, 1О(19)-триен-30-ол (9,10-секо означает размыкание кольца В между С, и С10).
Тривиальные названия витаминов D2 и В3-соответственно эргокальциферол и холекальциферол. Международный союз по биохимии (IUB) и IUPAC предлагают принять эти названия как формальные [501, 502]. Однако Международный Союз питания (IUNS) не признает правильной номенклатуру ШРАС—IUB, по которой витамины определяются как простые соединения.
глава и Механизм действия витаминов D в организме и их метаболизм
После открытия витаминов D в 20—30-х годах и изучения их физиологической роли длительное время оставались невыясненными вопросы, касающиеся механизма действия и метаболизма этих витаминов. Сложность исследования биологических свойств витаминов D состояла в том, что количества витамина, на которые реагируют животные, ничтожно малы и поэтому требуются чрезвычайно чувствительные методы их обнаружения. Несмотря на то что исследования по изучению механизма действия и метаболизма витаминов D проводились в 40-е и 50-е годы, отсутствие меченых препаратов достаточно высокой удельной активности, методов выделения и анализа при работе с физиологическими дозами не позволило обнаружить биологически активных метаболитов витаминов D. В результате было сделано неправильное заключение о том, что действие витаминов D в организме не связано с их метаболическими изменениями.
Лишь в начале 60-х годов были начаты исследования, которые привели к выяснению механизма действия и метаболизма витаминов D. Наши современные представления о роли витаминов D в организме получены благодаря работам нескольких групп биохимиков, возглавляемых Kodicek в Кембриджском университете (Англия), DeLuca в Висконсинском университете, Norman в Калифорнийском университете, Wasserman в Корнельском университете (США) и др.
Современные данные по механизму действия и метаболизму витаминов D подробно изложены в обзорных статьях [247, 931, 3, 254, 677, 692, 62^ 260, 565, 303, 588, 680, 805, 9321.
БИОХИМИЧЕСКАЯ ОСНОВА ДЕЙСТВИЯ ВИТАМИНОВ D
Для нормального развития и функционирования организма человека и животных необходима постоянная концентрация кальция в крови. Это достигается путем всасывания кальция из пищи через стенки кишечника в кровь, а также мобилизацией кальция из костной ткани скелета. Основным веществом, ответственным за это постоянство, является витамин D.
Согласно современным представлениям, в организме при недостатке витаминов D происходят следующие основные изменения [621: нарушение всасывания кальция и фосфора в кишечнике; нарушение способности к мобилизации кальция из костной ткани; аномальное снижение концентрации кальция и фосфора в плазме крови; нарушение минерализации кост-
ной ткани, лежащее в основе пато-морфологической картины рахита; уменьшение реабсорбции неорганического фосфата в почечных канальцах.
Таким образом, основными точками приложения действия витаминов D являются так называемые ткани-мишени — кишечник, кость и почки.
ТРАНСПОРТ КАЛЬЦИЯ В КИШЕЧНИКЕ
Еще в 30-е годы было установлено, что при рахите нарушается абсорбция кальция в кишечнике и что витамины D повышают его абсорбцию в кишечнике рахитичных животных. Длительное время многочисленные исследования были направлены на выяснение механизма транспорта кальция через эпителиальный барьер кишечника.
В опытах in vivo и in vitro было показано [692, 104, 105], что всасывание кальция в кишечнике происходит путем как диффузии (по градиенту концентрации), так и активного транспорта (против градиента концентрации) и что для процесса транспорта кальция через стенку кишечника необходимы кислород и энергетический субстрат.
Активный процесс переноса кальция через стенку кишечника протекает в две стадии: поступление кальция в слизистую оболочку и переход кальция из слизистой оболочки в серозную. Обе они активируются витамином D.
При рахите проницаемость мембраны клеток слизистой ткани кишечника снижена, что затрудняет поступление кальция в клетки и уменьшает количество кальция, которое может быть перенесено путем диффузии или в результате активного транспорта через базальную мембрану клеток в кровь.
Витамины D специфически действуют на структуру и свойства липопротеидной мембраны микроворсинок слизистой ткани кишечника, повышая ее проницаемость для пассивно диффундирующего кальция и одновременно стимулируя активный транспорт этого катиона.
Огромное значение для понимания механизма действия витаминов D и особенно их роли в транспорте кальция в кишечнике имело открытие Wasserman и Taylor, сделанное в 1966 г. [928]. Они показали, что при введении витамина D3 рахитичным животным наблюдается появление в тканях-мишенях специфического кальцийсвязывающего белка (СаСБ), отсутствующего у рахитичных животных. СаСБ был обнаружен во всех сегментах тонкого кишечника и в почках, т. е. в тканях-мишенях витамина D3. В тонком кишечнике концентрация СаСБ уменьшалась в следующем порядке: двенадцатиперстная кишка, тощая кишка, подвздошная кишка, что коррелирует с относительной способностью этих сегментов к абсорбции кальция [864]. При исследовании образования СаСБ у цыплят под влиянием витаминов D2 и D3 установлено, что последний более эффективен в синтезе СаСБ, что соответствует физиологическому эффекту витаминов D2 и D3.
После выделения и очистки СаСБ из слизистой кишечника цыплят был определен его молекулярный вес — 24 000—28 000 [929] и установлено, что 1 моль белка связывает четыре атома кальция.
Современные исследования по транспорту кальция и синтезу СаСБ в слизистой кишечника показали, что после введения рахитичным цыплятам витамина D3 усиленной абсорбции кальция в кишечнике предшествует синтез СаСБ в тканях [692], причем СаСБ является единственным белком, вырабатываемым кишечником в ответ на введение витамина D3. Именно для синтеза этой транспортной системы кальция требуется так называемый
лаг-период—интервал между введением витамина D3 и проявлением его действия. Кроме того, это время необходимо для метаболических превращений витамина D3, которые будут рассмотрены ниже.
МОБИЛИЗАЦИЯ КАЛЬЦИЯ ИЗ КОСТИ
Важной функцией витаминов D является способность вызывать мобилизацию кальция из кости, причем процесс мобилизации происходит даже при физиологических дозах витамина D. Очевидно, мобилизацию кальция из кости нужно рассматривать как процесс, необходимый для поддержания концентрации кальция и фосфора в крови на нормальном физиологическом уровне. Процесс мобилизации кальция из кости происходит в большей мере под влиянием метаболитов витаминов D, а не самих витаминов D.
В процессе транспорта кальция в кишечнике основную роль играет витамин D3, а в мобилизации кальция из кости участвует также паратиреоидный гормон [3481. Паратиреоидные железы «чувствуют» снижение концентрации кальция в плазме и в отвёт на это вырабатывают паратиреоидный гормон, который сразу же «включается» в кость, вызывая мобилизацию кальция. Однако паратиреоидный гормон не может мобилизовать кальций из кости у животных с недостаточностью витаминов D. Важный гомеостатический процесс мобилизации кальция кости происходит только при совместном действии витаминов D и паратиреоидного гормона [692].
МИНЕРАЛИЗАЦИЯ КОСТНОЙ ТКАНИ
Главной точкой приложения витамина D в организме является обеспечение нормальной кальцификации кости путем доставки кальция и фосфора в места кальцификации. При недостаточности витамина D процесс минерализации органического матрикса кости нарушен. Так как кровь в норме насыщена кальцием и фосфором, то считается, что кальцификация кости представляет собой катализируемую кристаллизацию оксиапатита из пересыщенного раствора [692]. При рахите степень насыщения плазмы кальцием и фосфатом недостаточна для образования и роста кристаллов оксиапатита и кальцификации костной ткани. Следовательно, при недостатке витаминов D нарушение кальцификации костной ткани обусловлено уменьшением концентрации кальция и фосфора в крови вследствие замедления всасывания их в кишечнике. В связи с этим предполагают, что витамины D необходимы для нормальной кальцификации кости, потому что они обеспечивают синтез СаСБ, стимулирующего транспорт кальция через кишечник и таким образом поддерживающего необходимое его количество в сыворотке крови.
РОЛЬ ВИТАМИНОВ D В РЕАБСОРБЦИИ ФОСФОРА В ПОЧЕЧНЫХ КАНАЛЬЦАХ
Почти во всех исследованиях основное внимание было направлено на изучение роли витаминов D в метаболизме кальция и мало изученным оставался метаболизм фосфата, хотя рахит у всех видов животных сопровождается низким содержанием не только кальция, но и фосфора [2601.
В настоящее время установлено, что витамин D3 стимулирует всасывание фосфата в кишечнике, однако механизм этого процесса, как и механизм переноса фосфата через кишечник, окончательно не выяснен [692].
ВЫДЕЛЕНИЕ, ИДЕНТИФИКАЦИЯ
И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА АКТИВНЫХ МЕТАБОЛИТОВ ВИТАМИНОВ D
При выяснении механизма действия витаминов D необходимо было прежде всего установить, претерпевают ли они метаболические превращения в организме. И хотя длительное время считали, что витамины D не изменяются, многие факты опровергали это представление. Одной из причин, побудивших к изучению метаболизма витаминов D, является получение данных о том, что между введением витамина и началом действия существует лаг-период (4—12 ч для крыс, 12—18 ч для цыплят), необходимый для «доставки» витамина к тканям-мишеням или же для метаболических преобразований молекулы витамина D в активную форму.
В решении этих вопросов важную роль в начале 60-х годов сыграли следующие обстоятельства [2601:
синтез радиоактивного витамина D3 с высокой удельной активностью позволил проводить исследования по метаболизму витамина D3 с физиологическими дозами;
разработка новых методов тонкослойной и колоночной хроматографии позволила обнаружить, разделить и исследовать метаболиты витамина D3;.
достижения высокоразрешающей масс- и ЯМР-спектроскопии позволили идентифицировать структуру метаболитов.
Одним из первых меченный 14С витамин D2 получил Kodicek в 1955 г. [563]. Однако удельная радиоактивность препарата была очень низкой — от 5 до 63 имп/мин/ и. е. Совместные работы Norman и DeLuca в 1963 г. [671] привели к получению радиоактивного витамина D3, меченного тритием, но его активность также была недостаточно высока (450—1050 имп/ мин/ и. е.). И лишь в 1966 г. Neville и DeLuca [668] получили 1,2-3Н-вита- мин D3 с удельной активностью 26 000 имп/мин/и. е., что позволило начать эксперименты с физиологическими дозами этого витамина.
Для получения и очистки радиоактивных витаминов D, как и для последующего изучения их метаболизма, необходимы были удовлетворительные методы разделения витаминов D и родственных им стеринов. Различия этих соединений скорее по конфигурации, чем по функциональным группам или молекулярному весу, очень усложняли их хроматографическое разделение. В 1963 г. Norman и DeLuca [672] разработали два способа разделения витаминов D2 и D3, их провитаминов и некоторых фотодериватов при хроматографировании на колонках или на тонкослойных пластинках с кремневой кислотой. Используя колонки и тонкослойные пластинки с силикагелем, Parekh и Wasserman [696] получили меченный тритием чистый препарат витамина D3. Метод количественного определения витаминов D после хроматографирования на ТС-пластицках с силикагелем или окисью алюминия и элюции метанолом описали Ponchon и Fellers [722]. В этот период был опубликован еще ряд работ по хроматографии витаминов D и подобных соединений, которые способствовали решению проблемы обнаружения, выделения и идентификации метаболитов витаминов D [294, 720, 422, 431].
Уже первые исследования с радиоактивными препаратами витаминов D показали, что в течение 1—4 ч после внутривенного введения 1,2-3Н-ви- тамина D3 у крыс наблюдается максимальное’'проникновение радиоактивности почти во все органы, в том числе в ткани-мишени, кость и кишечник [247]. Стало ясно, что витамины D или продукты их превращения поступают
к местам действия задолго до проявления физиологической реакции и длительный лаг-период в действии витаминов D не связан с длительностью их транспорта к тканям-мишеням.
Kodicek [692] первый выдвинул предположение о том, что витамин D перед проявлением своего биологического действия должен быть преобразован. Однако в 1957 г. он обнаружил метаболиты витамина D лишь в виде неактивных «продуктов распада». Активные метаболиты витамина D3 впервые обнаружили в 1964 г. Norman и DeLuca [6731. В 1966 г. Lund и DeLuca [6081 при экстрагировании метанолом и хлороформом тканей животных, получавших радиоактивный витамин D3, и последующем хроматографическом разделении смеси веществ на колонке с кремневой кислотой показали, что большинство тканей содержит по крайней мере четыре более полярных, чем витамин D3, метаболита.
Как установили Fraser и Kodicek [329, 3301, а также Lund и DeLuca [609], одна группа активных метаболитов оказалась эфирами витамина D3 и жирных кислот с длинной цепью, таких, как пальмитиновая, линоленовая, стеариновая и олеиновая. Одновременно японские ученые провели исследования по выяснению биохимической роли сульфата витамина D2 и установили, что этот эфир образуется при инкубации витамина D2 с гомогенатами печени крыс, а его антирахитическая активность такая же, как у витамина D2 [781, 852, 420, 782]. Эфиры, вероятно, представляют собой неспецифические запасные формы витаминов D в организме [331]. Однако наиболее интересные открытия в метаболизме витаминов D были впереди.
25-ОКСИХОЛЕКАЛЬЦИФЕРОЛ (25-OHD3)
При исследовании активных метаболитов витамина D3 особое внимание Lund и DeLuca [608] привлек один из них, хроматографически более полярный, чем витамин D3. Он был обнаружен в больших количествах в кости, печени и крови и оказался таким же активным при лечении рахита, как и витамин D3. Далее было показано, что этот полярный метаболит активирует транспорт кальция в кишечнике и стимулирует его мобилизацию из костной ткани, увеличивая таким образом концентрацию кальция в сыворотке крови [644]. Кроме того, метаболит активирует транспорт кальция в кишечнике быстрее, чем витамин D3. Интересные и важные биологические свойства этого метаболита побудили Blunt, DeLuca и других выделить его в чистом виде из плазмы крови свиней, которые получали ежедневно в течение 26 дней 250 000 и. е. витамина D3, и исследовать его структуру [166, 167]. Выделенное вещество имело максимум в УФ-спектре при длине волны 265 нм с высоким коэффициентом экстинкции, как и витамин D3. При газожидкостной хроматографии наблюдались два пика (пиро- и изопироизомеры), аналогично витамину D3. На основании этого был сделан вывод, что метаболит имеет структуру, подобную витамину D3, по крайней мере в области триеновой системы.
Масс-спектры витамина D3 и его метаболита отличаются друг от друга. Молекулярный вес метаболита равен 400 (С27Н44О2), а витамина D3 — 384 (С27Н44О), что свидетельствует о дополнительной гидроксильной группе в молекуле метаболита. Наличие в обоих масс-спектрах пика с т!е 271, соответствующего основному скелету молекулы, указывает на то, что вторая гидроксильная группа находится в боковой цепи. Пик с т!е 59 в спектре метаболита образуется при разрыве связи С24—С25 с гидроксильной группой при Сг5. Подтверждением того, что гидроксильная группа находится при С^, является ЯМР-спектр метаболита. Синглет шести протонов двух
метильных групп при 6 1,20 м. д., как в 25-оксихолестерине, и отсутствие дублета при 6 0,87 м. д., обусловленного взаимодействием вторичных метильных групп С2в и С27 с третичным водородом, свидетельствуют о положении гидроксильной группы при С25.
Структура и фрагментация витамина D3 и 25-OHD3.Структура и фрагментация витамина D3 и 25-OHD3.
Структура и фрагментация витамина D3 и 25-OHD3.
Структура и фрагментация витамина D3 и 25-OHD3.
Таким образом, первый активный метаболит был идентифицирован как 25-оксихолекальциферол. Наиболее убедительным доказательством его строения явился химический синтез, осуществленный в лаборатории DeLuca в 1969 г. [1681.
Аналогичный активный метаболит витамина D2 был выделен из плазмы крови при введении массивных доз эргокальциферола и идентифицирован с помощью УФ-, масс- и ЯМР-спектров как 25-оксиэргокальциферол [842, 8431. Этот метаболит также оказался биологически более активным, чем витамины D2 и D3, при лечении рахита у крыс. Скорости 25-гидроксилирования витаминов D2 и D3 одинаковы [518].
• Следовательно, витамины D2 и D3 перед тем как проявить свое физиологическое действие должны превратиться в активную форму, какой является их 25-оксипроизводное.
После выделения, идентификации и особенно после осуществления химического синтеза, представившего исследователям необходимое количество 25-OHD3, начались детальные исследования биологической активности этого метаболита. Работами DeLuca и сотр. [164, 165] было установлено, что метаболит примерно в 1,4 раза более активен, чем витамин D3, в лечении рахита как у крыс, так и у цыплят. Он начинает активировать транспорт кальция в кишечнике уже через 3 ч после введения, тогда как равные дозы витамина D3 проявляют свое действие через 8—10 ч. Поэтому можно считать, что значительная часть лаг-периода в действии витамина D3 на транспорт кальция в кишечнике и мобилизацию кальция кости необходима для его превращения в активную форму, которой является 25-OHD3.
Очень важным явилось установление факта, что 25-OHD3 действует непосредственно в изолированных тканях-мишенях — кости и кишечнике, тогда как сам витамин D3 не проявляет своего действия даже в больших дозах [868, 689]. Ponchon и DeLuca [7231 установили, что 25-гидроксилирование витамина D3 происходит главным образом в печени. Horsting и DeLuca [439] в опытах in vitro, используя как перфузированную печень, так и ее гомогенаты, показали, что 25-гидроксилирование выполняет ферментативная система печени. .
Некоторое время 25-OHD3 рассматривался как конечная метаболи- тическая форма витамина D3 [565]. Однако дальнейшие исследования
показали, что 25-OHD3 является лишь первым соединением на'пути метаболических превращений витамина D3. В настоящее время образующийся в печени 25-OHD3 считается циркулирующей формой витамина D3, которая транспортируется кровью из печени в почки.
Синтез 25-OHD3, меченного при С26 и С27 [847, 138], позволил проследить дальнейшие превращения этого метаболита в организме.
1 а,25-ДИОКСИХОЛЕКАЛЬЦИФЕРОЛ (1а,25-(ОН)гО3)
В 1968 г. Norman и сотрудники впервые обнаружили более полярный, чем 25-OHD3, метаболит 3Н- витамина D3 в кишечнике [384]. Затем Kodicek с сотр. [584, 583] при введении цыплятам меченного по углероду и водороду (4-14С, 1-3Н)-витамина D3 обнаружил более полярный метаболит в крови, печени, кишечнике, кости и почках. Увеличение полярности этого соединения свидетельствовало о включении еще одной кислородной функции в молекулу 25-OHD3. Кроме того, у нового метаболита обнаруживали потерю трития при С7 при постоянстве 14С. На основании этого Lawson, Wilson и Kodicek впервые сделали вывод о наличии дополнительной кислородсодержащей группы в молекуле 25-OHD3 у первого углеродного атома.
В лаборатории DeLuca [7231 также обнаружили этот активный метаболит в кишечнике и кости, а затем Myrtle, Haussler и Norman [660] подтвердили существование новой активной формы витамина D3 в кишечнике и роль 25-OHD3 как промежуточного соединения при его образовании. В течение последующих двух лет в трех лабораториях — Kodicek, DeLuca и Norman велись интенсивные работы по выделению, исследованию биологической активности и идентификации нового метаболита витамина D3.
При исследовании метаболизма и субклеточного распределения меченого 1,2-3Н- и 26,27-3Н- 25-OHD3 в слизистой кишечника рахитичных крыс Cousins, DeLuca и др. [214, 2151 установили, что он превращается в несколько полярных метаболитов, причем 72% радиоактивности сосредоточено в наиболее полярном из них, локализованном в ядрах клеток кишечника. Наиболее выраженная способность к метаболизму 25-OHD3 наблюдалась в почках и костной ткани, а в плазме сохранялся низкий циркуляционный уровень этого метаболита. Быстрое метаболическое пре-, вращение 25-OHD3 в тканях-мишенях — кишечнике, кости и почках — подтверждало предположение, что 25-OHD3 является циркулирующей, а его метаболит — регулирующей формами витамина D3 [215].
Для выделения полярного метаболита Holick и DeLuca [422] разработали новый гель-жидкостный хроматографический метод, благодаря которому удалось получить чистый метаболит, необходимый для исследования биологических свойств.
Первые данные о биологической активности нового метаболита, полученные Kodicek, Lawson и Wilson [564], свидетельствовали о том, что он по крайней мере в 2,5 раза более активен, чем 25-OHD3, а его присутствие в кишечнике и кости обнаруживается уже через 30 мин после введения 25-OHD3 [586]. Далее Myrtle и Norman [661] показали, что полярный метаболит витамина D3, полученный из кишечника цыплят, более чем в четыре раза активнее витамина D3 и более чем в два раза активнее 25-OHD3 в стимулировании транспорта кальция в кишечнике, причем максимальный ответ наблюдается через 9 ч, тогда как для витамина D3 и 25-OHD3 — через 24—48 ч.
• Одновременно проводились интенсивные поиски органа, в котором происходит образование этого активного метаболита. Хотя Kodicek предполагал, что гидроксилирование 25-OHD3 происходит в почках, наиболее вероятным органом считался кишечник, где данный метаболит был обнаружен и проявлял биологическое действие [214]. Для окончательного выяснения этого вопроса Fraser и Kodicek [332] провели опыты in vitro по инкубированию (4-14С, l-3H)-25-OHD3 с 14 различными органами и тканями и установили, что почки являются единственным органом, где происходит гидроксилирование 25-OHD3. В опытах на рахитичных крысах было установлено, что у нефрэктомированных животных метаболит не образуется, хотя нефрэктомия не влияет на синтез 25-OHD3. Подобные результаты получили затем Norman, Midgett и др. [675] при инкубировании (26, 27-3Н)- 25-OHD3 с гомогенатами печени, кишечной мукозы, кости и почек. Они нашли, что только почки образуют метаболит, идентичный с полученным in vivo из кишечника. Одновременно Gray, Boule и DeLuca [354] также установили, что нефрэктомия препятствует появлению этого метаболита в кишечнике. •
Очень малые количества метаболита в тканях животных «3 нг/г ткани) практически исключали возможность его накопления для химической идентификации. Открытие биосинтеза активного метаболита в опытах in vitro с гомогенатами почек позволило получить это вещество в необходимых количествах, что ускорило установление его структуры.
Идентификацию нового метаболита осуществили практически одновременно три группы исследователей, возглавляемых Kodicek [585], DeLuca [423, 424] и Norman [674].
Для установления структуры метаболит был получен Lawson и др. [585] в опытах in vitro при инкубировании (26-14С, l-3H)-25-OHD3, а Norman и др. [674] — при инкубировании 26,27-3H-25-OHD3 с гомогенатами почек рахитичных цыплят. Holick, Schnoes, DeLuca и др. [424] исследовали препарат, полученный в опытах in vivo из 12,5 кг кишечника 1500 рахитичных цыплят, которым вводили (1,2-3Н)-витамин D3. Haussler и др. [385] выделили этот метаболит из кишечника 1250 цыплят и исследовали его биологическую активность. Все препараты подвергались многократным хроматографическим очисткам, и после того как вещество стало радиохимически и спектроскопически чистым, исследовали УФ-, ЯМР- и масс-спектры метаболита и его триметилсилиловых эфиров.
В масс-спектре метаболита наблюдается пик молекулярного иона с т/е 416, что свидетельствует о наличии в молекуле витамина D3 двух дополнительных гидроксильных групп. Присутствие трех гидроксильных групп в стероидной молекуле подтверждено образованием 3-триметилсилилового эфира (ТМС) с молекулярным весом 632.
Расщепление связи С24—С25 дает интенсивные пики с т/е 59 и 131 в спектре свободного стероида и его ТМС-эфира, что подтверждает наличие гидроксильной группы при С25. В спектре свободного стероида имеются пики с т/е 287 и 269, соответствующие потере боковой цепи с последующим, отщеплением молекулы воды. Это указывает на то, что третья гидроксильная группа находится в стероидном ядре. Масс-спектры витамина D3> 25-OHD3 и некоторых подобных соединений с сопряженной триеновой системой имеют интенсивные пики с т/е 136 и 118 (136 — Н2О). Пик с т/е 136 относится к фрагменту, образованному из кольца А, С6, С7 и С19 [846]. Тот факт, что в масс-спектре метаболита наблюдается сдвиг этих ионов на 16 массовых единиц (т. е. 136 + 16 = 152 и 118 + 16 = 134), свидетельствует о присутствии дополнительной гидроксильной группы в кольце
А. Дальнейшее строгое доказательство неизмененной триеновой структуры типа витамина D дает УФ-спектр с максимумом при X 265 нм.
Для дополнительной гидроксильной группы в кольце А возможными являются только положения при Сь С2 и С4. Присутствие ее при Ci было доказано с помощью каталитического гидрирования над РЮ2 и перйодатного окисления [423]. Кроме того, биосинтез этого соединения из 1-3Н- витамина D3, приводящий к потере трития, также подтвердил, что гидроксильная группа А находится при Q [584].
■ Таким образом была доказана структура нового метаболита, идентифицированного как 1,25-диоксихолекальциферол.
[Структура и фрагментация la,25-(OH)2D3 и его ТМС-эфира.
. . Подтверждением такого строения явился химический синтез этого соединения, впервые осуществленный в лаборатории DeLuca [813]. Кроме того, путем химического синтеза была установлена a-конфигурация гидроксильной группы при Cj и, следовательно, было показано, что новый активный метаболит является 1а, 25-диоксихолекальциферолом.
la, 25-(OH)2D3 был определен как гормон, потому что он удовлетворяет критериям гормональной подлинности — существует только один специфический орган (почки), в котором происходит его биосинтез из предшественника (25-OHD3); почки секретируют la, 25-(OH)2D3 в малых количествах; он транспортируется в ткани-мишени, где накапливается и действует в ядрах клеток-мишеней на уровне транскрипции гена, как и стероидные гормоны [585, 674, 565].
Какова же дальнейшая судьба la, 25-(OH)2D3 в организме? Эксперименты с радиоактивным la,25-(OH)2D3, меченным в двух различных положениях, проведенные Frolic и DeLuca [335, 337], показали, что этот гормон не претерпевает дальнейших превращений, по крайней мере до тех пор, пока не выполнит свои физиологические функции но стимулированию транспорта кальция в кишечнике и мобилизации кальция кости. Таким образом, можно считать, что la,25-(OH)2D3 непосредственно действуют на кишечник и кость.
Выяснению биологической активности la, 25-(OH)2D3 были посвящены многочисленные исследования [676, 336, 253, 432, 872, 406, 204, 407, 575]. Установлено, что этот метаболит вызывает те же ответные реакции, что и витамин D3: стимулирует абсорбцию кальция в кишечнике, мобилизацию кальция из кости, кальцификацию костной ткани и повышение концентрации фосфата в сыворотке крови; la,25- (OH)2D3 является наиболее активной формой витамина D3, он в 10—15 раз активнее последнего [260].
la, 25-(OH)2D3 вызывает абсорбцию кальция в кишечнике в пять раз эффективнее витамина D3 и действует в три раза быстрее [385, 661, 691., 870]. Очень быстрый ответ транспорта кальция в кишечнике после введения la, 25-(OH)2D3 свидетельствует о том, что именно этот метаболит является активной формой в одной из самых важных физиологических реакций. Однако решающая роль именно la, 25-(OH)2D3 в осуществлении транспорта кальция в кишечнике окончательно не была доказана до тех пор, пока не установили, что влияние 25-OHD3 на транспорт кальция в кишечнике предотвращается введением актиномицина D, ингибитора транскрипции ДНК [871, 355, 854]. В то же время при введении la, 25-(OH)2D3 актиномицин D не препятствует транспорту кальция в кишечнике [855]. la, 25-(OH)2D3 способен поддерживать транспорт кальция в кишечнике в течение длительного времени. Holick и др. [431] показали, что у крыс, содержащихся на низкокальциевой диете, действие la, 25-(OH)2D3 сохраняется в течение 96 ч после введения и слабо снижается только через 144 ч.
Согласно работам многих авторов, и прежде всего Norman и сотрудников, в настоящее время установлено, что способ действия la, 25-(OH)2D3 в кишечнике аналогичен действию других гормонов: сначала la, 25-(OH)2D3 соединяется с цитоплазматическим рецептором [8721, а затем транспортируется в ядра, где соединяется с хроматином [383, 384, 870]. В результате происходит синтез кальцийсвязывающего белка и увеличивается транспорт кальция [679].
la, 25-(OH)2D3 стимулирует мобилизацию кальция кости в 5,5 раза активнее, чем витамин D3, и в 3,6 раза, чем 25-OHD3 [997, 427, 853]. В культуре костной ткани la, 25-(OH)2D3 в 100 раз более активен, чем 25-OHD3, тогда как последний активнее витамина D3 [727]. Однако для проявления действия la, 25-(OH)2D3 важное значение имеет способ его введения в организм. Быстрый ответ и высокая активность наблюдаются при внутривенном или парентеральном введении. При оральном введении la, 25-(OH)2D3 сохраняется его высокая активность только в индуцировании абсорбции кальция в кишечнике, тогда как при лечении рахита и стимулировании мобилизации кальция кости он менее активен, чем 25-OHD3 [691], а в кальцификации кости и поддержании концентрации кальция в сыворотке крови его активность даже меньше, чем у витамина D3 [853]. Эти различия в ответе при оральном и внутривенном введении животным обусловлены более быстрым метаболизмом орально введенного la, 25-(OH)2D3 [621].
la, 25-(OH)2D3 играет важную роль в процессе реабсорбции ионов фосфата в почках. Он очень быстро вызывает повышение концентрации фосфата в сыворотке крови животных, получающих низкофосфорную диету [857]. Это повышение в ответ на la, 25-(OH)2D3 даже при отсутствии фосфора в диете, возможно, связано с тем, что la, 25-(OH)2D3 вызывает мобилизацию фосфора из других источников, таких, как мягкие ткани. Окончательно этот вопрос еще не решен, однако ясно, что la, 25-(OH)2D3 также является гормоном, влияющим на транспорт фосфата.
Установлено, что la, 25-(OH)2D3 синтезируется более интенсивно, когда животные содержатся на рационе с низким содержанием кальция или фосфора [4271.
24 R, 25-ДИОКСИХОЛЕКАЛЬЦИФЕРОЛ (24/?, 25-(OH)2D3)
Ранее отмечалось, что при изучении метаболизма 25-OHD3 в хроматографически более полярной фракции метаболитов обнаружено несколько активных соединений. Одновременно с проведением исследований
1 a, 25-(OH)2D3 в лаборатории DeLuca были выделены и идентифицированы еще два активных метаболита.
В 1970 г. еще до идентификации lot,25-(OH)2D3 Suda, DeLuca и др. [8451 изолировали в чистом виде из плазмы крови свиней, получавших большие дозы витамина D3, метаболит, идентифицированный сначала как 21, 25-диоксихолекальциферол. Однако два года спустя Holick и др. [4261, основываясь на УФ-, масс-спектрах и некоторых химических реакциях, точно установили структуру этого метаболита, идентифицировав его как 24,25-диокси холекальциферол.
В УФ-спектре метаболита наблюдается %макс при 265 нм и %мнн при 228 нм, что свидетельствует о присутствии 5,6-цис-триенового хромофора, характерного для витаминов D. В масс-спектре метаболита наблюдается пик молекулярного иона с т!е 416, что предполагает наличие дополнительной гидроксильной группы в молекуле 25-OHD3. Пики с т!е 271 и 253 (271- Н2О), а также 136 и 118 (136 — Н2О) сходны для метаболита, 25-OHD3 и витамина D3 и свидетельствуют о том, что дополнительная гидроксильная группа должна находиться в боковой цепи.
Наличие дополнительной гидроксильной группы при С24 было установлено при обработке метаболита, меченного при С26 и С27 перйодатом, после чего полученный продукт терял почти 95% трития, а в масс-спектре его наблюдался пик молекулярного иона с т!е 356, что может быть только в случае расщепления С24—С25-связи с образованием соответствующего 24- альдегида. Следовательно, дополнительная гидроксильная группа вици- нальна к С25-ОН и находится при С24.
ОН
24R,25-(OH)5D325,26-(OH)2D3
Структура и фрагментация 24R,25-(OH)2D3 и 25,26-(OH)2D3.
Химический синтез 24, 25-(OH)2D3 [576, 7571 полностью подтвердил эту структуру.
DeLuca и сотр. [8581 разработали метод разделения смеси двух стереоизомеров 24/?- и 24S, 25-(OH)2D3 и установили, что образующийся в организме метаболит является 24/?,25-изомером.
При исследовании биологической активности 24/?,25-(OH)2D3 было установлено [1791, что он образуется при нормальных или гиперкальцие- мических условиях. 24/?, 25-(OH)2D3 почти так же активен, как 25-OHD3, в стимулировании транспорта кальция в кишечнике, мобилизации кальция из кости, кальцификации костной ткани и в повышении концентрации фосфата в сыворотке крови [858, 833, 7011. Исследование биологического действия 24/?, 25-(OH)2D3 на крыс и цыплят показало [434, 4001, что у цыплят метаболит значительно менее активен. У нефрэктомированных животных 24/?, 25-(OH)2D3 не влияет на транспорт кальция в кишечнике и его мобилизацию
из костной ткани. Это свидетельствует о том, что активность данного метаболита зависит от его 1-гидроксилирования в почках [858].
Синтез 24, 25-(OH)2D3 in vivo, как и la, 25-(OH)2D3, осуществляется в почках [541]. Его образование происходит значительно медленнее и, следовательно, биологические ответы на 24,25-(OH)2D3 являются более медленными [180].
25, 26-ДИОКСИХОЛЕКАЛЬЦИФЕРОЛ
Этот метаболит был выделен впервые из плазмы крови и идентифицирован с помощью УФ-, масс-спектров и химических реакций Suda, DeLuca и сотрудниками в 1970 г. [846]. Пик молекулярного иона с т/е 416 указывал на две дополнительные гидроксильные группы в молекуле витамина D3. Они должны находиться в боковой цепи, поскольку в масс-спектрах витамина D3 и метаболита имеется идентичный пик с т/е 271, соответствующий потере боковой цепи. Одна из этих гидроксильных групп, очевидно, находится у третичного углеродного атома, так как не образует ацетата. Пик с т/е 367 (М — 18 — 31) свидетельствует о наличии СН2ОН- группы, которая должна быть смежной с третичной гидроксильной группой. Таким образом, две гидроксильные группы должны находиться при Qo и С21 или Сгз и С28. Анализ масс-спектра ТМС-эфира метаболита, а также перйодатное расщепление, в результате которого образуется соединение с молекулярным весом 384, соответствующее 25-кетопроизводному 25, 26- диоксисоединения, подтверждают структуру метаболита, идентифицированного как 25, 26-диоксихолекальциферол. Несколько позже данный метаболит был синтезирован химическим путем [754, 7561. В результате синтеза была получена смесь диастереомеров.
При исследовании биологической активности 25, 26-(OH)2D3 установлено, что он эффективен в транспорте кальция в кишечнике, но не проявляет активности в лечении рахита у крыс и в мобилизации кальция из кости [579, 7011. Биологическая активность синтетической смеси равна 1/4 активности витамина D3 в стимулировании транспорта кальция в кишечнике [7541. Если считать, что один из изомеров неактивен, то активность второго равна половине активности витамина D3, что согласуется с данными Suda и др. [846].
1а, 24 25-ТРИОКСИХОЛ ЕКАЛЬЦИФЕРОЛ (1а, 24, 25-(OH)3D3)
Последний из известных в настоящее время метаболитов витамина D3— la, 24, 25-триоксихолекальциферол впервые был описан Boyle и др. [1801, затем получен in vivo из 25-OHD3, a in vitro из la, 25-(OH)2D3 и из 24,25-(OH)2D3 инкубацией с гомогенатами почек цыплят [431, 539, 334]. Его строение установлено с помощью УФ-и масс-спектров и реакции с перйодатом натрия. УФ-спектр метаболита имеет максимум при X 265 нм, характерный для витаминов D. В масс-спектре наблюдается пик молекулярного иона с т/е 432; это свидетельствует о том, что в молекулу 24, 25- (OH)2D3 включена дополнительная гидроксильная группа.
Пики с т/е 287, 269 (287—Н2О) и 251 (269—Н2О), наблюдаемые при расщеплении С17-С20-связи, имеются также в спектре la, 25-(OH)2D3, подтверждая тот факт, что третья гидроксильная группа находится в основном скелете. Фрагменты с т/е 152 и 134 (152—Н2О) в спектре метаболита, относящиеся к кольцу А + С6+ С7, характерны также для la, 25-(ОН)2В3, что свидетельствует о наличии двух гидроксильных групп в кольце А.
Окончательно строение метаболита установлено при обработке перйодатом натрия, ведущей к получению соответствующего С24-альдегида (М+ 372), образующегося в результате расщепления С24—С25-связи. Кроме того, неизмененные пики ст/еГ52и 134 в масс-спектре альдегида окончательно подтверждают, что дополнительная гидроксильная группа должна быть в кольце А у Ci, так как гидроксильные группы у С4 или С2, находящиеся рядом с гидроксильной группой при Сз, чувствительны к перйодатному окислению.
■ Активность lot, 24, 25-(OH)3D3 в лечении рахита составляет 60% активности витамина D3 и в 20 раз меньше активности la, 25-(OH)2D3. 1а, 24, 25- (OH)3D3 более активен в транспорте кальция в кишечнике, чем в мобилизации кальция кости. И хотя он не так эффективен, как la,25-(OH)2D3, в стимулировании транспорта кальция в кишечнике и при лечении рахита, не исключена его важная физиологическая роль.
. РЕГУЛЯЦИЯ МЕТАБОЛИЗМА ВИТАМИНОВ D '
Одним из наиболее интересных вопросов, связанных с механизмом действия витаминов D, является вопрос регуляции их метаболизма.
Регуляция метаболизма витаминов D происходит уже на уровне 25- гидроксилирования. При повышении содержания витамина D3 в диете в сотни раз наблюдается всего лишь 10-кратное увеличение содержания циркулирующего 25-OHD3 [260, 763]. Биосинтез же наиболее активной гормональной формы витамина D3— la, 25-(OH)2D3 из 25-OHD3 тщательно контролируется в почках путем прямого или косвенного влияния ряда факторов.
Известно, что для нормальной жизнедеятельности организма необходима строго определенная концентрация кальция в крови. Ответственным за это является паратиреоидный гормон, который при снижении концентрации кальция вызывает его мобилизацию из кости, а также кальцитонин, приводящий к снижению уровня кальция вследствие кальцификации костной ткани при его повышении. Оба эти гормона регулируют постоянство кальция в крови за счет внутренних резервов организма. Регулятором процесса поступления экзогенного кальция путем всасывания кальция из пищи в кишечнике является витамин D3, точнее его активная форма — la, 25- (OH)2D3 [3].
Эффективность абсорбции кальция в кишечнике связана с потребностью организма в этом катионе и с содержанием его в диете. Вероятно, в кишеч- 24
ник поступает точная информация о потребности организма в кальции. Ранее считали, что в организме должен секретироваться гормон или некоторый «эндогенный фактор», который и передает в кишечник такую информацию. В настоящее время можно считать, что процесс всасывания кальция регулирует la, 25-(OH)2D3, поскольку последний индуцирует и регулирует биосинтез кальцийсвязывающего белка, транспортирующего кальций через кишечный эпителий в кровь. '
В то же время содержание кальция в диете может регулировать синтез la, 25-(OH)2D3 [437, 4081. Установлено, что когда животных содержат на< гипокальциемической диете, происходит усиленный биосинтез la, 25-(OH)2Ds, который стимулирует транспорт кальция в кишечнике и мобилизацию его из кости, вызывая таким образом повышение концентрации кальция в сыворотке крови [426].
Когда животные содержатся на нормальной или гиперкальциемическсй- диете и когда потребность в обеспечении организма кальцием небольшая, биосинтез la,25-(OH)2D3 подавляется. В этом случае происходит синтез нового метаболита — 24, 25-(OH)2D3, который активен в транспорте кальция в кишечнике, но менее активен, чем la, 25-(OH)2D3, в мобилизации кальция кости. Таким образом осуществляется контроль за абсорбцией кальция на уровне синтеза la,25-(OH)2D3. Введение стронция в диету блокирует биосинтез la,25-(OH)2D3 [6901.
Регуляция синтеза la, 25-(OH)2D3 осуществляется также фосфатом. У животных, содержащихся на низкофосфорной диете, наблюдается увеличение транспорта кальция, что связано с активацией синтеза la, 25-(OH)2D3„ т. е. недостаток фосфора стимулирует образование гормона, который в свою очередь повышает содержание как кальция, так и фосфора в сыворотке крови. -
Важную роль в регуляции синтеза la, 25-(OH)2D3 играет паратиреоидный гормон [348, 7521. Паратиреоидные железы чувствительны к недостатку кальция и секретируют в ответ на гипокальциемию паратиреоидный гормон, который стимулирует образование la, 25-(OH)2D3. Это подтверждается тем, что в результате паратиреоидэктомии у крыс, содержащихся на низкока- льциевой диете, наступает потеря способности синтезировать la, 25-(OH)2D3. и активируется синтез 24, 25-(OH)2D3. В результате введения паратиреоидного экстракта восстанавливается синтез la,25-(OH)2D3 и прекращается синтез 24,25-(OH)2D3 [859]. Паратиреоидный гормон вместе с la, 25-(OH)2D3 вызывает мобилизацию кальция из кости, а la,25-(OH)2D3 вызывает абсорбцию кальция в кишечнике. За счет этих двух источников кальция восстанавливается до нормы его концентрация в сыворотке крови, что в свою очередь вызывает подавление секреции паратиреоидного гормона и синтеза la, 25-(OH)2D3, завершая цикл регулирования по принципу обратной связи.
Подводя итог краткому изложению современных представлений о механизме действия витамина D3, его метаболизме и регуляции, следует отметить, что, несмотря на огромный успех, достигнутый в понимании данных вопросов за последние восемь—десять лет, окончательное выяснение и уточнение механизма этих процессов еще продолжается.
В настоящее время точно установлено, что витамин D3, поступающий с пищей или образующийся в коже из 7-дегидрохолестерина, поступает в печень, где гидроксилируется 25-гидроксилазной системой с образованием 25-OHD3. Затем белковый носитель доставляет его в почки, где 25-OHD3- 1-гидроксилазная система осуществляет синтез la, 25-(OH)2D3. Почечная гидроксилазная система находится под строгим контролем, и синтез 1а,25-
(OH)2D3 регулируется рядом факторов по принципу обратной связи. В зависимости от физиологических условий почки могут синтезировать другие метаболиты — 24,25-(OH)2D3,25,26-(OH)2D3 и la,24,25-(OH)3D3. Следовательно, почки являются эндокринным органом, где синтезируется кальциймо- билизующий гормон, который стимулирует абсорбцию кальция и фосфора в кишечнике, а вместе с паратиреоидным гормоном вызывает мобилизацию кальция из кости, поднимая таким образом уровень кальция в сы
воротке крови.
ГЛАВА IIIГЛАВА IIIСтроение и биологическая активность витаминов D, их метаболитов и синтетических аналогов
ГЛАВА III
ГЛАВА III
Вопрос о связи строения и биологической активности — один из наиболее важных и интересных в химии и биохимии витаминов D. За 45 лет, прошедших со времени получения первого представителя Этой группы витаминов — эргокальциферола, было получено огромное количество синтетических аналогов. Однако структура природного витамина D3 оказалась настолько уникальной, что даже незначительные изменения в строении, синтетических аналогов приводят к снижению или полной потере биологической активности. И лишь очень немногие из производных витамина D3 обладают антирахитической активностью или специфическим D-витаминным действием.
Огромные успехи в выделении, идентификации и исследовании биологических свойств активных метаболитов витаминов D позволили подойти к вопросу направленного синтеза новых биологически активных соединений, заведомо обладающих не только антирахитической активностью, но и избирательным действием на процессы транспорта кальция в кишечнике, мобилизации кальция из кости,, кальцификации костной ткани или резорбции фосфата почками.
ВЛИЯНИЕ СТРУКТУРЫ БОКОВОЙ ЦЕПИ НА БИОЛОГИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ
Впервые синтез антирахитических соединений с 5,6-цис- триеновым хромофором витамина D2 (I), но с отличающейся структурой боковой цепи осуществили Windaus и сотр. В 1933 г. Windaus и Langer [9601 провели гидрирование аддукта ацетата эргостерина с малеиновым ангидридом и получили 22-дигидроэргостерин, который путем фотохимической изомеризации был превращен в витамин D4 (III) [9661. Последний обладал антирахитической активностью лишь немного меньшей, чем витамин D2. С целью дальнейшего упрощения боковой цепи Windaus, Lettre и Schenck [9621 в 1935 г. осуществили синтез 7-дегидрохолестерина, имеющего строение холестерина в боковой цепи, т. е. отличающегося от эргостерина отсутствием не только двойной связи при С22—С23, но и метильной группы при С24. Полученный из 7-дегидрохолестерина витамин D36(II) [963, 7981 оказался наиболее активным из витаминов группы D. Кроме того, быдо установлено [185, 1861, что именно витамин D3 является природным анти- рахитическим витамином.
На основании этих исследований Windaus пришел к выводу, что для проявления антирахитической активности необходимо наличие в молекуле
трех сопряженных двойных связей при С5—С6, С7—Cs и С10—С19, разомкнутого кольца В в молекуле провитаминов, гидроксильной группы при С3 в кольце А, а также боковой алифатической цепи при С17, состоящей из 8—10 атомов углерода. Причем D-витаминная активность зависит от строения этой цепи или, вернее, от части этой цепи с атомами углерода С22—С24.
В подтверждение этих выводов были синтезированы еще три витамина группы D. Из p-ситостерина, наиболее распространенного фитостерина, содержащегося в хлопковом масле, масле из ростков кукурузы, пшеницы и других зерен (по-гречески «сито»— зерно), по методу Windaus и др. [962] был получен 7-дегидро-Р-ситостерин [1001], провитамин ситокальциферола — витамина D5 (IV). Сам витамин D5 в кристаллическом виде не получен.
Из стигмастерина, содержащегося в соевых бобах, был получен 7-де- гидростигмастерин, провитамин стигмакальциферола — витамина D6 (V), который также не был выделен в кристаллическом виде [5961. Кампестерин (стерин масла семян риса, сои и кукурузы) использовали для получения 7-дегидрокампестерина, провитамина кампекальциферола — витамина D7 (VI) [775].
Сравнение биологической активности витаминов группы D показало, что природный витамин D3, имеющий линейную насыщенную цепочку С22—С23—С24, является наиболее активным для всех видов животных и птиц. Введение метильной группы при С24 в p-положение (витамин D4) приводит к некоторому снижению биологической активности (в 1,5—2 раза для крыс [54] и в 5 раз для цыплят). Изменение p-конфигурации метильной группы на «-(витамин D7) в 10 раз снижает активность для крыс и пол-
ностьюлишает соединение активности у птиц. Витамин D2 (двойная связь при С22—С23 и метильная группа при С24 в 0-положении) обладает такой же, как и витамин D3, активностью для крыс, но значительно (в 10—100 раз (353, 419, 209, 54]) ниже, чем активность для цыплят. По другим данным, витамин D2 несколько менее активен, чем витамин D3, и для крыс [7661.
Введение этильной группы при С24 (витамин D6) или этильной группы и двойной связи при С22—С23 (витамин D6) приводит к практически полной потере антирахитической активности. Биологическая активность витаминов D, по данным Rosenberg [766], указана в табл. 1.
Таблица 1. Сравнительная биологическая активность витаминов D [766]
Витамин
Строение участка боковой цепи С28—С2<
Антирахитнческая активность, млн. н. е./г
для крыс
ДЛЯ цыплят
D3
—сн2—сн2-сн2—
22 23 24
СНД
40
40
d2
—СН=СН—СН—
СН3
40
0,4—1,2
—СН2—СН2—СН—
20—30
4—6
D,
—СН2—СН2—СН—
сн3
С2Н6
4
d5
—СН2—СН2—СН— С2нь
1,3
1,0
D6
—СН=СН—СН—
0,1
0,05
Дальнейшим подтверждением важной роли структуры боковой цепи для проявления антирахитической активности явились результаты работ, выполненных в 1954—1955 гг. Louw, Strating и Backer в Гронингенском университете (Нидерланды) [602—605] по синтезу и исследованию биологической активности различных аналогов витамина D3 с разветвленной боковой цепью. Из 3-ацетата А5-холевой и 3-ацетата-А5-бис-норхолевой кислот были получены четыре новых провитамина:
17-(1,6-диметилгептил)-андроста-5,7-диен-30-ол (VII), 17-(1,7-диметилоктил)-андроста-5,7-диен-30-ол (VIII), диметиламид 30-окси-бис-норхола-5,7-диеновой кислоты (IX), диметиламино-бис-норхола-5,7-диен-30-ол (X).
Биологическая активность облученных УФ-светом растворов провитаминов относительно активности витамина D3 составляла для (VII) — 1,8%, для (VIII) — 0,9%, (IX) — 0,4%, (X) — 1,9%. Таким образом, удлинение боковой цепи витамина D3 на одну метиленовую группу приводит к резкому падению (почти в 50 раз) биологической активности. Введение еще одной метиленовой группы (VIII) снижает биологическую активность в два раза. Диметиламидная группа в (IX) почти полностью лишает его активности, тогда как диметиламиногруппа (X) повышает ее в-пять раз по сравнению с активностью (IX). Аналоги витамина D с боковой цепью Желчных
кислот при С17 (XI) почти совсем не обладают биологической активностью 1382]. При облучении УФ-светом провитамина D, содержащего вместо боковой цепи гидроксильную группу — андроста-5,7-диен-Зр,17р-диола (Х1Г),
образуется неактивная смесь веществ [274, 637]. В кристаллическом виде этот аналог витамина D получен Velluz, Amiard и Goffinet [906, 907, 9091.
Отсутствие заместителя при С17 также приводит к полной потере анти- рахитической активности. Velluz и др. [906, 907, 908, 458] при облучении андроста-5,7-диен-Зр-ола [267] получили неактивный этиокальциферол (XIII) в виде бесцветного масла или кристаллического динитробензоата.
Таким образом, боковая цепь и ее строение играют решающую роль в проявлении биологической активности витаминов D.
РОЛЬ ЗАМЕСТИТЕЛЯ ПРИ С3
Windaus отмечал, что для проявления биологической активности витаминов D необходима гидроксильная группа при С3 в р-конфи- гурации. И действительно, многочисленные данные подтверждают это предположение. Так, еще Windaus с сотрудниками синтезировал эпиэргокальциферол и эпихолекальциферол (XIV) — соединения с а-конфигурацией
гидроксильной группы при С3 [977, 980]. Активность эпианалогов в 10— 20 раз меньше активности витаминов D2 и D3.
Замена гидроксильной группы на тиольную (XV) [148, 839] приводит к полной потере D-витаминной активности. При замене гидроксильной- группы на галоиды образуются продукты с разной биологической актив*
При введении хлора или брома вместо ОН-группы образуются полностью неактивные продукты (XVI—XVII) [145].
В случае введения фтора в молекулу можно ожидать других результатов, поскольку фтор, являясь наиболее электроотрицательным из галогенов, в то же время занимает особое положение, связанное с малым размером его атома. Известно [11, что при введении атома фтора в молекулу стероидных гормонов их биологическая активность повышается в десятки, а< иногда и в сотни раз.
Фторированный аналог витамина D3— Зр-фтор-9,10-секохолеста- 5,7,10(19)-триен (XVIII) и его провитамин Зр-фторхолеста-5,7-диен были получены в 1974 г. автором с сотр. [89, 38, 95, 97, 98]. Исследование биологической активности в опытах на цыплятах показало, что фтораналог активен так же, как и витамин D3, по всем антирахитическим тестам и, кроме того, вызывает кальцификацию костной ткани в 1,5 раза эффективнее, чем витамин D3. Таким образом, возможна замена гидроксильной группы при С3 на атом фтора без потери биологической активности.
Замена гидроксильной группы при Сз на кетогруппу приводит к образованию соединения (XIX), которое в 300 раз менее активно, чем D2 [9701, а замена вторичной спиртовой группы на оксиметиленовую (XX) [8401- дает продукты, активность которых в 4 раза ниже активности витамина D3.
При введении дополнительной а-метильной группы при С3 антирахи- тическая активность (XXI) в 80 раз ниже, чем у витамина D3 [8411.
ЭФИРЫ ВИТАМИНОВ D
Впервые фотохимическую изомеризацию эфиров эргостерина и исследование биологической активности продуктов фотопревращения описали в 1927 г. Rosenheim и Webster [769] и в 1928 г. Windaus и Kygh [948]. При облучении ацетата, бензоата, дифенилацетата, оксалата, пальмитата, фенилуретана, нафтилуретана, аллофаната Windaus и Kygh полу- •чили для большинства эфиров полностью неактивные продукты. Rosenheim и Webster обнаружили, что активность ацетата равна активности витамина О2, a Callow [194] установил, что активность бензоата в 8 раз ниже, чем витамина D3.
В настоящее время считается установленным, что все простые и сложные эфиры витаминов D лишены биологической активности, за исключением тех, которые легко гидролизуются в организме. К последним относятся ацетат, этилкарбонат, фосфат, бутират, сульфат, пальмитат.
Биологически активные эфиры витаминов D2 и D3 привлекают внимание многих исследователей, так как химическая устойчивость этих производных гораздо выше, чем соответствующих витаминов, и они могут представлять значительный интерес как стабильные препараты витаминов D для нужд сельского хозяйства, а возможно, и для медицины. Репаи и На- gemann [708, 709, 193] рекомендовали применять ацетат, пропионат, бензоат, олеат, хальмуграт витамина D2 для терапевтических целей вместо витамина D2. .
Сравнительное исследование стабильности витамина D3 и его эфиров (бутирата, пальмитата, пропионата и др.) показало, что эфиры характеризуются более высокой стабильностью [926]. При изучении биологической активности ацетата, бутирата и пальмитата витамина D2, а также бутирата (XXII) и пальмитата (XXIII) витамина D3 Э. А. Петрова и сотр. [60] установили, что активность эфиров составляет 60—80% активности витаминов, а наиболее активен бутират витамина D3.
При исследовании токсического эффекта витаминов D2 и D3 и их ацетатов оказалось, что степень кальцификации почек и сердца у крыс при применении ацетата ниже, чем у крыс, получавших витамин D2 или D3. Токсичность бутирата и пальмитата также ниже, чем неэтерифицированных .витаминов; следовательно, эти эфиры могут представлять интерес для медицинской и ветеринарной практики [55]. .
Ацетат витамина D3 (XXIV) был изучен автором и сотрудниками в виде индивидуального вещества и смеси продуктов фотоизомеризации ацетата 7-дегидрохолестерина в опытах на курах-несушках и цыплятах. Было установлено, что ацетат витамина D3 может быть использован для лечения и профилактики рахита у птиц, а также для повышения тучности кур.
ВВЕДЕНИЕ МЕТИЛЬНЫХ ГРУПП В МОЛЕКУЛУ ВИТАМИНОВ D
Введение метильной группы при С6 в молекулу 7-дегидро- холестерина, эргостерина, 22-дигидроэргостерина, 7-дегидроситостерина и 7-дегидростигмастерина приводит к существенному повышению биологической активности продуктов их УФ-облучения (XXV) по сравнению с активностью соответствующего витамина D 16011.
4,4-Диметилвитамин D3 (XXVI), запатентованный японскими исследователями в 1961 г. [6881, также является высоко активным соединением. При облучении УФ-светом ланостеринового аналога провитамина Ds (ла- носта-5,7-диен-Зр-ол) образуется активный продукт (XXVII) [133].
ОКСИПРОИЗВОДНЫЕ ВИТАМИНОВ D
Введение одной или нескольких оксигрупп в молекулу витаминов D приводит к удивительным результатам — от полной потери биологической активности до получения высокоактивных аналогов витаминов D.
Первым синтетическим гидроксилированным аналогом витамина Ds был lla-оксихолекальциферол (XXVIII), полученный Velluz и Amiard в 1961 г. [9101:
XXVIIIXXIX
Это вещество совершенно лишено D-витаминной активности. Авторы предполагают, что стабилизирующий эффект, оказываемый 11а-гидроксиль- ной группой на структуру холекальциферола, обусловливает исчезновение биологической активности.
Спустя семь лет DeLuca и сотр. [166, 167] выделили из плазмы крови свиней, получавших радиоактивный витамин D3, новый гидроксилированный аналог витамина D3— 25-оксихолекальциферол (XXIX), позднее синтезированный Blunt и DeLuca [168, 259, 248].
Современные, исследования метаболизма и механизма действия витаминов D расширили критерии оценки биологической активности аналогов витаминов D. Если раньше все синтезированные витамины D характеризовались только в отношении их антирахитической активности, то в последнее время важное значение придается способности, индуцируя синтез каль- цийсвязывающего белка, стимулировать транспорт кальция в кишечнике, вызывать мобилизацию кальция кости, способствовать кальцификации костной ткани, вызывать реабсорбцию фосфора в почечных канальцах. В настоящее время способность активных метаболитов и синтетических аналогов витаминов D проявлять какой-либо специфический эффект используется для лечения почечных, костных и других заболеваний.
Исследование биологической активности 25-OHD3 показало, что он не только в 1,4 раза активнее, чем витамин D3, излечивает рахит у крыс и цыплят (164, 165], но и действует гораздо быстрее. Этот метаболит стимулирует также транспорт кальция в кишечнике и его мобилизацию из кости, способствует кальцификации костной ткани, т. е. действует на те же системы, что и витамин D3.
25-OHD3 претерпевает дальнейший метаболизм в организме и после la-гидроксилирования в почках превращается в наиболее активную гормональную форму витамина D3— 1а,25-диоксихолекальциферол (XXX), выделенный и идентифицированный в 1971 г. Kodicek [585], DeLuca (423, 424] и Norman [674].
la,25-(OH)2D3 в 10—15 раз активнее витамина D3 [260]. Он вызывает абсорбцию кальция в кишечнике в 5 раз эффективнее витамина D3 и действует в 3 раза быстрее [385, 691, 661, 870]; стимулирует мобилизацию кальция кости в 5,5 раза активнее, чем витамин D3, и в 3,6 раза, чем 25-OHD3 1997, 427, 853]. В культуре костной ткани la,25-(OH)2D3 в 100 раз более активен, чем 25-OHDs [727], и очень быстро вызывает повышение концентрации фосфата в сыворотке крови [857].
24-Гидроксилирование 25-OHD3 происходит в том случае, когда животные находятся в нормальных или гиперкальциемических условиях, в результате образуется 24,25-диоксихолекальциферол (XXXI) (845, 4261. Синтез двух стереоизомеров (24/?- и 24S), исследование их свойств и сравнение с природным метаболитом (8581 показали, что последний является 24/?,25-(OH)2D3. Активность этого метаболита по всем тестам сравнима с активностью 25-OHD3 [858, 8331; 245-изомер значительно менее активен.
В результате дальнейшего гидроксилирования 24,25-(OH)2D3 при Cj в la,24,25-(OH)3D3 (XXXII) образуется соединение в 20 раз менее активное, чем la,25-(OH)2D3; активность его в лечении рахита составляет всего 60% активности витамина D3. Однако в транспорте кальция в кишечнике этот метаболит проявляет значительную активность [180, 539, 4311.
Полученные синтетическим путем стереоизомеры 24/?- и 245-оксихо- лекальциферола [453, 860, 569] обладают такой же активностью в стимулировании транспорта кальция в кишечнике, как и 25-OHD3, тогда как в мобилизации кальция из кости, кальцификации кости и повышении концентрации фосфата в крови активен только 24/?-изомер (XXXIII). У нефрэкто- мированных животных 24-оксианалоги неактивны, что свидетельствует о необходимости la-гидроксилирования для проявления биологического действия. Синтезированы также два стереоизомера 1а,24-диоксихолекальцифе- рола (XXXIV) [6481, биологическая активность которых исследуется.
Активность 24/?-оксипроизводных витамина D3 свидетельствует о том, Что 24/?-гидроксильная группа может быть пространственным эквивалентом 25-гидроксильной группы, а 24-гидроксилирование является важным физиологическим процессом [833].
Введение гидроксильной группы при С26 в молекулу 25-OHD3 (метаболит 25,26-(OH)2D3 (XXXV)) дает вещество, неактивное в лечении рахита у крыс и в мобилизации кальция кости, но эффективное в транспорте кальция в кишечнике [846, 754, 756, 579].
Bontekoe, Wignail, Rappoldt и др. [172] синтезировали в 1970 г. ряд аналогов 25-OHD3: 20,25-диоксихолекальциферол (XXXVI), 20,25-диокси- 27-норхолекальциферол (XXXVII), 24-окси-25,26,27-тринорхолекальцифе- рол (XXXVIII), 25-окси-26,27-бис-норхолекальциферол (XXXIX) и 25- окси-27-норхолекальциферол (XL). Однако все синтезированные продукты не обладали антирахитической активностью.
Сотрудниками лаборатории DeLuca [806] был синтезирован аналог 25-OHD3— 22-дегидро-25-ОНО3 (XLI). Оказалось, что двойная связь при С22—С23 не снижает биологической активности 25-OHD3 и синтетический аналог обладает более высокой антирахитической активностью, чем вита-
Введение гидроксильной группы при С22 в молекулу витамина D4 (22S- окси-22,23-дигидроэргокальциферол (XLII)) приводит к почти полной потере биологической активности 223]. ■
Синтез радиоактивного витамина D2 [705, 706], превращение его в активные метаболиты 25-OHD2 [842, 843] и la,25-(OH)2D2 (ХЕШ) [2611 и изучение их биологической активности [517, 518] позволили установить, что скорости 25-гидроксилирования витамина D2 в печени и la-гидроксилирования в почках практически не отличаются от скоростей аналогичных превращений в случае витамина D3. Однако la,25-(OH)2D2 в 5—10 раз менее активен у цыплят, чем la,25-(OH)2D3, и, следовательно, различия в биологическом действии витаминов D2 и D3 у цыплят не связаны с их превращением в la,25-диоксипроизводные.
' В кольцо А молекулы витамина D3 гидроксильные группы были введены в положения 2 и 4. Японские исследователи синтезировали 2а-оксихо-
Исследования биологической активности 2а- и 20-OHD3 показали [523, 525], что в высоких дозах как у нормальных, так и у нефрэктомированных животных эти соединения слабо стимулируют транспорт кальция в кишечнике и их активность значительно ниже, чем витамина D3. Установлено также, что 2а-гидроксильная группа ингибирует метаболизм витамина D3, по крайней мере la-гидроксилирование в почках.
Pelc в 1974 г. [707] синтезировал 4а-оксихолекальциферол (XLVII), но этот оксианалог практически лишен биологической активности (3% активности витамина D3 в стимулировании транспорта кальция в кишечнике рахитичных крыс).
Таким образом, из всех перечисленных окси производных витаминов D только выделенные из организма биологически активные метаболиты проявляют значительную активность и в зависимости от локализации гидроксильных групп оказывают специфический активирующий эффект на кишечник или кость. Решающую роль для проявления биологической активности витамина D играет la-гидроксилирование, приводящее к образованию наиболее активного из известных в настоящее время соединений, обладающих D-витаминной активностью,— la,25-(OH)2D3.
В связи с наличием в молекуле la,25-(OH)2D3 трех гидроксильных групп: при Ci в a-положении, при С3 в p-положении и при Сг5 возникает
вопрос о функциониальной роли каждой из них. Для выяснения значения этих гидроксильных групп были синтезированы некоторые аналоги витамина D3. В 1973 г. в лаборатории DeLuca [4291 был синтезирован аналог 1а,25- (OH)2D3, у которого отсутствовала гидроксильная группа при С28— la- окси холекальциферол (la-OHD3) (XLVIII).
При исследовании его биологической активности, проведенном многими авторами, получены несколько отличающиеся результаты. Так, Holick, Schnoes, Semmler и DeLuca [429] установили, что активность la-OHD3 в стимулировании транспорта кальция в кишечнике и мобилизации кальция кости равна активности la,25-(OH)2D3: la-OHD3 вызывает транспорт кальция в кишечнике уже через 3 ч, максимум ответа наблюдается через 6 ч и сохраняет свое действие в течение 24 ч, тогда как действие la,25-(OH)2D3 снижается уже через 6 ч. la-OHD3 вызывает мобилизацию кальция из кости через 3 ч после введения с максимумом ответа через 14 ч.
Barton, Hesse и др. [1341, впервые получившие кристаллический препарат la-OHD3, показали, что последний более чем в 10 раз эффективнее витамина D3 в повышении концентрации кальция в сыворотке тиреоидэкто- мированных—паратиреоидэктомированных крыс, а также установили, что la-OHD3 несколько активнее la,25-(OH)2D3 в стимулировании транспорта кальция в кишечнике.
Haussler и др. [386] в опытах на цыплятах показали, что активность la-OHD3 близка к активности la,25-(OH)2D3: la-OHD3 вызывает увеличение абсорбции кальция в два раза уже через 2—3 ч после введения, что является наиболее быстрым физиологическим ответом. la-OHD3 подобно la,25-(OH)2D3 в 10 раз более активен, чем витамин D3, в мобилизации кальция из кости и в повышении концентрации кальция в плазме.
Kaneko, Yamada и др. [521] в 1974г. получили несколько отличающиеся результаты. Они подтвердили способность la-OHD3 стимулировать транспорт кальция в кишечнике и мобилизовать кальций из кости, однако в отличие от Holick и соавт. [429] Kaneko и соавторы нашли, что максимальный ответ на la-OHD3 наблюдается при дозе, равной дозе 25-OHD3, а не la,25-(OH)2D3, и значительно короче, чем в случае la,25-(OH)2D3. Однако в отличие от 25-OHD3 la-OHD3 стимулирует и транспорт кальция в кишечнике, и мобилизацию кальция из кости у нефрэктомированных и тиропа- ратиреоидэктомированных крыс подобно la,25-(OH)2D3 [650]. Учитывая эти важные особенности биологической активности, все авторы считают, что la-OHD3 может найти применение при лечении почечной остеодистрофии, гипопаратирэоидизма и витамин D-стойких рахитов.
В 1975 г. Holick и др. [433] снова провели тщательное изучение биологической активности la-OHD3 у крыс и нашли, что он в два—пять раз актив-
нее витамина D3, но значительно менее активен, чем la,25-(OH)2D3. Однако la-OHD3 оказывает одинаковое биологическое действие независимо от того, вводится он орально или внутрибрюшинно, в отличие от la,25-(OH)2D3, который, как отмечалось, значительно менее активен при оральном введении. Это может быть также важным фактором при терапевтическом применении препаратов la-OHD3.
При изучении метаболизма радиоактивного 3H-la-OHD3 было установлено [340, 341, 435, 4361, что он очень быстро гидроксилируется при С25 как in vivo, так и in vitro, и появление радиоактивного la,25-(OH)2D3 предшествует биологическим ответам на la-OHD3 и, вероятно, высокая активность этого соединения обусловлена его быстрым (20 мин, [340]) превращением в la,25-(OH)2D3.
Lam, Schnoes и DeLuca [577, 263] синтезировали также 1а-оксианалог витамина D2 и нашли, что его активность близка к активности подобного производного витамина D3.
Остается невыясненным вопрос о функциональной роли гидроксильной группы при С3 в том случае, когда в молекуле витамина D3 имеется гидроксильная группа при Ci. Синтез la-OH-3-эпивитамина D3 [687, 818] и 1а,25-(ОН)2-3-эпивитамина D3 (XLIX) и исследования их биологической активности показали, что изменение конфигурации гидроксильной группы при С3 на а полностью лишает эти соединения биологической активности. В то же время полное удаление гидроксильной группы при С3 приводит к неожиданным результатам. ■
Синтезированный 3-дезокси-1а-оксихолекальциферол (3-D-la-OHD3) (L) оказался биологически высокоактивным соединением. Он был получен практически одновременно в лабораториях Калифорнийского [683] и Висконсинского [578, 262] университетов в 1974 г. При исследовании его биологической активности [683, 679] установлено, что он стимулирует транспорт кальция в кишечнике быстрее, чем витамин О3, и почти так же, как 1а,25- (OH)2D3. Однако 3-D-la-OHD3 оказался менее активным в действии на кость. Как и в случае других метаболитов, кальциймобилизующая костная система оказалась более чувствительной к отклонениям от структуры 1а,25- (OH)2D3, чем механизм транспорта кальция в кишечнике [578]. Большие дозы 3-D-la-OHD3 и более длительное время, необходимое для максимальной ответной реакции, чем для la,25-(OH)2D3, возможно,- обусловлены предварительным 25-гидроксилированием 3-D-la-OHD3.
Norman с сотр. [686] синтезировал 3-D-la,25-(OH)2D3 (LI) и установил, что по крайней мере в стимулировании транспорта кальция в кишечнике его активность равна активности la,25-(OH)2D3.
Таким образом, гидроксильная группа при С3 не имеет решающего значения для проявления биологической активности у аналогов с la-гидроксильной группой.
В то же время структура боковой цепи играет важную роль и у соединений с la-гидроксильной группой. В лаборатории DeLuca синтезирован la-оксианалог, имеющий лишь два углеродных атома в боковой цепи — la-оксипрегнакальциферол (LII) [577, 5801. Этот аналог оказался полностью лишенным биологической активности.
Японские исследователи синтезировали la- и 2р-оксианалоги 17-нор- 17,17-этилендиоксивитамина D (LIII) и (LIV) [783, 784]. Эти соединения не обладают заметной антирахитической активностью у крыс. Аналог 25-OHD3, имеющий в боковой цепи на одну СН2-группу меньше, был синтезирован Holick и др. [425], Johnson и др. [514]. Поданным первых, 24-нор-25-ОНО3 (LV) проявляет примерно такую же активность в мобилизации кальция из кости, как и 25-OHD3, и намного менее активен в стимулировании транспорта кальция в кишечнике.
Norman и сотр. [514] обнаружили, что (LV) снижает стимуляцию витамином D3 ответных реакций в кишечнике и кости, т. е. обладает «антивитаминной» активностью.
ПСЕВДОАНАЛОГИ
1a, 25-ДИОКСИХОЛЕКАЛЬЦИФЕРОЛА
К псевдоаналогам la,25-(OH)2D3 относятся такие соединения, у которых 3|3-гидроксильная группа в результате поворота кольца А на 180° занимает необходимое a-положение при Сх. Однако не все псевдоаналоги оказались биологически активными. Вероятно, существенную роль играет также структура триеновой системы. Тахистерин (LVI), имея псевдо-la-оксигруппу, совершенно не обладает D-витаминной активностью [959].
5,6-ТРАНС-ВИТАМИН D3 И 5.6-ТРАНС-25-ОКСИВИТАМИН D3
5,6- транс-Вит амин D2 впервые получили Verloop, Koevoet и Havinga в 1955 г. [911] при изомеризации витамина D2 йодом в неполярном растворителе, а год спустя Inhoffen и сотр. [478] осуществили его синтез и охарактеризовали витамин и его эфиры.
5,6-траяс-Витамин D3 (LVII) был получен Inhoffen с сотрудниками в 1957 г. [483] также путем катализируемой йодом изомеризации витамина D3, а в 1972 г. Holick, Garabedian и DeLuca [425, 428, 2581 синтезировали его 25-оксипроизводное — 5,6-транс-25-оксихолекальциферол (LVIII) и исследовали биологическую активность обоих соединений. 5,6-транс-Аналоги витамина D3 и 25-OHD3 эффективны в стимулировании транспорта кальция в кишечнике, причем они активны у животных с удаленными почками, как и la,25-(OH)2D3 [587]. Однако эти аналоги отличаются по своему действию на костную систему: в то время как 5,6-траяс-витамин D3 проявляет значительную активность в мобилизации кальция из кости, 5,6- mpaHc-25-OHD3 практически не вызывает резорбции кальция из кости.
Высокая активность обоих 5,6-транс-аналогов в стимулировании транспорта кальция в кишечнике даже у нефрэктомированных животных, подобно активности la,25-(OH)2D3, возможно, обусловлена тем, что при повороте кольца А витамина D3 и 25-OHD3 на 180° зр-гидроксильная группа 5,6-транс-изомеров геометрически локализуется в положении, обычно занимаемом la-гидроксильной группой la,25-(OH)2D3, и, вероятно, выполняет его функции.
Из этих двух 5,6-транс-аналогов наиболее интересен 5,6-транс-25- OHD3. Его необычная способность вызывать транспорт кальция в кишечнике даже у нефрэктомированных животных и в то же время практически полная неактивность в резорбции кальция из кости делают это соединение чрезвычайно активным при лечении костных заболеваний, связанных с хроническими почечными нарушениями, когда необходимо стимулировать транспорт кальция в кишечнике, не вызывая мобилизации кальция из кости. Антирахитическая активность 5,6-транс-25-ОНГ>3 в 10 раз ниже активности витамина D3.
ДИГИДРОТАХИСТЕРИН И 25-ОКСИДИГИДРОТАХИСТЕРИН
Дигидротахистерин-2 (ДГТ2) был выделен Werder в 1939 г. [934] как продукт восстановления тахистерина или витамина D2 натрием в пропаноле. Определение его биологической активности показало, что она составляет 0,5% антирахитической активности витамина D2. В то же время ДГТ2 является исключительно мощным средством повышения концентрации кальция в крови, и поэтому он нашел сразу же клиническое применение при лечении гипокальциемии при гипопаратиреоидизме.
Дигидротахистерин-3 (LIX) получен в 1956 г. van de Vliervoet и др. [890] при восстановлении тахистерина-3 литием в аммиаке.
Hallick и DeLuca [365] синтезировали радиоактивный (1,2-3Н) ДГТ3 и установили, что он, подобно витамину D3, метаболизируется в организме в 25-ОН-ДГТ3 (LX), причем гидроксилирование происходит полностью, независимо от вводимой дозы, и этот процесс не регулируется по принципу обратной связи. 25-ОН-ДГТ3 был синтезирован в лаборатории DeLuca [844, 251, 252]; была изучена биологическая активность ДГТ3 и 25-ОН-ДГТ3 [844, 365, 869, 366].
Изменение структуры витамина D3 путем поворота кольца А на 180° и замена метиленовой группы на метильную приводят практически к полной потере антирахитической активности у ДГТ3. Однако ДГТ3 в больших дозах гораздо более эффективен, чем витамин D3, в увеличении концентрации кальция в плазме крови, вероятно, за счет резорбции кальция из кости, как у гипопаратиреоидных, так и у тиропаратиреоидэктомированных животных.
25-ОН-ДГТ3 оказался более эффективным, чем ДГТ3, как в кишечнике, так и в кости. Он вызывает кальцификацию кости, мобилизует кальций из кости in vivo и в культуре костной ткани почти так же эффективно, как и 25-OHD3.
ДГТ3 и 25-ОН-ДГТ3 влияют на транспорт кальция в кишечнике и мобилизацию кальция кости нефрэктомированных животных. Таким образом, для проявления биологического действия этих соединений не требуется стадия метаболического гидроксилирования в почках при Сп и, следовательно, ЗР-гидроксильная группа дигидротахистерина, занимающая геометрическое положение la-гидроксильной группы la,25-(OH)2D3, может выполнять его функции. Низкая антирахитическая активность ДГТ, особенно в малых дозах, вероятно, связана с тем, что диеновая система ДГТ не может полностью заменить цис-триеновую структуру витаминов D.
ИЗОТАХИСТЕРИН-З И 25-ОКСИИЗОТАХИСТЕРИН-З
Эти соединения получены в 1973 г. Holick, DeLuca и др. [430] по методу Inhoffen [461] путем изомеризации витамина D3 эфира- том BF3.
Исследуя биологическую активность изотахистерина-3 (LXI) и 25-ок- сиизотахистерина-3 (LXII), Holick, DeLuca и др. [430] обнаружили, что эти соединения у нормальных животных вызывают транспорт кальция в кишечнике и мобилизацию кальция из кости. 25-Оксиизотахистерин в отличие от 25-оксипроизводного 5,6-транс-витамина D3 активен как в кишечнике, так и в кости [428]. Очень важно, что у животных с удаленными
почками изотахистерин-3, подобно la,25-(OH)2D3, вызывает как транспорт кальция в кишечнике, так и мобилизацию кальция из кости.
ИЗОВИТАМИН-З (LXIII)
Был получен в 1966 г. в лаборатории Kodicek [658]. Его биологическая активность была изучена Holick, DeLuca и др. [430], которые установили, что изовитамин-3 стимулирует транспорт кальция в кишечнике и вызывает мобилизацию кальция из кости только у нормальных животных. Удивительно, что, даже имея псевдо-la-оксигруппу, изовитамин-3 не вызывает у нефрэктомированных животных ответа ни в кишечнике, ни в кости.
КЕТОН 250
При рассмотрении стероидных соединений, обладающих D-витаминной активностью, нельзя не отметить многочисленных работ, проведенных в 1949—1968 гг. французским исследователем Raoul с сотр. [728—744, 127] по получению и изучению структуры и свойств витамин D- подобных секостероидов.
Начало этих работ было положено еще в 1926 г., когда Bills [155] установил, что в результате обработки холестерина флоридином ’(боксит из штата Флорида) появляется слабая антирахитическая активность. Raoul, Baron и другие провели большое количество исследований и установили, что холестерин (LXIV) при кипячении с флоридином превращается в секохолестерин (LXV), который затем присоединяет (в присутствии флоридина) кислород с образованием перекиси (LXVI). г
Под действием щелочи происходит изомеризация перекиси в енол (LXVII), который образует растворимый в эфире енолят кальция (LXVIII). При подкислении енолята кальция выделяется свободный енол, изомеризующийся в кетон 250 (LXIX), названный так за характерный максимум поглощения в УФ-спектре при X -250 нм. Кетон 250 получали также из витамина D3 (II) при превращении его в диол-П3 (LXX) и кипячении последнего со спиртовой щелочью в присутствии кислорода.
Активность кетона 250 в 10 раз ниже антирахитической активности витамина D3 как у крыс, так и у цыплят, тогда как енолят кальция (LXVIII) имеет более высокую активность, равную активности витамина D3. По-ви- димому, енолят кальция играет роль переносчика ионов кальция в водной нейтральной или щелочной среде и участвует в процессах кальцификации кости [740].
Raoul и сотрудники обнаружили кетон 250 в спорынье, соевом масле, в жире печени тунца и др. [741, 742, 744].
МОЛЕКУЛЯРНАЯ ТОПОЛОГИЯ И БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ
Представленные выше данные свидетельствуют о том, что за 45 лет, прошедших после открытия витаминов D, получено много синтетических аналогов и выделено несколько их метаболитов. Однако лишь немногие из этих соединений обладают антирахитической активностью, стимулируют транспорт кальция в кишечнике, мобилизуют кальций из кости или способствуют ее кальцификации.
Структура соединений, обладающих D-витаминной активностью, показана ниже.
i-T3 3-D-la-OHD3 3-D-la, 25-(OH)2D3
Наиболее активной гормональной формой витамина D3 оказался его метаболит la,25-(OH)2D3, который контролирует все перечисленные выше процессы и активен в случае патологических нарушений, связанных с почечными заболеваниями, когда ни витамин D3, ни другие его метаболиты и многие аналоги не оказывают действия. Однако сложный синтез 1а,25- (OH)2D3 делает его малодоступным для широкого применения. Кроме того, необходим клинический набор соединений, обладающих специфическим направленным действием при лечении различных костных заболеваний. В связи с этим возникает необходимость более глубокого изучения взаимосвязи структура — функция. ■
При сопоставлении структуры перечисленных выше активных соединений с их биологической активностью Okamura, Norman и др. [685] пришли к следующим выводам.
Все соединения, активные у животных с удаленными почками, должны иметь la-гидроксильную группу или ее псевдоэквивалент (например, la,25-(OH)2D3, la-OHD3, 5,6-mpa«c-D3, изо-Т3).
Аналоги активны и в случае отсутствия гидроксильной группы, которая геометрически соответствует З^-ОН-группе la,25-(OH)2D3. Подтверждением этому служит высокая активность 3-дезокси-1а-ОНП3, ДГТ3, 5,6-транс-В3 и изо-Т3.
С19-Метиленовая группа la,25-(OH)2D3 может быть заменена метильной группой и геометрически занимать положение при С4 (например ДГТ3, изо-Т3 и 5,6-mpaHc-D3).
Несмотря на многочисленные данные, невозможно сделать окончательный вывод о структуре боковой цепи, но очевидно то, что она играет важную роль в биологической активности.
Для более глубокого выяснения взаимосвязи между топологией молекулы и D-витаминной активностью Okamura, Norman и др. [684, 985,
821, 685, 726, 986, 678] провели структурно-функциональное изучение витамина D3, его метаболитов и некоторых активных аналогов с помощью ПМР-спектроскопии высокого разрешения. Они установили [684, 985], что кольцо А витамина D3 существует в растворе как эквимолярная смесь двух конформеров с креслоподобной структурой, которые находятся в динамическом равновесии (см. схему; а, б). В одном из них гидроксильная группа аксиальна (а), в другом — экваториальна (е). Кольцо A la,25-(OH)2D3 и la-OH-D3 также существуют в двух креслоподобных конформерах, преимущественно (55%) с экваториальной ориентацией la-гидроксильной группы (в, г) [685, 986].
Чтобы установить, какие из витамин D-подобных структур являются более биологически активными (с экваториальной или аксиальной гидроксильной группой), была изучена конформация аналогов витамина D, которые идентичны по структуре и стереохимии колец С и D, боковой цепи R и углеродной цепи С5, С6, С7 и С8.
Конформационный анализ кольца А 5,6-транс-витамина D3 показал, что псевдо-la-гидроксильная группа существует на 66% в экваториальной ориентации (см. схему; д, е), а для ДГТ3 характерна только экваториальная ориентация — на 97% (ж, з), Сравнение с дигидровитамином D2 IV, наиболее подобным по структуре ДГТ2 (отличие только в конфигурации при С10), показало, что псевдо-la-гидроксильная группа ДГВ2 IV находится строго в аксиальной ориентации — 91% (и, к). Из этих двух соединений ДГТ2 обладает высокой биологической активностью, тогда как ДГВ2 IV
кк
к
к
Таким образом, можно предполагать, что экваториальная ориентация la-гидроксильной группы является более предпочтительной для биологической активности соединения.
Для проверки этого заключения были синтезированы и изучены аналоги, имеющие различные заместители в кольце А при С3, способные сместить равновесие двух конформеров la,25-(OH)2D3 в сторону конформера с преимущественно экваториальной или аксиальной ориентацией la-гидроксильной группы.
Синтез la-OH-3-эпивитамина D3 [818, 6871, конформационный анализ и изучение его биологической активности показали, что введение За-гид- роксильной группы в кольцо А приводит к смещению равновесия в сторону конформера с аксиальной ориентацией (70—80%) и снижению биологической активности. Удаление 3[5-гидроксильной группы из ’la,25-(OH).,D3 должно сдвигать равновесие к конформеру с преимущественно экваториальной ориентацией. Синтезированный 3-D-la,25-(OH)2D3 является самым эффективным аналогом la,25-(OH)2D3 [6861.
Исходя из того что, как и в случае других стероидных гормонов, биохимический способ действия la,25-(OH)2D3 является результатом его связывания с цитоплазматическим и ядерным рецепторами, Norman ссотр. [678, 7261 исследовал способность витамина D3, его метаболитов и синтетических аналогов конкурировать с la,25-(OH)2D3 за связь со специфическими рецепторами в хроматине ядер эпителиальных клеток тонкого кишечника. Установлено, что удаление Зр-гидроксильной группы 1а,25-(ОН)2 снижает способность к связыванию со специфическим рецептором в 8 раз, а удаление la- или 25-гидроксильной группы — в 900 раз. Одновременное удаление la- и 25-гидроксильных групп (витамин D3) практически полностью нарушает способность связываться со специфическим рецептором. Аналогичным образом ведут себя 5,о-транс-О3 и ДГТ3 (la,25-(OH)2D3 :3-D-la,25-(OH)2D3:
: 25-OH-D3: la-OH-D3 : 3D-la-OH-D3 : D3; ДГТ3; 5,6-транс-О3 |.
9009005000•I
10000/
Таким образом, для эффективного связывания со специфическим рецептором необходимы как 1а-, так и 25-гидроксильные группы в молекуле la,25-(OH)2D3, тогда как Зр-гидроксильная группа не является крайне необходимой. Биологическая активность la-OHD3, ДГТ3 и 5,6-mpa«c-D3 при очень слабо выраженной способности к связыванию с рецептором обусловлена их 25-гидроксилированием в организме [341], благодаря чему они могут взаимодействовать со специфическим рецептором. Отсутствие взаимодействия между специфическим рецептором и 1,25-диокси холестерином •свидетельствует о необходимости секоструктуры la,25-(OH)2D3 [726].
ПОТРЕБНОСТЬ В ВИТАМИНЕ D И КЛИНИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ ЕГО ПРЕПАРАТОВ
Распространение витаминов D в природных источниках крайне ограничено» В зеленых растениях вообще не содержится ощутимых количеств этих витаминов. Однако имеются сведения об антирахи- тической активности плодов какао, сена, дрожжей, что, вероятно, обусловлено присутствием в них провитаминов D, из которых под влиянием солнечного света образуются небольшие количества витамина D, или других антирахитических веществ, например кетона 250. В животных организмах витамины D обнаружены в очень малых количествах. Наиболее богаты витаминами D печень различных видов рыб, особенно тунца, палтуса, меч-рыбы, печень кита, яйца птиц, особенно утиные, и желток куриного яйца, молоко млекопитающих [12, 766]. Поэтому потребность человека, сельскохозяйственных животных и птиц в витаминах D удовлетворяется главным образом за счет синтетических препаратов. Из витаминов D в настоящее время широко применяются только витамины D3 и D3 для профилактики и лечения рахита у детей, а также для профилактики нарушения обмена кальция и фосфора у взрослых.
Определить потребность организма взрослого человека в витамине D довольно сложно, так как в организме под влиянием солнечной радиации образуется витамин D3 из 7-дегидрохолестерина, содержащегося в коже. До настоящего времени нет точных рекомендаций относительно профилактической дозы витамина D3 для взрослого человека. При недостаточном облучении солнечным светом, в особенности жителям Крайнего Севера, беременным и кормящим женщинам, необходимо употреблять не менее 500 и. е. витамина D3 в сутки (1 и. е.— 0,025 мкг витамина D3), для жителей стран с теплым и умеренным климатом — 300—400 и. е. Однако эти данные требуют дополнительной проверки [37]. Также довольно противоречивы данные о количестве витамина D, необходимом для профилактики и лечения рахита у детей. Рекомендуемая профилактическая доза для ребенка определяется возрастом, весом и длительностью приема препарата и составляет 100—700 и. е. в сутки, при лечении рахита в зависимости от тяжести заболевания доза может быть увеличена до 20 000 и. е. и более [4, 25, 37, 62].
С целью профилактики D-гиповитаминоза в некоторых странах проводится витаминизация пищевых продуктов (молока, хлеба, маргарина и др.).
В сельском хозяйстве применяют технические препараты витаминов D2 и D3, а также облученные дрожжи. Препараты витамина D2 используют в животноводстве при вскармливании молодняка крупного рогатого скота 48
и свиней. В птицеводстве применяется исключительно витамин D3, поскольку витамин Da практически неактивен для птиц*.
Изучение метаболизма и механизма действия витаминов D открыло новые возможности применения метаболитов и аналогов витамина D3 в клинической медицине. При изучении механизма действия витаминов D было установлено, что, прежде чем проявить свое действие они должны превратиться в биологически активные формы. Первое превращение витамины D претерпевают в печени, где в результате 25-гидроксилирования образуется 25-OHD3. Путем дальнейшего гидроксилирования в почках 25- OHD3 превращается в главный метаболит — la,25-(OH)2D3, представляющий собой гормональную форму витамина D3.
При хронических заболеваниях печени и почек нарушается превращение витамина D3 в его биологически активные формы, что ведет к нарушению гомеостаза кальция в организме, вследствие чего развиваются такие костные заболевания, как рахит, остеопороз, остеомаляция, остеодистрофия. Для лечения этих заболеваний в клинической практике стали успешно применять 25-OHD3 и la,25-(OH)2D3.
В последнее время синтезирован la-OHD3, который оказался эффективным заменителем la,25-(OH)2D3 и проходит сейчас клинические испытания для лечения остеомаляции и других костных заболеваний, связанных с почечными нарушениями [205, 176, 405, 697, 700, 126]. Высокая активность la-OHD3 в повышении концентрации кальция в крови даже при оральном введении делают его исключительно важным терапевтическим препаратом.
Для повышения концентрации кальция в сыворотке крови при лечении гипокальциемии при гипопаратиреоидизме и при мышечной тетании более четверти века успешно применяется также дигидротахистерин в виде препарата АТ-10.
При лечении почечной остеодистрофии может быть применен 5,6-транс- 25-OHD3, который вызывает абсорбцию кальция в кишечнике без мобилизации кальция из кости.
. * Более подробно см. в книге А. Р. Вальдмана «Витамины в животноводстве*. Рига, 1977, с. 60—95.
глава iv Синтез и химические свойства витаминов D
ФОТОХИМИЧЕСКАЯ ИЗОМЕРИЗАЦИЯ ПРОВИТАМИНОВ D (ОБРАТИМЫЕ РЕАКЦИИ)
В конце 20-х годов было установлено, что витамин D образуется при действии УФ-света на эргостерин [946, 770]. Изучение фотохимического превращения эргостерина, проведенное Windaus с сотрудниками в 1930 г. [949—951], показало, что это чрезвычайно сложный процесс, при котором образуется не менее пяти-шести соединений, и одним из них является витамин D. Поэтому выделение витамина D из смеси продуктов фотоизомеризации эргостерина было связано с большими трудностями (см. главу I). С увеличением степени конверсии эргостерина состав смеси усложнялся. Первыми из продуктов фотолиза эргостерина в 1930 г. [951] были выделены два физиологически неактивных продукта переоблучения, названные Windaus супрастеринами I и II.
В 1931 г. практически одновременно Windaus с сотр. [954] и Bourdil- lon с сотр. [116, 117, 112] изолировали из смеси продуктов фото изомеризации эргостерина витамин D, Windaus в виде комплекса с люмистерином — витамин Dlt а английские исследователи — кальциферол, представляющий комплекс витамина с продуктом его термического превращения. Год спустя был получен чистый кристаллический антирахитический витамин, названный витамином D2 или кальциферолом [957, 119, 954].
В 1931—1932 гг. Windaus с сотр. [953, 956—958] изолировал из витамина DT изомерный витамину D2 физиологически неактивный спирт — лю- мистерин, а из смеси продуктов фотоизомеризации эргостерина другой изомер — тахистерин [955, 959, 460]. Еще один продукт — токсистерин, хотя и не был получен в кристаллическом виде, но его присутствие обнаруживалось в продуктах переоблучения по сильному токсическому действию, которым не обладали другие выделенные компоненты. Windaus с сотр. [959] установил, что люмистерин при облучении вспышкой магния дает тахистерин, а последний при облучении образует витамин D2, оба супрастерина и токсистерин, и предложил следующую схему последовательно протекающих фотохимических превращений:
эргостерин (Е) - ^и- люмистерин (L2) -iX»_ тзхистерин (Т2) ——
супрастерины I и II
■ । »■ витамин D2 (D2)
^^токсистерин
Переходы от Е к Ь2, от L2 к Т2, от Т2 к D2 и далее являются необратимыми фотохимическими процессами. Однако уже в 1933 г. Setz [814] высказал ряд соображений, трудно согласующихся с предложенной схемой. Так,
при кратковременном облучении эргостерина, когда согласно схеме должен образовываться практически один люмистерин, реакционная смесь проявляла максимальную антирахитическую активность, т. е. содержала в основном витамин D2. Lettre [592] установил, что фотохимическая реакция приводит к разрыву С—С-связи эргостерина и образованию тахистерина,. имеющего раскрытое кольцо В. В связи с этим неясно, является ли люмистерин промежуточным продуктом при образовании тахистерина или эргостерин может непосредственно превращаться в тахистерин и далее — в витамин D3.
Предложенная Windaus схема неоднократно обсуждалась различными исследователями [592, 654, 272, 372], но, несмотря на ряд критических замечаний, оставалась без изменений в течение почти 20 лет.
Лишь в 1949 г. французские исследователи Velluz и др. [895] выделили новый продукт фотохимической изомеризации эргостерина — прекальциферол-2 (или превитамин-2) — и показали, что именно он является непосредственным предшественником витамина D3, причем превращение преви- тамина в витамин происходит путем не фотохимической, а термической изомеризации. '
Inhofferi и др. [465], учитывая выделение нового продукта фотолиза эргостерина и термическую реакцию превращения его в витамин, предложили видоизменить схему Windaus следующим образом:
hv hv bv AtЕ-L3-Т2-Р3-D3.
В это же время Crowfoot Hodgkin и др. [220] установили, что прямое превращение эргостерина в люмистерин маловероятно. Общепринятая схема фотохимического превращения провитаминов D подлежала пересмотру.
Velluz и др. [899—903], продолжая исследовать структуру и свойства превитамина, установили, что при облучении УФ-светом из превитамина образуются эргостерин, люмистерин и тахистерин. На основании этих данных в 1955 г. была предложена новая схема, согласно которой превитамин является первичным продуктом фотопревращения эргостерина [900, 903]:
Благодаря этой схеме стало возможно, наконец, объяснить образование люмистерина из эргостерина, что оставалось неясным в схеме Windaus.. Однако схема Velluz имела мало экспериментальных подтверждений.
В 1954 г. группа голландских химиков во главе с профессором Havingai из Лейденского университета и Rappoldt из научной лаборатории фирмы. «Philips — Duphar» начала изучение фотохимического превращения провитаминов D. Более чем 20-летние исследования этой школы внесли большой вклад в выяснение механизма фотохимических реакций, установление структуры фотоизомеров и продуктов переоблучения и легли в основу общепринятой в настоящее время схемы [788].
Для выяснения механизма реакций фотохимической изомеризации провитаминов D Havinga с сотрудниками синтезировали радиоактивный (3-14С)-7-дегидрохолестерин [387], разработали методики определения провитамина D, витамина D, тахистерина и люмистерина в смесях, облучили
УФ-светом смеси радиоактивного провитамина с неактивным люмистерином или тахистерином и определили удельную активность витамина D3 [388]. Результаты опытов привели к заключению, что ни люмистерин, ни тахи- стерин не являются промежуточными продуктами при получении витаминов D. Поэтому группой Havinga была предложена новая схема, предполагающая переход провитамина D при УФ-облучении в возбужденное состояние Е*, из которого возможен переход во все три фотоизомера — Р, L и Т [388, 389]:
L
Однако вскоре голландские исследователи получили данные, подтверждающие правильность схемы Velluz: при облучении провитамина с 85 %- ным выходом образуется прекальциферол [746], а последний при облучении УФ-светом с длиной волны 254 нм превращается главный образом в тахистерин [745] и небольшое количество провитамина, что было установлено также Velluz и др. [900]. При облучении люмистерина происходит образование исключительно прекальциферола [748], тогда как тахистерин и эргостерин не являются продуктами его фотохимического превращения. Таким образом, установлено протекание следующих четырех фотохимических реакций:
hvL Р
Rappoldt [747, 748] провел анализ смеси, получаемой при облучении эргостерина, превитамина, люмистерина и тахистерина и определил квантовые выходы для различных превращений при облучении УФ-светом с длиной волны 254 нм. Обобщая результаты, полученные голландскими исследователями, Rappoldt [749] в 1960 г. предложил еще одну схему фотохимической изомеризации эргостерина:
(X обозначены продукты переоблучения провитамина). Однако, как отмечали Havinga и др. [390, 264, 391, 392], оставался невыясненным вопрос о превращениях, связанных с люмистерином. В связи с отсутствием достоверного метода определения люмистерина, был сделан неправильный вывод о превращении Т L.
В 1964 г. Sanders и Havinga [787], осуществив УФ-облучение радиоактивного (7-3Н)-тахистерина и использовав для анализа тонкослойную хроматографию, показали, что источником люмистерина-2 является превращение не Та-> L2, а Т2->-Р2->-La. Таким образом, облучение при темпера-
туре ниже 10° С провитамина (или превитамина, люмистерина, тахисте- рина) приводит к ряду обратимых реакций, и в результате устанавливается квазистационарное состояние между всеми четырьмя изомерами. Со-
став смеси в квазистационарном состоя-
нии при облучении УФ-светом с различной длиной волны был рассчитан Havinga и др. [390] и приведен в табл. 2.
На основании проведенных исследований Sanders и Havinga внесли изменения в ранее предложенную схему:
Таблица 2. Состав смеси фотоизомеров в квазистационарном состоянии при облучении УФ-светом с различной длиной волны, %
X, нм
Е
р
т
ь
„ 0,050,26
х — Е = Р
0,02
0,45 = т
\ 0.08
L
253,7 280,0 296,5 302,0 313.0
2,0
1,5
1,4
3,4
26.0
19
47
60
53
19
68
41
27
26
8
11
10
12
17
47
Схема, которую предложили голландские ученые после десяти лет интенсивных исследований, полностью совпадает со с
хемой
Velluz
и др.
[900]
и является в настоящее время общепринятой. Основные результаты этих исследований представлены в обзорных работах Havinga и сотр. [391, 392, 788, 393].
ПРОДУКТЫ ФОТОХИМИЧЕСКОЙ ИЗОМЕРИЗАЦИИ ПРОВИТАМИНОВ D
ПРЕВИТАМИНЫ
В 1949 г. Velluz и Amiard [8951 выделили превитамин-2 из продуктов фотохимического превращения эргостерина в виде кристаллического 3,5-динитробензоата, а после омыления эфира получили маслообразное вещество. Превитамин-З был выделен из смеси продуктов облучения 7-дегидрохолестерина [897].
Структура превитамина была установлена в 1955 г. одновременно Velluz с сотр. [900] и Havinga с сотр. [566]. Данные по гидрированию (поглощение 4 молей водорода), окислению перфталевой кислотой и характер УФ-спектра (Хмакс 262 нм) свидетельствовали об отсутствии циклизации в кольце В и наличии сопряженной триеновой системы, аналогичной таковой витамина D. Анализ ИК-спектров превитамина-2 и витамина D2 показал отсутствие в спектре превитамина широкой полосы в частотной области 900 см~', которая характерна для экзоциклической метиленовой группы. Об этом свидетельствовало также слабое образование формальдегида при озонолизе. В то же время ИК-спектры превитамина и тахистерина сходны, за исключением того, что в спектре превитамина отсутствует трансполоса при частоте 957 см-1 [912]. Предположение, что превитамин является 6,7-г{ис-изомером тахистерина, было подтверждено реакцией цис-, трансизомеризации превитамина в тахистерин, катализируемой йодом, а также слабой реакционной способностью превитамина в отношении малеинового ангидрида (высокая реакционность характерна для транс-соединений) [ПО]. На основании этих данных превитамин-2 был определен как 9,10- секоэргоста-5(10),6(цис),8,22-тетраен-3р-ол и предложено два строения (I и II), отличающиеся конфигурацией по связи С5—С6.
По данным Havinga и др. [391], конформация (I) является относительно наименее затрудненной, а (II) значительно отклоняется от планарной; Vel- luz и др. [900] предпочитают структуру (II). И хотя образование витамина D, а также циклогексадиеновых производных (люмистерина, эргостерина и др.) легче объяснить исходя из структуры (II), до недавнего времени практически во всех работах отдавали предпочтение структуре (I) и лишь в последние годы используют в основном структуру (II).
Биологическая активность превитамина-3 была исследована Hanewald и др. [369], которые установили, что превитамин антирахитически неактивен или активен в очень малой степени.
ТАХИСТЕРИНЫ
При обработке смеси продуктов облучения эргостерина цитраконовым ангидридом Windaus и сотрудники в 1931 г. [955, 959, 460] изолировали один из изомеров эргостерина и назвали его «тахистерин» за способность быстро соединяться с цитраконовым ангидридом. При осторожном нагревании аддукта в вакууме тахистерин был выделен в виде масла с [а]д —70° (н-бензин).
Lettre [592] предположил, что образование тахистерина из эргостерина происходит с разрывом С—С-связи в одном из колец, вероятнее всего, в кольце В, a Grundmann [360] предложил первую формулу для тахистерина. Выяснению структуры тахистерина посвящено много работ Inhoffen и сотр. [465, 466, 469, 470, 472, 4751, Braude [181], Verloop, Koevoet и др. [912, 566].
При исследовании ИК-спектров тахистерина Inhoffen и др. [465, 4661 и Koevoet и др. [566] обнаружили полосу при частоте 957 см-1, характерную для синтезированных Inhoffen модельных соединений с транс-конфигурацией по С6—С7-связи. Ее наличие явилось одной из причин идентификации тахистерина как 9,10-секоэргоста-5(10),6(транс),8,22-тетраен-3р-ола.
Подтверждением этой структуры была чрезвычайная реакционная способность тахистерина по отношению к малиеновому ангидриду [НО]. Однако длительное время оставалось неясно, какая из двух структур (III или IV) является истинной. Наконец, в 1969 г. Lugtenburg и Havinga [607] при исследовании ЯМР-спектров высокого разрешения установили, что структура (III) является более предпочтительной.
Тахистерин антирахитически неактивен, довольно токсичен и чрезвычайно легко окисляется кислородом.
ЛЮМИСТЕРИНЫ
При нагревании витамина Di с уксусным ангидридом и последующем охлаждении Windaus с сотр. [953, 957, 958] выделил ацетат люмистерина-2, а после омыления и кристаллизации из спирта или ацето
на получил в виде красивых длинных игл люмистерин-2 (VII) с т. пл. 118° и [а]д +191°. Окисление надпербензой- ной кислотой и количественное гидрирование показали [958, 270, 398], что в молекуле люмистерина-2 имеются три двойные связи, две из которых находятся в кольце В в положении, аналогичном эргостерину (V), согласно данным УФ-спектра (рис. 1), и одна в боковой цепи. В то же время люмистерин-2 отличается от эргостерина тем, что не дает осадка с дигитонином и является сильно правовращающим (табл. 3). При дегидрировании люмистерина уксуснокислой ртутью Heilbron и др. [398], а
Рис. 1. УФ-спектры:
— эргостерина, 2 — люмистерина, 3 — тахистерина, 4 — превитамнна, 5 — витамина.
также Dimnoth и Windaus [271, 969] получили дегидролюмистерин (X) и при сравнении его с подобным дегидропроизводным эргостерина (IX) при-
Таблица 3. Температура плавления, удельное вращение и данные УФ-спектров витамина D2 и родственных соединений
Вещество
Т. пл., еС
[®1D (хлороформ), град
УФ-спектр
Литература
^макс, им
8
Витамин D2 (эргокальциферол)
116—117
4-52,25
265
18 800—
[441, 123,
—19 700
834]
Эргостерин (провитамин D^
165
—135
271,5
11 580
[834, 862,
282,0
12 180
815]
293,5
6920
Превитамин-2 (Р2)
Масло
4-43 (бензол)
260
9140
[834, 898]
Тахистерин-2 (Т2)
>
—70 (бензин)
280,5
29 550
[959, 8346
Люмистерин-2 (L2)
120—121
4-191 (ацетои)
272,5
9400
[815, 900,
278,5
8880
958]
294
4300
Пирокальциферол-2(Пиро-В2)
94—95
4-512 (спирт)
274
10 300
[815, 192)
284,5
10850
296
6 400
Изопирокальциферол (Изопи-
112—116
4-332
274
10 380
[192, 8151
ро-О2)
284
10 300
295
6400
Фотопирокальциферол
104—105
4-52
—
—
[232]
Фотоизопирокальциферол
81—82
—11,5
—
—
[232)
Супрастерин-2 1
104
—76
—
—
[951]
Супрастерин-2 II
ПО
4-62,9
—
—
[951]
5,6-траяс-Витамин D2
125—126
4-74,8 (бензол)
272—273
24 600
[478]
(5,6-транс-В2)
104—106
[911]
Изовитамин D2 (Изо-Dj)
108—110
4-108
276
33 700
[476]
287
44 100
299
32 200
Изотахистерин-2 (Изо-Т2)
Масло
—71
279
34 500
[476]
289,5
45 300
302
33 600
цнс-Изотахистерин-2
—
—-
253
15 000
[914]
шли к выводу, что люмистерин и эргостерин отличаются конфигурацией СН3-группы при С10.
У люмистерина она должна находиться в транс-положении к гидроксильной группе при С3, что согласуется с отсутствием реакции с дигитонином.
P-Конфигурация Н-атома при С9 была установлена Castells и др. в 1958 г. [198] одновременно со структурой других изомерных 5,7-диенов (VI) и (VIII) при изучении реакций окислительного превращения. Кристаллографические исследования Crowfoot, Hodgkin и др. [220] подтвердили структуру люмистерина как 9р, 10а-эргоста-5,7,22-триен-3-ола.
Химические свойства люмистерина-2 и его эфиров стали предметом многочисленных исследований. Были изучены реакции окисления [160, 199, 622,218, 156,346] и восстановления люмистерина в ди-, тетра- и гексагидропроизводные [958, 200, 201, 623], кислотной изомеризации [203], реакции с малеиновым ангидридом [157] и другие [627, 202, 213, 158]. Люмистерин не изменяется при нагревании до 190°, на воздухе окисляется очень медленно. По данным Windaus и др. [958], люмистерин-2 антирахитически неактивен и нетоксичен.
Люмистерин-3 был получен в 1938 г. Windaus и др. [972] при облучении 7-дегидрохолестерина длинноволновым светом. После отделения основной массы непревращенного провитамина вымораживанием и осаждением 56
дигитонином остаток экстрагировали кипящим петролейным эфиром и после удаления растворителя получали люмистерин-3 в виде масла, а после перекристаллизации из ацетона — иглы с т. пл. 87—88°, из метанола — иглы с т. пл. 63—64° (табл. 4). Удобный метод получения люмистерина-3 разработан автором работы [92].
Таблица 4. Температура плавления, удельное вращение и данные УФ-спектров витамина D3 и родственных соединений
Вещество
Т. пл., еС
[а]£> (хлороформ), град
УФ-спектр
Литература
^макс, нм
8. СМ
Витамин D3 (холекаль- циферол)
7-Дегндрохолестерин—
84—85
+51,9
265
19 200
[441]
148—151
—121
272
11 250
[144, 988у
провитамин D3
282
11 900
(7-ДГХ)
293
6650
Превнтамин-3 (Р3)
Масло
+40 (бензин)
263
9250
[898, 31.1)
Тахнстерин-3 (Tj
>
—11,5 (бензол)
280
—
[972].
Люмистерин (L3)
87—88 (ацетон)
63—64 (метанол)
+197
271,5
9150
[972];
Пирокальциферол-3
Масло
—-
—-
—
[975]1
(Пиро-О3)
Изопирокальцнферол-3
>
—
—
—
[975]
(Пзопиро-Dg)
Супрастерин-3 I
>
[175]
Супрастерин-3 II
>
—
—
—
[175]
В отличие от люмистерина-2 люмистерин-3 не образует аддукта с витамином D3, смесь равных частей витамина D3 (т. пл. 83°) и люмистерина-3- (т. пл. 64°) плавится при 57° [972]. Люмистерин-3 не обладает антирахити- ческой активностью для крыс, тогда как для птиц он является антирахитически активным веществом [32].
ОБРАТИМАЯ ТЕРМИЧЕСКАЯ ИЗОМЕРИЗАЦИЯ ПРЕВИТАМИНОВ D
В ВИТАМИНЫ D
В 1931 г. Windaus и Auhagen [9521 наблюдали увеличение- удельного вращения облученных растворов эргостерина при нагревании, однако не придали этому явлению особого значения. В 1948 г. Velluz с сотр. [893], проводя фотохимическую изомеризацию эргостерина при температуре ниже 20°, обратил внимание на то, что при нагревании облученных растворов происходит увеличение удельного вращения от +16° до +39° с одновременным повышением содержания витамина D2 от 11 до 43%. Velluz и сотр. 1894] связали это явление с процессом нефотохимического образования витамина D из предшественника, образующегося в процессе фотохимического превращения эргостерина. Вскоре Velluz и Amiard [8951 выделили данное вещество в виде кристаллического 3,5-динитробензоата и назвали его прекальциферолом или превитамином.
Velluz c corp. [896, 8981 установил, что превитамин (или его эфиры) при нагревании превращается в витамин D (или эфиры) и в то же время возможно обратное превращение витаминов D в превитамины. Причем в обоих случаях реакция не идет до конца и в растворе устанавливается равновесие.
Таблица 5. Состав равиовесиой смеси (%) превитамии-3 .►витамин D3 и время* необходимое для достижения равновесия при различных температурах
Температура, ®С
Соотношение
Время
Температура °C
Соотношение
Время
Превита- мнн-3
Витамин
Da
Превита- мии-3
Витамин D-
—20
2
98
16 лет
50
13
87
1,3 дия
0
4
96
350 дней
60
16
84
12 ч
20
7
93
30 дней
80
22
78
2,5 ч
30
9
91
10 дней
100
28
72
30 мин
40
11
89
3,5 дня
120
35
65
7 мин
спектра превитамина при термической изомеризации.спектра превитамина при термической изомеризации.Hanewald и др. [369] провели кинетические исследования и определили состав равновесной смеси превитамин ^ витамин при температурах от —20° до 100°, a Keverling Buisman и др. [531] определили время, необходимое для достижения равновесного состояния при определенных температурах. Полученные ими данные приведены в табл. 5.
спектра превитамина при термической изомеризации.
спектра превитамина при термической изомеризации.
При нагревании растворов превитамина наблюдается изменение УФ-спектра: небольшой сдвиг максимума поглощения от 262 к 265 нм и одновременное значительное увеличение £}%, характерные для витаминов (рис. 2).
Скорость реакции превитамин -*■ витамин D зависит только от температуры, тогда как природа растворителя, ультрафиолетовое облучение, присутствие кислот и щелочей [912] или радикальных ингибиторов цепи [590] совершенно на нее не влияют. Не наблюдали также обмена водорода на дейтерий, когда проводили изомеризацию в смеси бензол —CH3OD [802], поэтому обратимая изомеризация превитамина в витамин представляла серьезные трудности для интерпретации. Эта реакция не может рассматриваться ни как нуклеофильная, ни как электрофильная, поскольку она нечувствитель
на к кислотно-основному катализу. Она не может быть радикальной, так как на нее не влияют ни катализаторы, ни ингибиторы.
Для выяснения механизма превращения превитамина D в витамин D были синтезированы некоторые более простые их аналоги (XI—XIII) [801, 802, 391, 910, 177] и изучены их термические превращения.
Аналог витамина D (XI) был превращен в соответствующий превитамин при нагревании при температуре 70—90° в течение нескольких часов. Равновесие смещено в сторону образования аналога превитамина, тогда как в случае витаминов D равновесная смесь содержит более 80% витамина D. 13а-Аналоги превитамина (ХПа—ХПв) даже при длительном нагревании не превращались в соответствующий витамин, а для Па-оксипроизводных (XIII) равновесие почти полностью смещалось в сторону аналога витамина D.
сн3сн3a) R“R,=O6) R,= R2=Hв) R,= H, R2-=OHa) R“R,=O6) R,= R2=Hв) R,= H, R2-=OH
сн3
сн3
a) R“R,=O
6) R,= R2=H
в) R,= H, R2-=OH
a) R“R,=O
6) R,= R2=H
в) R,= H, R2-=OH
Проведенные исследования позволили предположить, что изомеризация превитамина в витамин представляет собой внутримолекулярную реакцию, протекающую через переходное состояние (XIV) с одновременным разрывом и образованием связи:
Предложенная внутримолекулярная перегруппировка была подтверждена Akhtar и Gibbons 1107, 108]. Они синтезировали меченный тритием при С19 холестерин, а из него получили (19-3Н)-7-дегидрохолестерин. Измерение радиоактивности показало, что она не изменяется при превращении превитамина в витамин и при кипячении витамина в смеси метанол — бензол. Следовательно, при термической изомеризации происходит перераспределение радиоактивности между С19 и С9 за счет внутримолекулярной миграции водородного атома. '
Таким образом, при превращении провитамина D в витамин D протекает ряд обратимых реакций фотохимической и термической изомеризации, которые можно представить следующей схемой:
ТЕРМИЧЕСКАЯ ИЗОМЕРИЗАЦИЯ ВИТАМИНОВ D (НЕОБРАТИМЫЕ РЕАКЦИИ)
При нагревании витаминов D в вакууме при 150—200° происходит образование двух продуктов термической изомеризации — пиро- и изопирокальциферолов (VIII и VI) [192]. Эти же вещества возникают при нагревании превитамина D в аналогичных условиях. Механизм реакции циклизации, происходящей при нагревании, состоит в первоначальной изомеризации витамина D в превитамин D, а далее происходит образование связи между С9 и С10 и замыкание кольца В. Поскольку в молекуле превитамина происходит вращение вокруг связей С5—С6 и С7—С8, то это приводит к образованию двух изомеров [391].
R.
XVII
Реакции образования пиро- и изопирокальциферолов являются необратимыми, при дальнейшем нагревании эти вещества не изменяются. При облучении УФ-светом они превращаются в фотопиро- и фотоизопирокальциферолы (XVI и XVII), при нагревании которых снова образуются исходные вещества.
ПИРОКАЛЬЦИФЕРОЛ-2 И ИЗОПИРОКАЛЬЦИФЕРОЛ-2
Пирокальциферол-2 был выделен Askew и др. [119] в 1932 г. как побочный продукт при получении витамина D2. В 1933 г. Busse [192] установил, что при нагревании витамина D2 при 180—190° образуется со
единение, состоящее из 50% пирокальциферола-2 и 50% изомерного ему изопирокальциферола-2. При каталитическом гидрировании оба вещества присоединяют 3 моля водорода и, следовательно, содержат, как и эргостерин, три двойные связи. Miiller [654] при окислении пирокальциферола и изопирокальциферола, эргостерина и люмистерина концентрированной азотной кислотой выделил одну и ту же тетракарбоновую кислоту и предположил, что продукты термического превращения витамина D2 идентичны по структуре эргостерину и люмистерину и различие между ними только стерической природы. Поскольку эти изомеры имеют по два асимметричных центра у С9 и С10, то при разрушении одного из них (С9) в процессе дегидрирования с уксуснокислой ртутью Dimroth и Windaus [271, 969, 287] установили конфигурацию СН3-группы при С10. Оказалось, что эргостерин и изопирокальциферол образуют одинаковый продукт дегидрирования (IX) и, следовательно, оба имеют природную ^-конфигурацию СН3-группы при С10, тогда как люмистерин и пирокальциферол дают одно и то же дегидропроизводное (X) с «-конфигурацией СН3-группы.
Конфигурация атома водорода у С9 для всех изомеров установлена Castells и др. [198, 199] при изучении реакций окислительного превращения и подтверждена исследованиями Havinga и др. [505].
Пирокальциферол был определен как 9а-люмистерин, а изопирокальциферол имеет 9р -конфигурацию и является 9р-эргостерином. Из этих четырех изомеров лишь изопирокальциферол-2 относится к соединениям с природной конфигурацией СН3-группы у С10 и дает подобно эргостерину реакцию осаждения с дигитонином.
Пирокальциферол-3 и изопирокальциферол-3 были получены Windaus и сотрудниками в 1938 г. [975] при нагревании витамина D3 до 200°.
ФОТОПИРОКАЛЬЦИФЕРОЛ-2 И ФОТОИЗОПИРОКАЛЬЦИФЕРОЛ-2
Windaus и Dimroth [272, 981] показали, что УФ-облучение пиро- и изопирокальциферолов ведет к образованию новых продуктов. Эти вещества не дают осадка с дигитонином, не имеют максимума поглощения в УФ-спектре, а при гидрировании присоединяют 2 моля водорода и, следовательно, имеют только две двойные связи. Одна из двойных связей находится в боковой цепи, а в кольце В вместо двух сопряженных двойных связей остается одна, и, вероятно, происходит образование нового кольца. Структуру фотопирокальциферола-2 (XVI) и фотоизопирокальциферола-2 (XVII) установили в 1957—1958 гг. Dauben и Fonken [230, 232] при изучении ИК-спектров и различных химических реакций. Образование фотоизопирокальциферола-2 происходит с большей скоростью, чем в случае фотопирокальциферола-2. Нагревание (XVI) и (XVII) при 188° приводит к образованию исходных пиро- и изопирокальциферолов с высоким выходом [272].
ФОТОХИМИЧЕСКАЯ ИЗОМЕРИЗАЦИЯ ВИТАМИНОВ D (НЕОБРАТИМЫЕ РЕАКЦИИ)
Облучение УФ-светом вызывает необратимые изменения структуры витаминов D и образование ряда новых соединений. Первыми из них были выделены в 1930 г. Windaus с сотр. [951] супрастерины I и II.
В 1972 г. Baker и др. [124] при облучении раствора витамина D3 в этиловом спирте выделили новые продукты фотохимического превращения
витамина D и идентифицировали их как производные аллена—(XVIII) и (XIX) и циклобутена—(XX) и (XXI). Состав смеси при полном фотопревращении витамина D установили Bakker и др. [124]: 19% супрастерина I, 62% супра- стерина II, 2% аллена (XVIII), 6% аллена (XIX) и 11% двух циклобутеновых производных. Фотоизомеризация витамина ведет также к образованию других неидентифицированных пока соединений: супрастерина (III), соединения Linsert и люмикальциферола.
СУПРАСТЕРИНЫ I, II и III
Супрастерин I изомерен эргостерину, содержит гидроксильную группу, две несопряженные двойные связи (отсутствует максимум в УФ-спектре в области 220—350 нм) [951] и двойную связь в боковой цепи [654]. Углеродный скелет супрастерина I отличается от эргостерина. Супрастерин I не изменяется при облучении УФ-светом, нагревании при 180° и восстановлении (натрий + спирт).
Длительное время для супрастерина I была принята формула, предложенная в 1935 г. Muller [654], но в 1975 г. Boomsma [175] установил, чю
супрастерин I имеет строение (XXII). Он антирахитически неактивен, пороговая токсичность его 1 мг [951].
Супрастерин II подобно эргостерину имеет гидроксильную группу, боковую цепь, но не имеет в УФ-спектре максимума поглощения в области 220—350 нм, при гидрировании дает дигидропроизводное и перегоняется в вакууме без разложения при 190° [951, 361, 814, 654]. Его структура предложена в 1958 г. Dauben и др. [231] и подтверждена в 1961 г. при исследовании ИК-, ЯМР-спектров и различных химических превращений [233], а также с помощью рентгеноструктурного анализа его 4-иод-5-нитробен- зоата [789]. Недавно структура супрастерина II (XXIII) была уточнена Boomsma [175]. Супрастерин II физиологически неактивен.
При облучении витамина D2 УФ-светом Green [359] выделил супрастерин III. Это вещество имеет две двойные связи согласно титрованию 1С13, не дает осадка с дигитонином и не имеет максимума в УФ-спектре в области 220—350 нм. Структура супрастерина III не установлена.
СОЕДИНЕНИЕ LINSERT
В 1936 г. Linsert [9571 выделил из продуктов облучения витамина D2 вещество с максимумом поглощения в УФ-спектре при X 230 нм (Еим = 442). Westerhof и др. [938] подтвердили его присутствие в облученной смеси. Этот продукт лишен антирахитической активности, но интересен тем, что вызывает повышение концентрации кальция в крови. Строение его пока не установлено, однако Bakker и др. [124] предполагают, что соединение Linsert идентично полученным ими алленам.
ЛЮМИКАЛЫДИФЕРОЛ
При исследовании продуктов, образующихся при переоблучении эргостерина, люмистерина-2 или витамина D2 в бензоле Pfordte [714, 715] установил присутствие во всех смесях неописанного ранее вещества, названного люмикальциферолом. Он образуется с выходом 5—7% наряду с супрастеринами I и II. В УФ-спектре люмикальциферола нет максимума поглощения, в ИК-спектре обнаружена полоса поглощения, характерная для гидроксильной группы, одна или более двойные связи и отсутствие ^ С=СН2-групп. Строение люмикальциферола не установлено.
ФОТОХИМИЧЕСКАЯ ИЗОМЕРИЗАЦИЯ
ПРОВИТАМИНОВ D
(НЕОБРАТИМЫЕ РЕАКЦИИ)
ТОКСИСТЕРИНЫ
Присутствие в продуктах переоблучения эргостерина вещества с максимумом поглощения в УФ-спектре при X 250 нм, обладающего сильным токсическим действием, было обнаружено Windaus с сотр. [959]. Токсистерин считали продуктом переоблучения витамина D2, как и супра- стерины I и II. Однако в дальнейших исследованиях Green [359], Velluz и др. [900], Westerhof и др. [938] и Merrnet-Bouvier и др. [629, 631] показали, что облучение витамина D2 не приводит к образованию вещества с абсорбционным максимумом при 250 нм, хотя при переоблучении эргостерина
подобное вещество действительно легко образуется. Выделить токсистерин и установить его структуру пытался Dimroth и др. [2861. Впервые вещество с максимумом при X 250 нм было выделено Westerhof и др. [9381 из продуктов облучения эргостерина в виде кристаллического 3,5-динитробензоата
и после хроматографирования разделено на токсистерин А и токсисте-
рин В. В УФ-спектре токсистерина А обнаружен максимум поглощения при 250,5 нм, у токсистерина В — три максимума при длине волны 242,5; 251 и 260,5 нм. Выход этих веществ очень низкий (0,1%).
В 1975 г. Boomsma и др. [174, 175] провели облучение 7-дегидрохолестерина при температуре ниже 5°, чтобы избежать превращения превитами- на-3 в витамин D3 и последующего образования су прастеринов, и нашли, что при облучении в спирте (метаноле, этаноле и др.) облученный раствор имеет в УФ-спектре три максимума при 244, 250 и 260 нм. С помощью тонкослойной хроматографии Boomsma разделил реакционную смесь на отдельные компоненты, выделил их, идентифицировал и установил механизм их образования. Смесь токсистеринов включает по крайней мере четыре серии веществ и в каждой из них содержится несколько изомеров. Серия А состоит из трех изомеров, имеющих пятичленное кольцо В. Токсистерины A-I (XXIV), А-П (XXV) и А-Ш (XXVI), выделенные Boomsma при облучении 7-дегидрохолестерина, по-видимому, аналогичны соединениям А, С и В, недавно полученным Barrett и др. [130] при облучении эргостерина. ■
Продукты серии В — токсистерин В-1 (XXVII), В-2 (XXVIII) и В-3 (XXIX) — являются изомерными аддуктами стерина структуры дигидро- тахистерина с молекулой -спирта.
Токсистерины серии С, из которых выделены токсистерины С-1 (XXX) и С-2 (XXXI), представляют собой производные бицикло-(3.1.0)-гексана. Токсистерин С-1 является главным продуктом переоблучения.
Один из изомеров серии D — токсистерин D-l (XXXII) имеет структуру 9,10-секохолеста-5,8,10( 19)-триен-ЗР-ола.
БИХОЛЕСТАДИЕНОЛ
При облучении 7-дегидрохолестерина (или эргостерина) из облученного раствора выделяется осадок — бесцветное вещество с т. пл. 186—187° и практически нерастворимое в органических растворителях (за исключением пиридина). Впервые бихолестадиенол был описан в 1936 г. Schenk и др. [797].
Flanagan и Thomson [327] в 1965 г. показали, что данный продукт существует в виде двух изомеров, которые были выделены препаративно с помощью тонкослойной хроматографии, а несколько позднее Crabbe и Mislow [217] обнаружили третий изомер. Механизм образования и структура этих трех изомеров (XXXIII—XXXV) были установлены в 1973 г. Boomsma и др. [173, 175].
Недавно Barrett и др. [131] выделили ряд продуктов фотофрагментации эргостерина, представляющих собой производные де-АВ-эргост- 22-ена.
РЕАКЦИИ ГИДРИРОВАНИЯ ВИТАМИНОВ D
При гидрировании витамина D2 (натрий + спирт) Windaus с сотр. в 1932 г. [957, 315] получил дигидровитамин D21. На воздухе и при нагревании до 200° это вещество не изменяется, присоединяет три атома кислорода и переходит в триоксид, имеет три двойные связи (одна в боковой цепи, а две двойные связи ядра не сопряжены, так как в УФ-спектре нет максимума поглощения) [761]. При его окислении озоном не образуется формальдегид, что свидетельствует об отсутствии СН2-группы. Положение двойной связи между С7—С8 подтверждается тем, что при окислении
озоном образуется кетон (С18Н32О), аналогично витамину D3. На основании этих данных Windaus и др. [761, 9791 предложили структуру дигидровитамина D2 I (XXXVI). Аналогичный продукт гидрирования витамина D3 — дигидровитамин D3 I был получен Windaus [9791.озоном образуется кетон (С18Н32О), аналогично витамину D3. На основании этих данных Windaus и др. [761, 9791 предложили структуру дигидровитамина D2 I (XXXVI). Аналогичный продукт гидрирования витамина D3 — дигидровитамин D3 I был получен Windaus [9791.XXXVIIIXXXIXXLXXXVIIIXXXIXXL
озоном образуется кетон (С18Н32О), аналогично витамину D3. На основании этих данных Windaus и др. [761, 9791 предложили структуру дигидровитамина D2 I (XXXVI). Аналогичный продукт гидрирования витамина D3 — дигидровитамин D3 I был получен Windaus [9791.
озоном образуется кетон (С18Н32О), аналогично витамину D3. На основании этих данных Windaus и др. [761, 9791 предложили структуру дигидровитамина D2 I (XXXVI). Аналогичный продукт гидрирования витамина D3 — дигидровитамин D3 I был получен Windaus [9791.
XXXVIIIXXXIXXL
XXXVIIIXXXIXXL
В 1954 г. Schuberg [807, 8081 провел каталитическое гидрирование витамина D2 с никелем Ренея и получил дигидровитамин D2II (XLI), а при восстановлении натрием в бутаноле получил дигидровитамин D21 и в качестве побочного продукта — дигидровитамин D2 IV (XL) [809]. Westerhof и др. [9391 установили, что УФ-спектр дигидровитамина D2IV практически идентичен УФ-спектру дигидровитамина Ь2П,что указывает на одинаковую хромофорную систему, а в ИК-спектре имеются полосы поглощения транс-этиленовой связи и экваториальная ОН-группа, тогда как у дигидровитамина D2II она аксиальная [809]. Эти данные интерпретированы
таким образом, что гидрирование двойной связи С10—С19 в витамине D2 приводит к образованию С10-цис- и С10-транс-соединений, из которых транс-изомером является дигидровитамин D2II, а ^нс-изомером — дигидровитамин D2IV.
Еще два дигидровитамина D2 были получены Westerhof и др. [9391. При восстановлении витамина D2 натрием в N-метиланилине и эфире кроме дигидровитамина D2I был получен дигидровитамин D2V (XXXVII), а при восстановлении витамина D2 Pd/CaCO3 в присутствии пиридина выделен в виде масла дигидровитамин D2VI (XXXVIII).
Дигидровитамины D нетоксичны, антирахитически неактивны или малоактивны (500 у в день). Однако они представляют большой интерес в связи с тем, что легко превращаются в биологически высокоактивный ди- гидротахистерин (XXXIX) (о его активности см. главу III).
Дигидротахистерин-2 и дигидротахистерин-3 также относятся к продуктам гидрирования витамина D2 и D3. Werder получил дигидротахисте- рин-2 в 1939 г. [934] при восстановлении витамина D2 или тахистерина натрием в пропаноле, а дигидротахистерин-3 был получен в 1956 г. [8901 при восстановлении тахистерина-3 литием в аммиаке. Важные биологические свойства дигидротахистерина-2 и дигидротахистерина-3 стимулировали поиски новых методов их получения. Westerhof, Keverling Buisman [937, 939, 941, 9401 и другие авторы [269, 268, 457, 493, 567, 568, 456, 499, 628, 10, 66] разработали способы их получения из витаминов D2 и Da,5,6-транс- витаминов D, тахистерина, превитамина, дигидровитаминов D21, II, IV. Полное гидрирование всех четырех двойных связей витамина D2 приводит к октагидровитамину D2 (XLII) [574].
РЕАКЦИИ ХИМИЧЕСКОЙ ИЗОМЕРИЗАЦИИ
ВИТАМИНОВ D И РОДСТВЕННЫХ СОЕДИНЕНИЙ
При исследовании структуры превитамина-2 Koevoet и др. [566] установили, что под влиянием небольшого количества йода и дневного света превитамин-2 (или его 3,5-динитробензоат) легко превращается в тахистерин-2 (или его 3,5-динитробензоат). Это превращение интерпретировано как реакция цис-, /пране-изомеризации; было обнаружено, что подобная изомеризация характерна также для витамина D и других родственных соединений.
Витамины D2 и D3 в растворе петролейного эфира в присутствии небольшого количества йода изомеризуются в 5,6-транс-витамины D2hD3(XLIII) [911], что сопровождается сдвигом максимума поглощения в УФ-спектре от 265 к 273 нм и увеличением £}& от 475 до 580 нм.
Inhoffen с сотр. [468, 471] осуществил частичный синтез 5,6-транс- витамина D2 и установил [479, 483], что под влиянием УФ-облучения 5,6- транс-витамины D2 и D3 превращаются в витамины D2 и D3, т. е. реакция, цис-, транс-изомеризации обратима.
При высокой концентрации йода витамин D2 изомеризуется в изотахи- стерин (XLV) [9131. Inhoffen с сотр. [461, 465, 4761 провел химическую изомеризацию эфиратом BF3 и обнаружил, что витамин D2 в этом случае изомеризуется в изовитамин D2 (XLIV) и изотахистерин (XLV), а в результате изомеризации 5,6-транс-витамина D2 образуется изовитамин D2 и изотахистерин. Превитамин (II) и тахистерин (III) под влиянием BF3 изомеризуются в изотахистерин, имеющий наиболее выгодную в термодинамическом отношении триеновую структуру.
Sklan и Budowski [824] изомеризовали витамин D2 в изотахистерин трифторуксусной кислотой. Химическая изомеризация витаминов D аце- тилхлоридом, треххлористой сурьмой, BF3 и йодом была изучена японскими исследователями [543, 547—551, 558, 559].
По данным Kobayashi [547], витамин D2 в присутствии ацетилхлорида сначала изомеризуется в изовитамин D2, а последний — в изотахистерин. Разработанные Kobayashi [544—546, 5581 методы количественного определения витамина D2 в смеси с его изомерами с помощью тонкослойной и газожидкостной хроматографии позволили изучить механизм реакции изомеризации витамина D2 йодом, эфиратом BF3 и ацетилхлоридом [552, 5581. Механизм реакции изомеризации, протекающей под влиянием BF3 [559], может быть представлен схемой, приведенной на стр. 69. '
Sheves и др. [817] изучили изомеризацию тозилата витамина D3 в 3,5- цикловитамин D3 и превращение последнего в цис- и транс-витамины D3.
РЕАКЦИЯ ОКИСЛЕНИЯ ВИТАМИНОВ D
При окислении сильными окислителями (СгО3, КМпО4 или озон) разрушается двойная связь С,—С8 и из витамина D2 образуется кетон С19Н34О (LI) [964], а из витамина D3— кетон С18Н32О [128] (см. схему на стр. 70). Окислением гидроксильной группы при С3 Windaus и др. [980] получили 3-кетовитамин D2 (LII) и нашли, что он обладает антирахитической активностью. После восстановления по Меервейну-Понндорфу из (LII) снова был получен витамин D2.
Baron и др. [1281 провели окисление витамина D3 по методу Оппенауэ- ра и получили изокетовитамин D3 (XLVIII), строение которого подтверждено его фотосинтезом из холеста-4,7-диен-3-она (ЫП), продукта окисления (по Оппенауэру) 7-дегидрохолестерина (V). Изокетовитамин D3 также обладает антирахитической активностью.
Динитробензоат витамина D3 был окислен Windaus и др. [982, 9831 тетраацетатом свинца при комнатной температуре. После омыления был получен 3,5,6-триол (XLVI). 3,7,8-Триол витамина Dz (XLVII) образуется при окислении КМпО4 в нейтральной или слабощелочной среде [9271. Окислением динитробензоата витамина D2 надбензойной или надфталевой кислотой в эквимолярных количествах Velluz и др. [9011 получили 7,8-эпок- сид (XLIX) [9471. Перекись водорода окисляет витамин D2 в 5,6-эпоксид (L) [5891. Вагоп и др. [1281 отмечали высокую устойчивость витамина D3 при 0° к перекиси водорода в кислой, нейтральной и щелочной средах. Bland
и Craney [161] описали продукты окисления витамина D3 синглетным кислородом (полученным из NaOCl + Н2О2).1
Аутоокисление витамина D2 и продуктов фотолиза эргостерина было изучено в 1932 г. Inhoffen и др. [460]. Витамин D3 мало стабилен при действии кислорода воздуха. Витамин D3 еще более легко окисляется, однако в виде комплекса с холестерином довольно устойчив к действию кислорода воздуха [128].
Синтез провитаминов D
Отличительной особенностью структуры провитаминов D является наличие двух сопряженных двойных связей в кольце В стерино- вой молекулы при С5—С6 и С7—С8. При активировании УФ-светом такой молекулы происходит разрыв связи С9—С10, что приводит к образованию превитамина, а после термической изомеризации — витамина D.
Провитамины кальциферолов отличаются друг от друга строением алифатической боковой цепи при С17, состоящей из восьми-девяти атомов углерода (см. главу III). В природных источниках наиболее распространен провитамин D2— эргостерин. Он является фитостерином и содержится в больших количествах в пекарских дрожжах (0,29—1,7%), плесени Peni- cilium notatum (1%), в спорынье, паразитирующей на ржи, откуда был выделен в 1889 г. парижским аптекарем Tanret [8611.
Провитамин D3— 7-дегидрохолестерин является стерином животного происхождения, содержится в большом количестве в коже и органах млекопитающих (от 0,1 до 4% общего количества стеринов), в моллюсках и мидиях. В небольших количествах встречается в природных источниках 22- дигидроэргостерин, а остальные провитамины — 7-дегидроситостерин, 7- дегидростигмастерин и 7-дегидрокампестерин получены только синтетическим путем .
В больших количествах эргостерин выделяют из дрожжей, используя различные методы [74, 76], тогда как 7-дегидрохолестерин и другие провитамины получают синтетически.
МЕТОД СИНТЕЗА ПРОВИТАМИНОВ D
ПО WINDAUS
Впервые синтез провитамина D3 — 7-дегидрохолестерина (7-ДГХ) (I) был осуществлен Windaus и сотрудниками в 1935 г. [962]. Исходным продуктом в синтезе является холестерин (II). Оба стерина отличаются друг от друга только наличием дополнительной С7—С8 двойной связи С,—Cg у 7-ДГХ. После ацетилирования холестерина ацетат (III) окисляли хромовым ангидридом в 90%-ной уксусной кислоте до 7-кетопроизводного (IV). Восстановление по Меервейну-Понндорфу изопропилатом алюминия в изопропиловом спирте и омыление спиртовой щелочью дали смесь стереоизомеров 7а (VI) и 7р-оксихолестерина (V), которую бензоилировали
и дибензоаты (VIII) и (VII) подвергали нагреванию при 200°. Как было установлено в дальнейшем, при отщеплении бензойной кислоты от (VII) и (VIII) образуется бензоат 7-ДГХ(Х), а из (VII), кроме того, был получен бензоат холеста-6,8(9)-диен-30-ола — изодегидрохолестерин (IX) [973, 1911. В результате омыления (X) спиртовой щелочью образуется 7-ДГХ (I).
Этим методом в 1936 г. были получены два других провитамина — 7- дегидроситостерин [10011 и 7-дегидростигмастерин [596]. Общий выход провитаминов составлял не более 4%.
В течение последующих лет были опубликованы работы по усовершенствованию метода Windaus. Особое внимание обращалось на изучение реакции аллильного окисления эфиров холестерина. Выход 7-кетона (IV) при использовании СгО3 в 90%-ной уксусной кислоте составлял 26—28% [191, 962), в ледяной уксусной кислоте — 33% [316, 3171, а после улучшения методики Fieser достиг 43% [320].
' Meuly [6331 для окисления ацетата холестерина (ХАс) применил безводный хромат натрия в смеси уксусная кислота — уксусный ангидрид и получил соединение (IV) с выходом 58%, a Marshall и др. [6181, используя этот метод для окисления других А5-стеринов, получали 7-кетоны с выходом до 79%. При окислении третбутилхроматом выход (IV) возрос до 92% [6931, хотя Bloch [1621, окисляя (III) по методу Heusler и др. [4161, получил только 60%. Автор и сотрудники при окислении ацетата холестерина и Зр-фторхолестерина третбутилхроматом постоянно получали 7-кетон с выходом более 90%. Kotek и др. [5701 установили, что
при окислении эфиров холестерина третбутилхроматом наряду с 7-кетопроизводным образуются 5р,6-окиси, которые в дальнейшем окисляются до 5а-окси-6-кетонов.
В. Яблонская и Г. М. Сегаль [75] окисляли (III) безводным комплексом хромового ангидрида с пиридином [234], получая ацетат 7-кетона с выходом 80%. Wildi [943] получал 7-кетопроизводное при пропускании кислорода в горячий раствор ацетата холестерина в кумоле в присутствии гидроперекиси кумола (выход 27%), a Ringold и др. [762] — при окислении 7а-бромпроизводных хромовой кислотой.
Восстановление 7-кетона по Меервейну-Понндорфу Windaus и др. [962] осуществили, используя изопропилат алюминия, и получили 7-оксихоле- стерин с выходом 30% (Baser и др. [1911 — 20%). Позднее Windaus и Schenk [967, 968] использовали алкоголяты циркония и магния, a Fieser и др. [317] нашли, что целесообразнее проводить восстановление ЫА1Н4. В этом случае основным продуктом является 7£-оксихолестерин (V) и, кроме того, образуется не более 5% 7а-оксихолестерина (VI).
Barr и др. [129] получали 7-окси холестерин при окислении фталата холестерина содовым раствором перманганата калия, a Wintersteiner и др. [987, 1401 — при окислении коллоидного раствора холестерина кислородом (выход 25—30%). Превращение Зр, 7р-дибензоата 7£-оксихолестерина (VII) в ЗР-бензоат (X) Windaus и др. [9621 осуществили пиролизом (выход 48%). Rosenberg [7641 и Buser [1911 при кипячении дибензоата с диметил- или диэтиланилином по методу Haslewood [381] получали соединение (X) с выходом до 69%. Немного ниже выход при нагревании в тетралине [632] или в бензонитриле [767].
Были предложены другие методы получения 7-дегидро холестерин а путем пиролиза ацетата 7-аминохолестерина [307] или холестан-3р,5а,бр- триола [5931. Wintersteiner и Ruigh [988, 9911 превращали 3,7-дибензоат 7р-оксихолестерина при обработке метанольным раствором метилата натрия в 7-бензоат, а последний кипятили с диметиланилином по Haslewood [3811. Milas, Heggie [635] и другие 1780, 624] дегидрировали ацетат холестерина в 7-дегидрохолестерин различными хинонами в кипящей уксусной кислоте (выход 30%). 7-Оксихолестерин был превращен в 7-дегидрохолестерин нагреванием со щавелевой кислотой [835], эфирами серной кислоты в пиридине [8281 или в вакууме при 135° [542].
г Dauben и др. [227, 228] разработали способ получения 7-дегидро холестерина из доступного холест-4,6-диен-3-она (XI). При реакции со смесью ацетилхлорида и уксусного ангидрида (XI) превращается в ацетат триена (XII), а в результате восстановления последнего NaBH4 образуется смесь За- и Зр-оксиизомеров 5,7-диенов, в которой соединение (I) составляет свыше 73%.
XIХ11
Несмотря на многочисленные усовершенствования метода синтеза 7- дегидрохолестерина по Windaus, максимальный выход провитамина D3 составлял всего 15% [68]. Ни этот метод, ни другие, описанные выше, не нашли практического применения.
В 1942 г. Ziegler и corp. [1002] установили, что водород в аллильном положении ненасыщенных соединений может быть замещен галоидом при реакции с N-галоидимидами органических кислот. В работе Ziegler было показано, что эфиры холестерина могут реагировать с N-бромсукци- нимидом с образованием 7-бромпроизводного. Эти исследования Ziegler положили начало новому способу синтеза 7-дегидрохолестерина, который
XV
•был предложен в 1946 г. Jones и др. [515, 401]. Он явился предметом многочисленных дальнейших исследований и в настоящее время используется при промышленном получении провитамина D3. Исходным продуктом, как и в синтезе Windaus, является холестерин (II). Эфир холестерина (XIII) аллильно бромировали N-бромсукцинимидом в (XIV), последний дегидро- бромировали и полученный (XV) омыляли в провитамин D3 (I).
РЕАКЦИЯ АЛЛИЛЬНОГО БРОМИРОВАНИЯ
Впервые аллильное бромирование органических соединений было проведено Wohl в 1919 г. [994, 995] с помощью N-бромацетамида. Но только после того как Ziegler и др. [1002] в 1942 г. осуществили эту реакцию с более доступным реагентом — N-бромсукцинимидом, она получила широкое распространение. ■
Согласно современным представлениям, реакция аллильного замещения протекает по радикальному механизму. Она значительно ускоряется в присутствии радикальных инициаторов — перекиси бензоила [803], динитрила азоизомасляной кислоты [328], окислительно-восстановительных систем [438], а также под влиянием тепла и света. О радикальной природе этой реакции свидетельствует тормозящее действие таких веществ, как кислород, йод, хинон, нитрозосоединения, являющихся ингибиторами радикальных процессов.
Из предложенных механизмов реакции аллильного бромирования наиболее вероятными были признаны механизмы Bloomfield [163] и Goldfinger [102, 103]. Механизм реакции по Bloomfield, подтвержденный позднее Dau- Ьеп [2251, состоит в гомолитической диссоциации N-бромсукцинимида (SNBr) под влиянием радикального инициатора Р (тепла, света, перекиси бензоила и т. д.). Свободный радикал сукцинимидил SN- отщепляет аллильный атом водорода от бромируемого соединения RH с образованием аллильного радикала R'.
Г + SNBr -» SN' + IBr,
SN' + RH -» R1 + SNH,
R‘ + SNBr -> SN' + RBr.
При взаимодействии последнего c SNBr образуется RBr.
Согласно механизму Goldfinger [102, 1031, реакция аллильного бромирования включает образование при инициировании радикала брома Вг, при взаимодействии которого с RH образуются аллильный радикал R- и бромистый водород.
Г + Вг2 -> IBr + Вг",
Вг1 4- RH -> HBr + R-,
HBr + SNBr -> Br2 + SNH,
R- + Вг2 RBr + Вг",
2Вг Вг2.
Далее NSBr при взаимодействии с НВг выделяет молекулярный бром, который с R* образует продукт бромирования RBr. Этот механизм был подтвержден в работах многих авторов: Sixma [822], Tedder [626], Incremo- па и Martin [459] и др.
При аллильном бромировании протекают две побочные реакции, связанные с преобразованием продукта аллильного замещения — аллильная перегруппировка:
или отщепление бромистого водорода, особенно в случае образования сопряжения:
Обе побочные реакции можно затормозить ведением процесса при более низкой температуре и хорошей активации, но полностью исключить нельзя.
Установлено [4381, что реакция аллильного бромирования протекает на поверхности кристаллов N-бромсухцинимида (NBS), поэтому наилучшим растворителем для этой реакции является четыреххлористый углерод, в котором NBS практически нерастворим. Скорость реакции тем выше, чем больше поверхность кристаллов NBS. Уменьшение поверхности NBS путем получения крупных кристаллов при перекристаллизации или сведение ее к нулю при растворении в полярном растворителе, например в тетрахлорэтане или нитрометане, ведет к полной потере активности NBS в реакции аллильного замещения. В этом случае происходит присоединение брома по двойной связи. Кроме четыреххлористого углерода для проведения аллильного бромирования используют неполярные растворители: циклогексан,' бензол и углеводороды.
" В качестве бромирующих агентов кроме NBS и N-бромацетамида применяют элементарный бром [4401, N-бромфталимид, NN-дибромбензолсуль-
фамид [888, 5001, перфторированные бромиды (например, бромтетрафтор- сукцинимид) [459], 1,3-дибром-5,5-диметилгидаятоин («дибромантин») [694, 444]. Последний наиболее удобен как агент с наивысшим содержанием брома. Более подробно реакция аллильного бромирования и условия ее проведения рассмотрены в обзорных статьях [291, 52, 438, 440].
Бромирование эфиров холестерина впервые описано Obermuller в 1891 г. [6811. При бромировании бензоата холестерина (ХБ) бромом в сероуглероде о и получил монозамещенное производное с т. пл. 138°. Затем Doree и Orange [295] в 1916 г., бромируя бензоат холестерина бромом в растворе хлороформа, выделили монобромид с т. пл. 142° и дибромид с т. пл. 168—169°. Petrow в 1937 г. [711] ошибочно идентифицировал монобромид как 5,5'-дибром-3,3'-дибензокси-6,6'-дихолестанил (XVI). Формула дибромида (XVII) была установлена Bretschenider и др. [183] в 1941 г., а истинная структура монобромида оставалась неизвестной до 1946 г., когда Henbest, Jones и др. [515, 401] охарактеризовали его как эфир 7-бромхолестерина.
Xvi
При аллильном бромировании эфиров холестерина сначала образуется продукт, обладающий слабоотрицательным вращением, которое со временем, особенно в полярных растворителях, например в хлороформе, резко возрастает. Этот сильно отрицательно-вращающий продукт был выделен в кристаллическом виде и определен как эфир 7а-бромхолестерина (XIX) (ацетат — т. пл. 109—110°, [а]д — 245° (хлороформ) [1531; беизоат — т. пл. 143—144°, [a]D— 184° (хлороформ) [793, 7941). При бромировании бензоата холестерина бромом в сероуглероде Schaltegger и Milliner [794] выделили положительно-вращающий эпимер бензоат 70-бромхолестерина (XVIII) с т. пл. 114—115° и Ыо +20°.
Истинная конфигурация 7-бромпроизводных холестерина, как и 7-оксипроизводных, установлена в 1952 г. [4181. Это следует иметь в виду при знакомстве с ранними работами по аллильному бромированию эфиров холестерина, так как во многих из них авторы использовали неправильные обозначения для а- и 0-изомеров [153, 154, 403, 4041. В связи с этим необходимо кратко остановиться на исследованиях по стереохимии 7-оксипроизводных холестерина и холестанола, аналогично которым принята конфигурация 7-бромзаместителей.
Windaus и Nagatz [9771 дали первоначальные обозначения а- и 0-эпимеров 7-оксипроизводных, в соответствии с которыми эпимер, полученный Windaus и др. [962] при восстановлении ацетата 7-кетохолестерина изопропилатом алюминия, имел a-конфигурацию (т. пл. 178°) [9681. Barr и др. [1291 при окислении фталата холестерина КМпО4 получили другой эпимер и обозначили его как 70-окси холестерин (т. пл. 184—185°, [а]д — 86,4е). Оптическое вращение для продукта, полученного Windaus, определили Wintersteiner и Ruich в 1942 г. [989] ([«Ь +7,2°) и установили, что оба
эпимера образуются единовременно, но продукте т. пл. 185°присутствует в небольших количествах. Ruzicka и др. [7781 определили равновесный состав этих диолов. Подобным образом были определены и 7-оксипроизводные холестанола, полученные сначала Marner и Rohrmann [617], а затем Winter- steiner и Moore [9901 при гидрировании ацетата 7-кетохолестерина в присутствии РЮ2 в уксусной кислоте и гидролизе ацетата 5а-холестан-ЗР-ол- 7-она изопропилатом алюминия. Диолы имели т. пл. 168°, [а]д +52,9° и т. пл. 153°, [а)о +8,1°; первый был обозначен как а-эпимер, второй — как р-эпимер.
Н2/РЮ2Н2/РЮ2а) т. пл. 178°, Ыо +72° в) т пл. 192°, [a]D +14“а) т. пл. 178°, Ыо +72° в) т пл. 192°, [a]D +14“а) т. пл. 157°, [a]D -90° в) т. пл. 168°, [а]о -50,5°а) т. пл. 157°, [a]D -90° в) т. пл. 168°, [а]о -50,5°SO2C12 IC5H5N .SO2C12 IC5H5N .] PCfs] PCfsа) т. пл. 168°, [a]D +52,9° а) т. пл. 153°, Ыс +8,1°a) R = Hб) R = CH3COв) R = C6H5COа) т. пл. 168°, [a]D +52,9° а) т. пл. 153°, Ыс +8,1°a) R = Hб) R = CH3COв) R = C6H5CO
Н2/РЮ2
Н2/РЮ2
а) т. пл. 178°, Ыо +72° в) т пл. 192°, [a]D +14“
а) т. пл. 178°, Ыо +72° в) т пл. 192°, [a]D +14“
а) т. пл. 157°, [a]D -90° в) т. пл. 168°, [а]о -50,5°
а) т. пл. 157°, [a]D -90° в) т. пл. 168°, [а]о -50,5°
SO2C12 I
C5H5N .
SO2C12 I
C5H5N .
] PCfs
] PCfs
а) т. пл. 168°, [a]D +52,9° а) т. пл. 153°, Ыс +8,1°
a) R = H
б) R = CH3CO
в) R = C6H5CO
а) т. пл. 168°, [a]D +52,9° а) т. пл. 153°, Ыс +8,1°
a) R = H
б) R = CH3CO
в) R = C6H5CO
В то же время такая номенклатура для 7-эпимеров не соответствовала предложенной Iwasaki [503] для За,7-диоксихолановых кислот, для которых 7р-эпимер имел более высокое положительное вращение, чем 7а-эпи- мер. Поэтому Plattner и Heusser [721] по аналогии с диоксихолановыми кислотами приписали эпимеру с большим положительным вращением конфигурацию 70-оксихолестерина, а с меньшим — 7а-оксихолестерина. И хотя аргументы Plattner и Heusser не были достаточно убедительными, их поддержали Fieser и др. [317] и подтвердили правильность такого выбора следующими соображениями: диол холестанового ряда с меньшим положительным вращением (XXVII) более легко дегидратируется в пиридине РОС13 до холест-7-ен-Зр-ола (XXVIII), по Buser 1191]. А так как транс-элиминирование является более предпочтительным, этот эпимер должен содержать гидроксильную группу при С7 в транс-положении к р-ориентиро- ванному водороду при С8 и, следовательно, должен быть 7а-изомером. Второй изомер, более правовращающий (XXVI), в тех же условиях не дегидратируется, а превращается в 7-хлорпроизводное.
Однако Schaltegger и Milliner [794], рассматривая эпимеризацию 7а- и 7р-бромпроизводных, высказали мнение, что истинная конфигурация заместителей при С7 является противоположной предложенной Fieser и др. [3171. Чтобы окончательно решить этот вопрос, Heymann и Fieser [418] провели гидрирование правовращающего 7-оксихолестерина в 7-оксихолес- танол, а последний превратили в 3,4-секо-7-оксихолестан-3,4-дикарбо новую кислоту, образующую у-лактон, что возможно только в том случае, когда гидроксильная группа при С7 находится в (3-положении. Кроме того, Вйгки и др. (см. [4431) при рентгенографическом исследовании подтвердили, что эпимер 7-бромпроизводного с сильноотрицательным вращением обладает 7а-конфигурацией.
Реакции замещения у 7-углеродного атома протекают обычно с обращением конфигурации [154, 403, 404, 72]. При взаимодействии (XXI) с РС18 образуется 7а-хлорироизводное (XXV), а с РВг3— 7а-бромпроизвод- ное (XIX) [368, 5301. При гидролизе эфира 7а-бромхолестерина AgOH основным продуктом является эфир 7|3-оксихолестерина (XXI) и небольшое количество 7а-эпимера.
Таким образом, исследования по стереохимии доказали, что при аллильном бромировании эфиров холестерина образуется 7|3-бромпроизвод- ное, имеющее слабое положительное вращение, которое со временем, особенно в полярных растворителях, переходит в более устойчивый 7а-эпимер с сильным отрицательным вращением. Но в молекуле холестерина имеется два аллильных положения — при С4 и С7, и, естественно, возникает вопрос, почему не замещается водород при С4. Поскольку такой продукт не был выделен, Schaltegger [7931 предположил, что бромирование при С4 затруднено расположением аллильного атома углерода в другом кольце по отношению к двойной связи, а также особой устойчивостью электронного октета четвертого углеродного атома. Однако автор и сотр. [88] показали, что в том случае, когда при С, имеется заместитель (например, кетогруппа), при аллильном бромировании с высоким выходом образуется 4-бромпроиз- водное (XXX).
Впервые аллильное бромирование ацетата холестерина NBS было проведено в эфире. Реакция продолжалась 8 ч. При применении четыреххлористого углерода и облучения УФ-светом [5281 или смеси петролейного эфира и бензина [153, 444] реакция заканчивается в течение нескольких минут. Из бромирующих агентов были использованы NBS [515, 401, 528], N-бромфталимид [144] и элементарный бром при облучении УФ-светом в
сероуглероде [793]. Лучшие результаты получены при бромировании 1,3- дибром-5,5-диметил гидантоином (ДБГ) в смеси бензин — петролейный эфир [4441 или в четыреххлористом углероде в присутствии радикальных инициаторов [82, 88]. При бромировании бензоата холестерина 3-бром-4,4-диме- тил-2-оксозолидиноном также был достигнут более высокий выход бензоата 7-дегидрохолестерина (дегидробромирование коллидином), чем при применении NBS [519].
Ацильная группа эфира холестерина оказывает решающее влияние на выход и устойчивость продукта бромирования. Из эфиров холестерина были использованы ацетат, бензоат, 3,5-динитробензоат [1441, изокапроат [667], стеарат [529, 245], метиловый эфир [1471, тозилат [793], а также 30- фтор- [89], хлор- и бромхолестерины [143, 838]. Наиболее подходящим оказался бензоат холестерина, его производные лучше кристаллизуются по сравнению с ацетатами и более доступны, чем остальные эфиры.
При аллильном бромировании элементарным бромом в сероуглероде в качестве побочного продукта Schaltegger [793] выделил бензоат 5а,60- дибром холестерина (XVII), строение .которого установили Barton и Muller [1321. В реакционной смеси практически всегда имеются продукты гидролиза бензоата 7-бромхолестерина—бензоаты 7а- и 70-оксихолестерина (XXII в и XXI в). При бромировании в четыреххлористом углероде в присутствии динитрила азоизомасляной кислоты автором был выделен эфир 4-бромхо- лест-5-ен-30-ол-7-он (XXX) [881, образующийся, вероятно, при окислении 7-бромпроизводного до 7-кетосоединения [7621 и аллильном бромировании последнего. Кроме того, в процессе бромирования происходит отщепление бромистого водорода и образование небольшого количества эфира 7-дегидрохолестерина (X) [801.
Поэтому в такой сложной смеси трудно провести количественное определение эфира 7-бромхолестерина. Schaltegger и Milliner [794] предложили колориметрическое определение, основанное на способности эфира 7-бромхолестерина давать синее окрашивание с хлороформным раствором SbCl3. Однако 7-оксипроизводные дают такую же реакцию с более интенсивной окраской и мешают определению.
Автор и сотр. (см. главу VIII) пытались разработать полярографический метод определения 7-бромпроизводного в растворе после бромирования. Однако наиболее удобным и достоверным является метод аргентометрического титрования, основанный на способности эфира 7-бромхолестерина количественно реагировать с раствором AgNO3 в диоксане [88]. Соединения (XVII) и (XXX) в этих условиях не реагируют с AgNO3. С помощью аргентометрического титрования установлено, что при бромировании бензоата холестерина 1,3-дибром-5,5-диметилгидантоином в кипящем четыреххло-
ристом углероде в присутствии динитрила азоизомасляной кислоты выход бензоата 7-бромхолестерина в реакционном растворе превышает 90% [881, тогда как после упаривания растворителя и высаждения ацетоном в кристаллическом продукте его содержится только 63% [801.
Таблица 6. Условия бромирования эфиров холестерина
Условия бромирования
Выход эфира 7-бромхолестери- на, %
Литература
NBS, эфир, 8ч
[515, 401]
NBS, СС14, УФ-облучение NBS, петролейный эфир
—
[528]
30—42
[153]
NBS, N-бромфтальимид, петролейный эфир (т. кип. 55— 50°)
41,5
[144]
Вг2, CS2, УФ-облучение Вг2 СС14, УФ-облучение
73
[793, 795, 920]
—
[918]
NBS, петролейный эфир (60—80°), циклогексан (активатор), Са(ОН)2.
—
[606]
NBS, N-бромфтальимид, петролейный эфир (60—80°), а-пиколин, сил<-коллидин, никотииимид и др.
718]
Дибромид гексаметилентетралина, дибромид пиридииги- дробромида, СС14, УФ-облучение
—
[800]
2, 4, 6-Трихлор-6-бром или 2,4,6, 6-тетрабром-1, 4-цик- логексадиен-3-он, УФ-облучение
61
[917]
NBS, бензол, катализаторы — аллильные и аралкильные эфиры азотистой кислоты (например, бензилиитрит)
68,8
[380]
1, 3,-Дибром-5, 5-диметилгидантоин, петролейный эфир (50—70°) + бензин (70—110°), 10 мин
—
|444, 923]
1, З-Дибром-5, 5-диметилгидантоин, динитрил азоизомасляной кислоты СС14, 105° 1.5—2 мин
90
[82, 88]
З-Бром-4, 4-диметил-2-оксозолидинои. гексан, т. кип., 4 мии, УФ-облучеиие
—
1519]
В табл. 6 приведены данные по бромированию эфиров холестерина различными бронирующими агентами в различных условиях. Лучшими в настоящее время являются методы Hunziker и Milliner [4441 и автора [82, 881.
РЕАКЦИЯ ДЕГИДРОБРОМИРОВАНИЯ
Реакции дегидробромирования предшествует эпимеризация эфиров 7-бромхолестерина в растворе в равновесную смесь 7а- и 70- изомеров Эпимеризация 7-бромпроизводных протекает гораздо быстрее, чем 7-оксипроизводных [7781, вследствие большей подвижности атома брома [8041. На скорость эпимеризации в значительной степени влияет температура и полярность растворителя. В бензине она практически не происходит, а в растворе хлороформа, ацетона, эфира и других полярных растворителей скорость эпимеризации так велика, что нельзя определить исходное значение угла удельного вращения (рис. 3) [7941.
По данным Schaltegger и Milliner [7941, равновесная смесь состоит из 70% 7а- и 30% 70-эпимера. Учитывая легкость аллильной перегруппировки для 70-эпимера, в равновесии, вероятно, находится три вещества — эфиры 7а-, 70-бромхолестерина (XIX и XVIII) и 5а-бром-холест-6-ен-30-ола (XXXI). Об образовании последнего соединения может свидетельствовать выделенный Henbest [4021 холест-6-ен-30,5а-диол (XXXII), полученный при щелочном гидролизе эфира 7-бромхолестерина AgOH.
1,1* — в растворе бензина; 2,2'—• диметнланнлина; 3 — ацетона; 4 — эфира.1,1* — в растворе бензина; 2,2'—• диметнланнлина; 3 — ацетона; 4 — эфира.
1,1* — в растворе бензина; 2,2'—• диметнланнлина; 3 — ацетона; 4 — эфира.
1,1* — в растворе бензина; 2,2'—• диметнланнлина; 3 — ацетона; 4 — эфира.
В процессе дегидробромирования участвуют различные механизмы — термическое и ионное элиминирование — в зависимости от применяемых оснований и условий проведения реакции (температура, гомогенная или гетерогенная среда).
При нуклеофильной атаке водородного атома у С8 7а-изомера (XIX) и непосредственном отщеплении 8р-Н и 7а-Вг образуется эфир 7-де- гидрохолестерина (X). При нуклеофильной атаке водорода у С4 эфира 5а-бромхолест-6-ен-3р-ола и отщеплении бромистого водорода должен образоваться эфир холеста-4,6-диен-3|3-ола (XXXIV). Этот диен был выделен Keverling Buisman и др. [528] при дегидробромировании эфира 7-бром- холестерина диметиланилином вместе с основным продуктом реакции. .
При дегидробромировании Са(ОН)2 в кипящем ксилоле Schmutz и др. [804] обнаружили еще один продукт реакции — холеста-2,4,6-триен (XXXV). Установлено, что он образуется в ре-
зультате отщепления бензойной кислоты из (XXXIV) при нагревании или под влиянием различных оснований. Например, при нагревании (XXXIV) при 135° в присутствии пиридина образуется 58% (XXXV), а в присутствии уксусного ангидрида при 140°—56% [804]. Таким образом, при де
получаетсяполучается8#8#гидробромировании эфиров 7-бромхолестерина одновременно три продукта реакции.гидробромировании эфиров 7-бромхолестерина одновременно три продукта реакции.6 8-2696 8-269XXX VIIXXX VII
получается
получается
8#
8#
гидробромировании эфиров 7-бромхолестерина одновременно три продукта реакции.
гидробромировании эфиров 7-бромхолестерина одновременно три продукта реакции.
6 8-269
6 8-269
XXX VII
XXX VII
Рис. 4. Изменение угла удельного вращения растворов бензоата 7-бромхолестернна под влиянием различных оснований:/—а-пнколнн (I, 0 М); 2—а-пн- колин (0,2 М); 3 — сим-колли- дин, 5 — ДБН, 4 — без добавления основания.Рис. 4. Изменение угла удельного вращения растворов бензоата 7-бромхолестернна под влиянием различных оснований:/—а-пнколнн (I, 0 М); 2—а-пн- колин (0,2 М); 3 — сим-колли- дин, 5 — ДБН, 4 — без добавления основания.
Рис. 4. Изменение угла удельного вращения растворов бензоата 7-бромхолестернна под влиянием различных оснований:
/—а-пнколнн (I, 0 М); 2—а-пн- колин (0,2 М); 3 — сим-колли- дин, 5 — ДБН, 4 — без добавления основания.
Рис. 4. Изменение угла удельного вращения растворов бензоата 7-бромхолестернна под влиянием различных оснований:
/—а-пнколнн (I, 0 М); 2—а-пн- колин (0,2 М); 3 — сим-колли- дин, 5 — ДБН, 4 — без добавления основания.
По данным автора, на скорость эпимеризации 7-бромпроизводных и
состав равновесной смеси влияет не только растворитель и температура, но в значительной мере и основание. Угол удельного вращения раствора бензоата 7-бромхолестерина в четыреххлористом углероде непосредственно после реакции бромирования равен —70°, что соответствует ~56% 7р-эпимера и ~44% 7а-эпи- мера. В растворе четыреххлористого углерода угол удельного вращения со временем изменяется незначительно (рис. 4, 4), т. е. влияние растворителя в этом случае мало. В присутствии даже каталитических количеств си.и-колли- дина (рис. 4, 5), а особенно а-пиколина (рис. 4, 1, 2^ равновесие смещается в сторону бензоата 7а-бромхолестерина, необходимого для образования 5,7-диена. Совершенно другие изменения наблюдаются при добавлении к раствору каталитических количеств 1,5-диазобицикло-3,4,0-но- нена-5 (ДБН) (рис. 4, 5). Отрицательный угол вращения резко уменьшается и уже через 30 мин
становится положительным, что свидетельству - ет о присутствии практически одного 7р-эпиме- ра. Эти данные хорошо согласуются с результатами дегидробромирования бензоата 7-бромхолестерина NaHCOg в присутствии а-пиколина, сил-коллидина и ДБН (табл. 7).
В опытах с а-пиколином выход 5,7-диена
составляет 66%, 4,6-диена — 25% и 2,4,6-трие- на — 5,5%, а с ДБН единственным продуктом реакции является 4,6-диен.
Jaworska и др. [510, 511, 512] при дегидробромировании бензоата 7- бромхолестерина двууглекислым натрием в присутствии каталитических количеств Hg2Cl2 и сил-коллидина получили 4,6-диен с выходом 92%. Дегидробромирование 2,6-лутиднномтакже приводит к образованию только
Таблица 7. Результаты дегидробромирования бензоата 7-бромхолестерина NaHCOg в присутствии различных оснований
Основание
Количество основания, моль
Получено, %
5,7-днена
4,6-диена
2,4, 6-диена
а-Пиколин
0,2—1,0
66,0
25,0
5,5
сил-Колл ид ин
0,2
39,0
36,0
—
ДБН
0,2
—
80,0
—
4,6-диена с 65%-ным выходом [1531, а дегидробромирование с N.N-диэтил- циклогексиламином — к выходу 70% [4431. Несмотря на большое число исследованных оснований (табл. 8), пока не удалось найти условий для смещения равновесия эпимерной смеси бромидов в сторону образования 7а- эпимера и получить высокий выход 5,7-диена.
В зависимости от условий при дегидробромировании бензоата 7-бром- холестерина образуются другие сопряженные и несопряженные холеста- диены и холестатриены. Hunziker, Milliner и др. [443] при дегидробромиро-
Таблица 8. Условия дегидробромирования эфиров 7-бромхолестерина различными основаниями и продукты реакции
Дегндробромнрующне агенты
Продукты реакции и выход *
Литература
Диэтнланилин
Диметиланилин
Хинолин
Пиридин
Пиридин (100°, 5 ч)
а- и у-Пиколин (20°, 10 ч)
а-Пиколин (ксилол, т. кип., 20 мии)
2,6-Лутидин
си.и-Коллидин (т. кип.)
сц^-Коллидин (ксилол, т. кип.)
cu-и-Коллидин (мезитилен, т. кип., 35 мин)
си.и-Коллидин (20°, 10 ч)
Хинальдин (бензол, ксилол)
Комплекс хинальдина с мочевиной или формамидом (ксилол, т. кип., 75 мин)
Бетаин, глицин, никотиновая кислота, мочевина
Хинин и папаверин (ксилол, 150°, 90 мин)
Бруцин, наркотин, наркотолин (ксилол, т. кип., 90 мин)
Полиамиды (толуол, т. кип., 150 мин) Гексаметилентетрамин (уротропин) (ксилол, т. кип., 10 мин)
Амидопирин или анальгин (ксилол, 150°, 10 мин)
Na- и Са-соли а- и (3- аланина (ксилол, т. кип., 75 мин)
Триметилфосфит (ксилол, 125°, 90 мин)
Триэтилфосфит (ксилол, 130°, 60 мии)
Диоксафосфоланы (например, 2-этокси-1, 3, 2-диоксафосфолан)
1,2-Эпокси-З-феноксипропан (ксилол, 20 мин)
Окись этилена (ксилол, т. кип., 4 ч) 50%-ный раствор NaOH (ксилол, т. кип.)
КОН, NaOH (вода, ксилол, т. кип. 30 мин)
Са(ОН)2 (ксилол)
NH3, (NH4)2CO3, NH4HCO3 (ксилол, 150°, 180 мин)
NH3 (ксилол-нитробензол) (1 : 1)
Силикат натрия или калия (ксилол, т. кип., 90 мин)
NaHCOg (ксилол, т. кип., 20 мин)
NaHCOg (ксилол, 100°, 1 ч)
NaHCOg + а-пиколии (1 : 0,04, ксилол, 160°, 25 мин)
7-ДГХ (30% по ХАс) + 4,6-диен
7-ДГХ (33,6%)
7-ДГХ (13,8%)
4,6-Диен (50%)
5,8(9)-Диен (80%)
5,8(9)-Диен (40%)
5,8 (9)-Диен (42%) +
4,6,8 (14)-триен (32%)
4,6-Диен (65%)
7-ДГХБ
7-ДГХБ (41,5%)
Бихолестатриен (10%)
7-ДГХ (30%)
5,8(9)-Диен (35%)
7-ДГХ (48,5%/66,6%) **
7-ДГХ (44,2%/54,1%) ***
7-ДГХБ (43%/83,4%) ***
7-ДГХБ
7-ДГХБ (11,5% и 23,5%)
7-ДГХБ (12,8—17,8%)
7-ДГХБ (46,5%/74%)
7-ДГХБ (47%/89,5%) ***
7-ДГХБ (55%/84%)
7-ДГХБ (68%/81%)
7-ДГХБ (52,1% по ХБ/50,7%)***
7-ДГХБ (55%/81%)***
7-ДГХАс (52,5%)
7-ДГХБ (56%/83%)
7-ДГХБ (45% по ХБ/69%)
7-ДГХБ (53,4%)
6,8(14)-Диен (50%)+
4,6,8 (14)-триен (7%)
7-ДГХБ (27% по холестери-
ну/87%)
7-ДГХБ (35,5%) + 2,4,6-триен
(32,8%)
7-ДГХБ (45,5%/60,5%)
7-ДГХ (17%)
7-ДГХБ (41,8%/82,7%)
8,14-Диен (40%)+ 4,6,8 (14)-
триен (30%)
7-ДГХБ (30%)
7-ДГХБ (66%) + 4,6-диеи (23%);
2,4,6-триен (~5%)
[515,401,516] [528, 243] [244]
[753]
[874]
[874]
[90]
[153]
[528, 113, 753]
[144, 146]
[695]
[533]
[874]
[791]
[776]
[537,115]
[919]
[882, 886]
[884]
[508]
[538]
[22,81]
[536] [444,923]
[409]
[362, 302, 363]
[159]
[507]
[443]
[921]
[804]
[924, 925]
[371]
[535]
[90, 96]
[526, 90}
[82,90}
Продолжение табл. 8
Дегндробромирующне агенты
Продукты реакции и выход *
Литература
Ма2СО3 (этиловый эфир бензойной кислоты, 130°, 15 мин)
Na2CO3 + Hg2Cl2 -f- сим -коллидин (то
луол, т. кип., 30 мин)
7-ДГХ (42% по ХБ/92%) ***
[718,719]
4,6-Диен (92,3%)
[510,511,512]
• Выход дан по бензоату 7-бромхолестернна,
•• После знака / указано процентное содержание эфира 7-ДГХ в продукте реакции.
♦♦• Патентные данные проверены Tutecki н Skwarski [885] или автором н получены значительно более ннзкне выходы.
вании бензоата 7-бромхолестерина водным раствором NaOH в кипящем ксилоле изолировали два продукта реакции — бензоат холеста-6,8(14)- диен-Зр-ола(ХХХУ1) — 50% и холеста-4,6,8(14)-триен (XXXVIII) — 7%. Автор и Л. К. Курченко [90, 961 при дегидробромировании NaHCO3 в кипящем ксилоле получили с 40%-ным выходом бензоат холеста-8,14-диен- Зр-ола (XXXVII) и 30% (XXXVIII).
Оба диена получают при проведении реакции в гетерогенной среде, когда присутствует свободный НВг. Образование (XXXVI) и (XXXVII), вероятно, связано с кислотной изомеризацией первоначально возникающего 7-дегидрохолестерина (X) под влиянием НВг, аналогично образованию изомеров В2, В3 и Bj из эргостерина [681. Действительно, при нагревании (X) в кипящем ксилоле в присутствии NaHCO3 и пропускании в реакционную смесь НВг почти с количественным выходом образуется (XXXVII) как конечный и наиболее устойчивый продукт изомеризации.
Tsuda и др. [874] из бензоата 7-бромхолестерина получили несопряженный бензоат холеста-5,8(9)-диен-Зр-ола (XXXIII). Он образуется с высоким выходом (80%) при нагревании (100°) в течение 5 ч бензоата 7-бромхолестерина с пиридином, а при обработке NH4CNS в ацетоне или а- или у-пиколином этот диен образуется даже при температуре 20°. При кипячении бензоата 7-бромхолестерина в ксилоле в присутствии а-пиколина кроме 5,8(9)-диена (42%) автор и Л. К. Курченко [90] выделили (XXXVIII) (32%). ■
Ottke и Bergmann [695] при нагревании бензоата 7-бромхолестерина с сим-коллидином с невысоким выходом получили бихолестатриен, идентичный 4,6,8,(9)-бихолестерину Hafez [364] с 4,4'-сочленением. Jaworska и др. [509] при перемешивании раствора бензоата 7-бромхолестерина в пе- тролейном эфире с SiO2 выделили 3-('Д36'холестадиенил-3')-А3’5,7-хо- лестатриен (20%).
Установлено [153], что только третичные амины являются дегидробро- мирующими агентами и приводят к получению эфиров 7-дегидрохолестерина. Первичные и вторичные амины реагируют с эфирами 7-бромхолестерина, образуя 7-аминостероиды.
ДРУГИЕ МЕТОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОВИТАМИНОВ D
В последние годы в результате интенсивных исследований по синтезу активных метаболитов и аналогов витаминов D установлено, что существующие методы введения двойной связи С,—С8 в кольцо В не всегда дают возможность получить новые производные 1707] или приводят к
получению смеси 5,7- и 4,6-диенов, из которой провитамины выделить сложно [643], или их выход очень низкий [683, 89]. В связи с этим за последнее время описано несколько новых способов получения провитаминов D. Е. В. Яблонская и Г. М. Сегаль [75] получили ацетат 7-дегидрохолестерина с общим выходом 63,5% по ацетату холестерина. По реакции Bamford и Stevens [125] они получили тозилгидразон ацетата 7-кетохолестерина (XXXIX), а затем при взаимодействии с LiH — ацетат 7-ДГХ.
Условия проведения и механизм последней реакции изучен Г. М. Сегалем и др. [63]. Эфир холеста-4,6-диен-3|3-ола по этому методу не образуется.
Автор и др. [98] аналогичным путем получили 3|3-фторхолеста-5,7-диен с выходом 35% на Зр-фторхолестерин, тогда как при аллильном бромировании и дегидробромировании выход провитамина не превышал 10%. Moriarty и др. [643] этим же способом осуществили синтез 19-ацетата холеста- 5,7-диен-Зр,19-диола; при аллильном бромировании и дегидробромировании основным продуктом был 4,6-диен.
Описан способ получения провитамина la-оксивитамина Ds [333] и его За-эпимера [818]. Бромирование диацетата холест-6-ен-1а,3р-ди- ола (XL) бромом в СН2С12 в дибромид (XLI) и дегидробромирование последнего при нагревании при 130° в гексаметилфосфорамиде, содержащем 10% триэтилметиламмонийдиметилфосфата, приводит к получению смеси 5,7- и 4,6-диенов (1,3 : 1). После разделения смеси на колонке с силикагелем, импрегнированном AgNO3, 5,7-диен (XLII) получен с выходом 40%.
В последнее время для разделения 5,7- и 4,6-диенов реакционную смесь после дегидробромирования обрабатывают 4-фенил-1,2,4-триазолин-3,5-дионом (ХЕШ) [70] для получения аддукта (XLIV) с 5,7-диеном, а последний выделяют при обработке аддукта бис-(2-метоксиэтокси) натрийалюми- нийгидридом [5761 или LiAlH4 в тетрагидрофуране [100, 312, 494]. Kaneko и др. [522] использовали реакцию образования подобного аддукта при синтезе la-OH-7-ДГХ, a Eyley и др. [312] — при получении 24,25-(OH)2D3 (см. главу VI).
Свойство 7-ДГХ образовывать аддукт с (XLIII) Aberthart и др. [100] использовали при получении провитамина 3-эпивитамина D3.
XLIV
Некоторые авторы [9, 534, 11 ] получали провитамины D3 и D4 из эргостерина, используя реакцию образования аддукта с малеиновым ангидридом или 1,4-фталазиндионом. Ikan и др. [445] получили бензоат 7-ДГХ (30%) при хроматографировании бензоата 7-бромхолестерина на флоризиле.
ВЛИЯНИЕ ЗАМЕСТИТЕЛЯ В КОЛЬЦЕ А НА ВВЕДЕНИЕ ДВОЙНОЙ СВЯЗИ С7—С8
Синтез аналогов витаминов D включает введение различных заместителей (гидроксильных и метильных групп, галоидов и др.) в боковую цепь и скелет молекулы холестерина. Оказалось, что заместители в кольце А в значительной степени влияют на введение двойной связи при С7 С8.
Известно, что ацильная группа при С3 влияет на выход 7-дегидрохолес- терина, и установлено, что из эфиров холестерина наиболее удобен бензоат [144]. Замена гидроксильной группы при С3 на хлор и бром приводит к образованию устойчивых продуктов [143, 838], а при введении фтора автор и др. [89, 981 получили провитамин с очень низким выходом. При бромировании 30-фторхолестерина (XLV) дибромантийом в гексане с выходом 90% был получен 3£-фтор-7-бромхолест-5-ен (XLVI) [89].
При дегидробромировании (XLVI) происходит образование большого количества (до 40%) смолообразного холеста-2,4,6-триена (XXXV) (вероятно, за счет легкого отщепления HF от (XLVIII)), (XLVIII) не обнаружен вовсе, а выход (XLVII) составляет не более 20%. Выделение (XLVII) из реакционной смеси затруднительно: кристаллизацией не удается, а хроматографическое выделение связано с большими потерями.
Введение в молекулу холестерина при С4 двух метильных групп [688] или одной при С6 [601] не влияет на синтез провитамина. Введение одной ацетокси- или бензоксигруппы при С4 значительно затрудняет дегидрирование в 5,7-диен. Pelc [707] из диацетата 4а-оксихолестерина получил провитамин 4а-оксивитамина D3 с низким выходом. Провитамин из 40-окси- холестерина до сих пор не получен, несмотря на многократные попытки различных исследователей. Еще в 1946 г. Petrow и Starling [713] пытались получить 5,7-диен (LIV) пиролизом 30,40,7а- и 30,40,70-трибензоатов. Pelc [707] провел аллильное бромирование диацетата 40-оксихолестерина (XLIX) и получил 7-бромпроизводное (L), у которого НВг не отщепляется вследствие пространственных препятствий, которые создает 40-ацетоксигруппа, экранируя 8Н-атом. Поэтому была проведена замена брома на хлор или гидроксильную группу, но и эти попытки отщепить НС1 или воду были безу спешными.
Автор и сотрудники пытались получить холест-5,7-диен-30,-40-диол путем аллильного бромирования и дегидробромирования, как и Pelc, а также применяя реакцию Bamford и Stevens [125]; при этом были легко получены диацетат холест-5-ен-30,40-диол-7-она (LII) и его тозилгидразон (LIII), а при реакции с LiH 5,7-диен не образуется.
Синтез активных метаболитов и аналогов витаминов D
Успехи, достигнутые в последние годы несколькими школами биохимиков в изучении метаболизма витаминов D, привели к выделению, идентификации и установлению высокой биологической активности метаболитов витаминов D2 и D3.
Высокая активность метаболитов витаминов D в лечении не только рахита, но и других тяжелых заболеваний, связанных с нарушением гомеостаза кальция в организме, побудила химиков многих стран приступить к химическому синтезу этих соединений. За последние годы были предложены различные варианты сложных химических синтезов активных метаболитов витаминов D и некоторых их активных аналогов.
Как известно, активные метаболиты витаминов D представляют собой гидроксилированные производные, содержащие одну (25-оксихолекальци- ферол), две (1,25-, 24,25- и 25,26-диоксихолекальциферолы) или три гидроксильные группы (1,24,25-триоксихолекальциферол). Биохимический синтез метаболитов в организме происходит с помощью соответствующей ферментативной системы в печени или почках и протекает таким образом, что осуществляется непосредственный переход от молекулы витамина D3 к молекуле его оксипроизводного.
Осуществление же химических синтезов метаболитов связано с многостадийными сложными преобразованиями всей структуры молекулы, начиная с холестерина. Описанные методы синтеза активных метаболитов и аналогов витамина D3 представляют в основном теоретический интерес. Поисками путей практического получения этих соединений интенсивно занимаются многие исследователи в различных странах.
СИНТЕЗ 25-ОКСИХОЛЕКАЛЬЦИФЕРОЛА
Синтетический 25-оксихолекальциферол (25-OHD3) (I) получили в 1969 г. Blunt и DeLuca 1167, 259, 248) после успешного осуществления синтеза его провитамина — холеста-5,7-диен-30,25-диола (II) двумя методами, исходя из 25-оксихолестерина (III) и 26-норхолест-5-ен-25-она (IV).
Для синтеза соединения (II) из (III) последний ацетилировали уксусным ангидридом; полученный диацетат (V) аллильно бромировали и дегид- робромировали в диен (VI), после обработки которого LiAlH4 и перекристаллизации получен (II).
Второй метод синтеза провитамина (II) состоял в ацетилировании (IV), последующем бромировании, дегидробромировании и хроматографическом выделении ацетата 26-норхолеста-5,7-диен-Зр-ол-25-она (VIII). Дальнейшая обработка реактивом Гриньяра и мягкий гидролиз LiAlH4 приводят к получению (II).
В результате фотохимической изомеризации провитамина (II) в преви- тамин, последующей термической изомеризации и хроматографического* разделения смеси получен 25-OHD3 (I) с выходом 3,2 и 3,6% по (III) и (IV)* соответственно.
Синтез исходных соединений (III) и (IV) из холестерина (IX) по известным методам [777, 779, 2261 состоит в бромировании ацетата холестерина. (X), окислении дибромида (XI) СгО3 в уксусной кислоте в 26-норпроизводное (XII), обработке последнего цинковой пылью в уксусной кислоте и получении ацетата (VII). Ацетат (XIII) получали при реакции с реактивом Гриньяра. Выход (VII) и (XIII) весьма незначителен.
В последнее время опубликован ряд работ по синтезу (III) [773, 625, 892, 645, 642]. При облучении УФ-светом в растворе АсОН + Н2О2 ЗР-аце- тата 5а-холестан-ЗР-ола (XIV) образуется с выходом 37,5% 25-оксипроизводное (XV) и с 30%-ным выходом — 5а-оксипроизводное (XVI). При дальнейшем облучении (XVI) получали Зр-ацетат холестан-Зр, 5а, 25-триола (XVII), при ацетилировании которого в (XVIII), обработке последнего смесью АсОН и n-TsOH и гидролизе образуется Зр-ацетат (XIII) [773]. При аутоокислении или фотолизе холестерина также образуется соединение (III) [892, 211], однако выход его во всех случаях невысокий.
Кристаллический 25-OHD3 впервые получили Halkes и Van Vliet в 1969 г. [367] также исходя из (VII). Они установили, что выход провитамина (II) выше в том случае, если сначала из (VII) путем бромирования и дегидробромирования получить (VIII), а затем проводить реакцию с реактивом Гриньяра. Фотохимическая изомеризация в растворе тетрагидрофурана проводилась до конверсии 20%. После хроматографирования на силикагеле и кристаллизации из ацетона получен кристаллический 25-OHD3 с т. пл. "95—100°. Исходя из (VII) синтезировали также радиоактивный 26,27-
3H-25-OHD3 [847, 138], необходимый для изучения его дальнейшего метаболизма в организме.
Исходным продуктом в синтезе 25-OHD3, осуществленном Camball, Squires и Babcock [196, 122], является Зр-оксихол-5-еновая кислота (XIX), вещество, сравнительно доступное, образующееся при окислении боковой цепи холестерина, а также из гиодезоксихолевой кислоты [68]. Кислота
(XIX) была превращена через 3-ацетат (XX) и хлорангидрид (XXI) в диазокетон (XXII) и, наконец, в 25-гомоэфир (XXIII) при взаимодействии с бензоатом серебра. После этих преобразований в боковой цепи был получен 5,7-диен (XXIV) путем аллильного бромирования и дегидробромирования по Hunziker и Milliner [444] с 20%-ным выходом. Завершает синтез провитамина реакция Гриньяра с CH3MgBr, в результате которой (XXIV) превращается в (II). Фотохимическая изомеризация (II) проведена в растворе бензола с добавкой небольшого количества абсолютного этанола. Хроматографированием на колонке с флоризилом и элюцией продукта смесью этилацетат ■— гексан выделен 25-оксипрекальциферол (XXV). В результате термической изомеризации (XXV) в хлороформе в течение 3,5 ч при 70— 75°, хроматографирования на флоризиле и кристаллизации из водного метанола получен 25-OHD3 в виде гидрата с т. пл. 81—83°.
В 1973 г. опубликована серия работ сотрудников лаборатории химии природных соединений Токийского технологического института, посвященная синтезу активных форм витамина D [645—647, 774, 811, 449]. Авторы предлагают простой способ синтеза 25-оксихолестерина — ключевого
соединения при получении (I) — из ацетата десмостерина (XXVI) [645], структура которого очень удобна для введения гидроксильной группы при С25 различными методами.
При облучении раствора (XXVI) в изопропиловом спирте солнечным светом в присутствии сенсибилизатора и восстановлении неочищенного продукта NaBH4 получали два вещества — Зр-ацетат холеста-5,23-диен- Зр,25-диола (XXVII) — 35% и Зр-ацетат холеста-5,25-диен-Зр,24-диола (XXVIII) — 25%. При каталитическом гидрировании (XXVII) над 10%- ным Pd-углем в этаноле образуется соединение (XIII) (60%).
Второй путь получения (XIII) из (XXVI) состоит в селективном эпо
ксидировании двойной связи при См—С25 .и-хлорнадбензойной кислотой и образовании 24,25-моноэпоксида (XXIX), который затем восстанавливали LiAlH4 в (XIII) с общим выходом 50%.
1) Hg(OAc)32) NaBH41) Hg(OAc)32) NaBH4
1) Hg(OAc)3
2) NaBH4
1) Hg(OAc)3
2) NaBH4
И, наконец, третий и наиболее удобный метод синтеза (XIII) состоит в окислении (XXVI) Hg(OAc)2 и последующем восстановлении NaBH4. После хроматографической очистки на силикагеле получали соединение (XIII) с выходом 85%.
Поскольку (XXVI) оказался очень удобным исходным продуктом для синтеза не только (I), но и других активных метаболитов витамина D3, в последнее время получению его или выделению из растительного сырья посвящено много исследований [224, 670, 446].
Японские исследователи разработали метод получения десмостерина из фукостерина (XXX), главного стерина бурых водорослей [446, 682]. Ацетат фукостерина (XXXI) окисляли .и-хлорнадбензойной кислотой до 24,28-
эпоксида (XXXII), а затем обработкой BF3 получали (XXVI) с выходом 30%:
XXXIXXXIIXXVI
Недавно описан синтез десмостерина из Зр-окси-бис-норхол-5-еновой кислоты (XXXIII) или Зр-оксинорхол-5-еновой кислоты (XXXIV) [224]. Метиловый эфир (XXXV) переводят в тозилат (XXXVI) и при метанолизе последнего в присутствии пиридина получают 3,5-цикло-6р-метоксипроиз- водное (XXXVII), которое восстанавливают LiAlH4, и без выделения (XXXVIII) превращают его в кристаллическое 22-Тз-производное (XXXIX). Реакция последнего с NaJ в ацетоне дает соответствующий йодид (XL). Далее йодид обрабатывают л(диметилаллил)никельбромидом и получают бр-метиловый эфир 3,5-цикло-5а-холест-24-ен-6р-ола (XLI). При реакции последнего с хлорной кислотой в диметилформамиде образуется десмосте- рин (XLII) с общим выходом 20%.
Демостерин можно получить также синтезом по Wittig из ацетата Зр- оксихол-5-еновой кислоты (XX) [68]. Кислоту переводят в хлорангидрид (XLIII), при конденсации которого с этилмеркаптаном в пиридине образуется этиловый эфир тиохоленовой кислоты (XLIV); последний при реакции с никелем Ренея превращается в альдегид (XLV) и, наконец, реакцией с реактивом Wittig (ХЬУ1)получают ацетат (XXVI).
Bergmann и Duzra [139] разработали способ получения десмостерина из 25-кетохолестернна.
Сотрудники химического отдела фирмы «Hoffman—La Roche Inc.» (штат Нью-Джерси, США) запатентовали несколько способов получения 25-оксихолестерина (III) [699, 664, 666, 698]. Исходным продуктом в одном из синтезов является довольно доступный стерин растительного происхождения — стигмастерин (XLVII), который выделяют из соевых бобов. Известно, что 22,23-двойная связь стигмастерина легко расщепляется. Поэтому, предварительно защитив 5,6-двойную связь получением /-метилового эфира, авторы осуществили преобразование боковой цепи (XLVII) и в семь стадий получили продукт (III).
Для этого тозилат стигмастерина (XLVIII) обрабатывали метанолом и пиридином и полученный /-метиловый эфир (XLIX) озонировали при —78°, а затем восстанавливали натрий-бис-(2-метоксиэтокси)-алюминий-гид- ридом в спирт (XXXVIII), который превращали в кристаллический тозилат (XXXIX). При алкилировании тозилата Li-ацетиленидом (L), полученным из н-бутиллития (LI) и З-метил-1-бутин-3-ил тетрагидропиранового эфира (VII), выделен с 90%-ным выходом (LIII); затем ацетиленовую связь гидрировали на окиси платины или на 10%-ном Pd/C в диоксане с количественным выходом в (LIV). Далее авторы предложили несколько вариантов получения соединения (III). Один из них состоит в превращении маслообразного тетрагидро-
пиранового эфира (LIV) в кристаллический спирт (LV) при обработке кислым метанолом при 0°; затем водным диоксаном в присутствии каталитических количеств n-TsOH (LV) превращают в (III). Общий выход продукта (III) — 30% (в расчете на стигмастерин).
В работах [664, 666} в качестве исходных веществ в синтезе 25-оксихо- лестерина использовали прегненолон (LVI) и его ацетат (LVII). Сначала осуществляли защиту 5,6-двойной связи (LVI) трансформацией его в /-стероид (LVIII), который после взаимодействия с винилмагнийхлоридом дает аллильный спирт (LIX) с 86%-ным выходом. Затем удлиняли боковую цепь до семи углеродных атомов обработкой спирта (LIX) избытком дикетена в кипящем декалине, используя са>и-коллидин как катализатор, и получали смесь цис- и транс-кетоизомеров (LX) и (LXI) (1 : 2) с выходом 60—70%. Смесь кетоолефинов восстанавливали над окисью платины в 95%-ном этаноле и получали смесь насыщенных кетонов (LXII) и (LXIII), после обработки которых метилмагниййодидом образовались насыщенные спирты (LXIV) и (LXV). Природный 20/?-изомер (LXIV) был отделен кристаллизацией и получен из аллильного спирта (LIX) с общим выходом 26%. И, наконец, в результате сольволиза z-стероида (LXIV) воднокислым диоксаном образуется 25-оксихолестерин. Общий выход его из прегненолона составляет 17%.
LVIОСН3ОСН3
LVIIILIX
Сольволизом i-стероида (LXV) получали изомер 25-оксихол естер ина в •неприродной конфигурацией у С20 — 205-25-оксихолестерин (LXVI).
Из ацетата прегненолона (LVII) возможен синтез (III) без предварительной защиты 5,6-двойной связи. Ацетат (LVII) обрабатывали избытком .винилмагнийхлорида в дихлорметане при —78° и с 90%-ным выходом получали аллильный спирт (LXVII). Удлинение боковой цепи достигнуто, как описано выше, взаимодействием с дикетеном, и с выходом 72% получена смесь кристаллических цис- и транс-кетоолефинов (LXVIII) и (LXIX). Каталитическим гидрированием этой смеси над окисью платины получен "20/?-кетон (LXX), который отделен от неприродного изомера (LXXI) кристаллизацией из 95%-ного этанола. Превращение соединения (LXX) в (III)
с 88%-ным выходом осуществлено обработкой CH3MgCl. Общий выход (III) из (LVII) составлял 25—28%.
Недавно был предложен еще один вариант синтеза 25-OHD3 [41, 7, 9, 8]. В результате фотосенсибилизированного присоединения кислорода к эргостерину (LXXII) образуется перекись (LXXIII), а вследствие расщепления двойной связи в боковой цепи озонолизом — альдегид (LXXIV).
Наращивание боковой цепи (LXXIV) осуществлено путем конденсации с трифенилметоксиметиленфосфораном с образованием метилового эфира ацетата 5,8-эпидиокси-23-норхола-6,22-диен-Зр,24-диола (LXXV), после гидролиза которого муравьиной кислотой образуется Зр-ацетат 5,8-эпидиокси-23-норхол-6-ен-24-аля (LXXVI). Последний при действии
7 8-269 9J
трифенилметоксикарбонилметиленфосфорана превращается в смесь транс- и цис-изомеров метиловых эфиров Зр-ацетата 5,8-эпидиоксигомохола-6,23- диен-25-овой кислоты (LXXVII). Метиловый эфир транс-кислоты гидрировали в присутствии палладия и без выделения ацетата триола (LXXVIII) осуществляли дегидратацию, ведущую к образованию метилового эфира Зр-ацетата гомохола-5,7-диен-25-овой кислоты (XXIV). Превращение этого эфира в 25-OHD3 описано выше [196].
LXXIVLXXV
Недавно опубликованы новые способы стереоспецифического построения боковой цепи холестерина с 25-гидроксильной группой из анд- рост-5-ен-Зр-ол-17-она [942] и из С22-альдегида, полученного при окислении боковой цепи эргостерина [313].
СИНТЕЗ 1а, 25-ДИОКСИХОЛЕКАЛЬЦИФЕРОЛА (la,25-(OH)2D3)
Химический синтез la, 25-диоксихолекальциферола впервые был осуществлен в лаборатории DeLuca в 1972 г. [813]. В качестве исходного вещества для синтеза этого метаболита использовали метиловый эфир z-гомохолановой кислоты (LXXIX), который был легко превращен в производное холевой кислоты (LXXX) путем этерификации диазометаном, кислотного гидролиза и ацетилирования. Кетон (LXXXI), полученный после нитрования (LXXX), восстановления и кислотного гидролиза, был превращен в кеталь (LXXXII) и по реакции Гриньяра получен 25-спирт (LXXXIII). Окисление последнего хромовым ангидридом в пиридине дает 3-кетон (LXXXIV), который через 2а-бромпроизводное (LXXXV) превращается в 1,2-легидросоединение (LXXXVI).
Обработка его Н2О2 приводит к получению 1а,2а-эпоксида (LXXXVII), при восстановлении которого LiAlH4 в эфире образуется 1а,3а-диол (LXXVIII). Чтобы получить желаемый 1а,3р-диол, было проведено избирательное окисление 1а,3а-диола (N-бромсукцинимид, трет-бутанол/пири- дин) и получен 3-кетон (LXXXIX), при восстановлении которого NaBH4 в
изопропиловом спирте образуется 1а,3р-изомер (ХС), превращенный затем в триацетат (XCI); мягким кислотным гидролизом последнего получен 6- кетон (ХСП). Восстановление NaBH4 и дегидратация 6-спирта (ХСШ) хлорокисью фосфора в пиридине привели к получению производного холестерина (XCIV). С помощью известных реакций аллильного бромирования и дегидробромирования введена вторая двойная связь в кольцо В и получен триацетат 5,7-диена (XCV). Фотохимической изомеризацией эфира провитамина, термической изомеризацией превитамина в витамин и, наконец, омылением эфирных групп получен Ia,25-(OH)2D3 (XCVI).
Высокая биологическая активность la,25-(OH)2D3 стимулировала поиски практического пути получения синтетического препарата для широких медико-биологических исследований. Два метода получения la,25- диоксихолестерина были предложены в 1973 г. группой японских исследователей из Токийского технологического института [774, 647]. Зр-Ацетат 25-оксихолестерина (XIII) * омыляли и при обработке диола дигидропираном в СН2С12 в присутствии n-TsOH получали дигидропирановый эфир
(XCVII). Далее гидроборированием В2Н6 в тетрагидрофуране и окислением 30%-ной Н2О2 в 3 н. NaOH получали спирт (XCVIII) и затем его ацетат (XCIX). Гидролизом соляной кислотой в метаноле получали диол (С), который окисляли СгО3 (пиридин в растворе СН2С12) в 60-ацетат-5а-холестан- 60,25-диол-З-она (CI) с общим выходом 52% (в расчете на (XIII)).
Поскольку для введения la-оксигруппы предполагалось использовать А'-двойную связь, то соединение (CI) бромировали бромом в АсОН и последующим дегидробромированием СаСО3 в ДМФА получили вещество (СП). Последнее превращали в la-оксипроизводное через эпоксикетон (СШ), спирт (CIV) и его тетрагидропирановый эфир (CV). Дегидратация последнего и щелочной гидролиз дали А5-соединение (CVI). Введение 25- оксигруппы достигнуто обработкой диацетата (CVII) Hg(OAc)2 в безводном тетрагидрофуране и восстановлением NaBH4. Гидролиз (СУШ) 30 % - ным NaOH в метаноле — бензоле дал 1а,25-диоксихолестерин (CIX).
Второй метод синтеза (CIX) из фукостерина, разработанный японскими авторами, действительно можно считать практическим и наиболее простым путем получения этого соединения. Озонированием ацетата фукостерина (XXXI) в СН2С12 при —78° был получен 24-кетон, который затем превращали обработкой NaBH4 в метаноле в ЗР-ацетат 24-оксихолестерина (СХ). Дегидратация (СХ) Р2О5 в метаноле приводит к получению ацетата десмосте- рина (XXVI).
Последний превращали, как описано выше [645], в 25-оксихолестерин (III). Взаимодействие продукта (III) с дихлордицианбензохиноном (ДДХ) [69] дает холеста-1,4,6-триен-25-ол-3-он (CXI). Окислением (CXI) 35 %-ной Н2О2 в 1 н. NaOH получен 1а,2а-эпоксид (СХП). Наконец, обработка эпоксида большим избытком металлического лития и NH4C1 в НН3-ТГФ (1 : 1) ведет к получению 1а,25-диоксихолестерина (CIX).
- Сотрудниками фирмы Hoffman — La Roche [665, 504] описан синтез 1а,25-диоксихолестерина из ацетата 25-оксихолестерина с общим выходом 18%. Кроме того, авторы провели рентгеноструктурный анализ 1а,25-диокси холестерина и подтвердили его структуру.
Гидроборирование (XIII) избытком диборана при 0° с последующим добавлением щелочной перекиси водорода дает смесь спиртов, из которых основным является триол (СХШ). Неочищенную смесь спиртов окисляли реагентом Джонса (CrO3+ H2SO4+ Н2О) в кристаллический дикетон (CXIV) с общим выходом 74%. Чтобы превратить карбонил при С6 в 0- гидроксильную группу, необходимую для последующего введения А5-двойной связи, 3-кетогруппу защищали нагреванием (CXIV) в .абсолютном метаноле в присутствии каталитических количеств щавелевой кислоты, а затем (CXV) восстанавливали NaBH4 в 0-спирт (CXVI) и после гидролиза получали кетоспирт (CXVH). Бромированием (CXVII) в 2а-бромкетон (CXVIII) и дегидробромированием вводили Д1-двойную связь. Обработка (CXIX) перекисью водорода в щелочных условиях дала эпоксикетон (СХХ). Далее были осуществлены защита 60-гидроксила превращением его в мезилат (CXXI) и расщепление эпоксисоединения амальгамой алюминия к 1а-окси- кетону (СХХН). Восстановлением этого кетона NaBH4 в смесь эпимерных
3-спиртов (СХХШ) и (CXXIV) и обработкой смеси Ы2СО3 в ДМФ получали 1а,25-диоксихолестерин (CIX) и его За-эпимер (CXXV). Смесь спиртов легко разделить хроматографически.
Кристаллический 1а,25-диоксихолекальциферол впервые получили сотрудники Исследовательского института медицины и химии в Кембридже Barton, Hesse и др. [135] в 1974 г. Синтез из 25-оксихолестерина проведен по описанной выше схеме путем превращения его в триенон (СХ1) с помощью дихлордицианбензохинона, эпоксидирования (щелочная Н2О2) в эпоксид (СХП) и восстановления эпоксида (Li—МН4С1 в МН3—ТГФ) в 1а,25- диоксихолестерин. Триацетат 1а,25-диоксихолестерина аллильно бромиро- вали и дегидробромировали до триацетата 5,7-диена. Фотохимической изомеризацией провитамина в превитамин, термическим превращением
последнего в триацетат la,25-(OH)2D3, омылением, хроматографическим выделением и перекристаллизацией из смеси эфира и гексана получен кристаллический la,25-(OH)2D3 с т. пл. 84—88°. Недавно Ikekawa и др. [451] запатентовали еще один способ получения 1а,25-диокснхолестерина исходя из 25-оксихолестерина.
СИНТЕЗ 24, 25-ДИОКСИХОЛЕКАЛЫДИФЕРОЛА
Синтетический 24,25-(OH)2D3 был получен DeLuca и др. [255, 576] из Зр-ацетата 27-норхолест-5-ен-30-ол-25-она (CXXVI), который после кипячения с Ас2О в присутствии n-TsOH дал смесь цис- и транс-ацетатов А24-енолов (CXXVII). Из этой смеси необходимый 24-ацетат 25-кетона
(CXXVIII) получен через промежуточные бром- и йодпроизводные по методу Moffett и Weisblat [640]. Реакция с реактивом Гриньяр а-ведет к образованию 24,25-диоксихолестерина (CXXIX), который превращали в кристаллический триацетат (СХХХ), а затем по известным схемам получали провитамин
(CXXXI) и 24,25-(OH)2D3 (СХХХП). Японские исследователи разработали довольно простые методы синтеза 24,25-диоксихолестерина (СХХХIII) из десмостерина, из которого в настоящее время получены все активные метаболиты витамина D3 [811]. Ацетат десмостерина (XXVI) окисляли м-хлор-
надбензойной кислотой в 24,25-эпоксид (CXXXIV), который при обработке H2SO4 превращали в Зр-ацетат 24,25-диола (CXXIX).
Еще более простой метод синтеза (CXXIX) состоит в окислении (XXVI) OsO4 в безводном эфире [4481. Выход продукта (CXXIX) почти количественный. Более детально этот метод синтеза описали Kodicek и французские исследователи [755, 757]. Они показали, что при окислении (XXVI) осмиевой кислотой в бензоле образуется смесь эпимеров при С24 (Д и S). Затем эту смесь ацетилировали, бромировали и дегидробромировали в Зр,24-(Д,5)- диацетат холеста-5,7-диен-25-ола (CXXXV). После облучения УФ-светом, кипячения, омыления и очистки на колонке с сефадексом получали смесь эпимеров 24(Д,5),25-диоксихолекальциферола, один из которых является метаболитом, выделенным Suda и др. [845]. Общий выход (СХХХП) составлял всего 1 %.
Eyley и Williams [312] разработали способ получения провитамина (CXXXI) из эргостерина. 5,7-Двойные связи ацетата эргостерина (CXXXVI) защищали образованием аддукта с 4-фенил-1,2,4-триазолин-3,5- дионом [70] и озонолизом получали альдегид (СХ XXVII). В результате альдольной конденсации альдегида с енолятом З-метил-З-тетрагидропира- нилоксибутан-2-она (CXXXVIII), полученным при обработке кетона ли- тийдиизопропиламидом, образуется кетон (CXXXIX). Восстановление этого кетона NaBH4 дало аддукт Зр,24,25-триола (CXL). Получение провитамина (CXXXI) из аддукта достигается обработкой его ЫА1Н4 в тетрагидрофуране. Общий выход провитамина по альдегиду (CXXXVII) составляет 38%.
Недавно Koizumi и др. [569] установили, что природный <24,25-(OH)2D3 имеет 24Д-коифигурацию, a Seki и др. [812] провели разделение смеси 24 Д- и 245-диоксихолестерина на эпимеры. Для этого 24,25-диоксихолестерин бензоилировали в 30,24£-дибензоат (CXLI), который превращали в
25-триметилсилиловый эфир (CXLII) и последний разделяли на 24S(CXLIII)-и 24/?(СХЫУ)-эпимеры при хроматографировании на колонке с силикагелем.
СИНТЕЗ 25,26-ДИОКСИХОЛЕКАЛЬЦИФЕРОЛА
25,26-Диоксихолекальциферол (CXLV) был выделен и идентифицирован в лаборатории DeLuca в 1970 г. [8461. DeLuca запатентован биохимический способ получения этого метаболита из плазмы крови животных, получавших меченый витамин D3 [2561. Конфигурация гидроксила при Cgs пока не установлена.
Химический синтез 25,26-диоксихолестерина (CXLVI) осуществили японские исследователи [811] из ацетата 25-оксихолестерина (XIII), при дегидратации которого РОС13 получена смесь (2:1) ацетатов десмостерина и холеста-5,25-диен-30-ола (CXLVII), а при окислении последнего OsO4 с высоким выходом образуется 25(^,S),26-диол (CXLVIII) [447, 448].
Синтетический 25,26-(OH)2D3 получили французские и английские исследователи в 1973 г. [754, 756] по следующей схеме: тетрагидропирановый эфир 27-норхолест-5-ен-Зр-ол-25-она (CXLIX), полученный при взаимодействии 27-норхолест-5-ен-30-ол-25-она (IV) и 2-метокситетрагид- ропирана, по реакции Виттига [68] превращен в тетрагидропирановый эфир 5,25-диена (CL). После гидролиза раствором НС1/МеОН и ацетилирования ацетат (CLI) окисляли осмиевой кислотой в ЗР-ацетат холест-5-ен- 3P,25(^,S),26-триола (CLII). Обработка ацетата триола уксусным ангидридом приводит к ацетилированию только одного гидроксила у С26. Диацетат (CLI II) превращали в 5,7-диен (CLIV) путем аллильного бромирования и дегидробромирования, а затем в холеста-5,7-диен-30,25(Д,5),26- триол (CLV).
Фотохимической изомеризацией (CLV), термической изомеризацией прекальциферола и хроматографированием на колонке с сефадексом в смеси хлороформ — гексан получен 25(^,S),26(OH)2D3 (CXLV).
CL!CLUCLII1
CXLV
Lam и др. [579] разработали другой путь синтеза — от (IV) к (CXLV). При обработке соединения (IV) смесью гидрида натрия и триметилсуль- фониййодида в диметилформамиде получен 25,26-эпоксихолестерин (CLVI), который после щелочной обработки был превращен в кристаллический триол (CXLVI), а затем в триацетат (CLVII).
Последовательно проведенным нием, выделением 5,7-диена через дионом получен провитамин (CLV).
бромированием, дигидробромирова-
аддукт с 4-фенил-1,2,4-триазолин-3,5-
Биологические испытания синтетического препарата показали, что только один из диастереомеров при С25 биологически активен. Какой из них идентичен выделенному Suda и др. [8461, пока не установлено.
СИНТЕЗ 1а,24, 25-ТРИОКСИХОЛЕКАЛЬЦИФЕРОЛА
Ikekawa и др. [454] осуществили синтез двух эпимеров 24К- и 248-1а,24,25-триоксихолекальциферола la,24,25-(OH)3D3 с целью выяснения абсолютной конфигурации природного метаболита. Синтез la, 24,25-триоксихолестерина проведен по описанным выше схемам: 24,25-диоксихол естер ин (CXXIX) был получен по способу Seki и др. [811],
затем была введена 1а-гидроксильная группа по методу Barton и др. (134] и получена смесь эпимеров 1а,24,25-триоксихолестерина (CLV1I1). Далее была проведена этерификация и смесь эпимеров дибензоатов — ацетатов разделена на колонке с силикагелем на два эпимера и с помощью ЯМР- спектроскопии установлено, что менее полярный (CLX) является 24Д-, а более полярный (CLIX) — 245-эпимером. В результате бромирования, дегидробромирования и омыления, проведенных обычными методами, получены 24Д- и 245-эпимеры провитаминов (CLXII) и (CLXI), которые были превращены в la,24£,25-(OH)3D3 (CLXIV) и la,24S,25-(OH)3D3 (CLX11I).
СИНТЕЗ 1 а-ОКСИХОЛЕКАЛЬЦИФЕРОЛА
Высокая биологическая активность 1а-оксихолекальци- ферола, сравнимая с активностью la,25-(OH)2D3 (386, 429, 433], и более простой синтез, связанный с трансформацией только кольца А, делают это соединение наиболее перспективным аналогом витамина D3. В связи с этим за несколько последних лет опубликовано большое количество сообщений по синтезу la-OHD3 [703, 704, 646, 342, 134, 333, 429, 257, 520, 521, 378, 379, 6551.
Первая попытка синтезировать la-оксихолестерин была предпринята в 1970 г. Pelc и Kodicek [703]. Еще за два года до выделения и идентификации la,25-(OH)2D3 (585, 423], работая с радиоактивным 1-3Н-витамином D3, Kodicek и сотр. (583, 584] обнаружили метаболит с дефицитом радиоактивного водорода и более полярный, чем 25-OHD3, вероятно, за счет включения дополнительного атома кислорода при Cj. Поэтому для синтеза модельного соединения возможного метаболита 25-OHD3 необходимо было разработать способ введения la-гидроксильной группы в молекулу холестерина.
Pelc и Kodicek [703] в качестве исходного продукта взяли ЗР-ацетат 5а-холестан-3р-ол-6-она (CLXV), который может быть легко получен из ацетата холестерина при нитровании дымящей азотной кислотой, восстановлении нитросоединения Zn-пылью и гидролизе. 6-Кетон (CLXV) восстанавливали NaBH4 в бр-оксипроизводное (CLXVI) с высоким выходом, а затем ацетилировали в Зр,6Р-диацетат (CLXVII). В результате мягкого щелочного гидролиза образуется бр-ацетат (CLXVIII).
Окисление ЗР-оксигруппы в кетогруппу дихроматом натрия в уксусной кислоте, а затем бромирование кетона (CLXIX) бромом в уксусной кислоте и обработка 2а-бромпроизводного (CLXX) СаСО3 в ДМФ дают бр-ацетат 5а-холест-1-ен-6Р-ол-3-она (CLXXI). После щелочного гидролиза выделено бр-оксипроизводное (CLXXII), однако далее была допущена ошибка и получить la-оксихолестерин не удалось. Pelc и Kodicek сделали еще одну попытку синтезировать la-оксихолестерин, однако, к сожалению, также безуспешную [704]. Но все-таки la-оксихолестерин был получен в том же 1971 г. сотрудниками Белградского университета и фирмы CIBA — GEIGY (Швейцария) Mihailovic, Lorenc, Popov и Kalvoda [634]. При исследовании реакций секостероидов, в частности при фотохимической циклизации ЗР-ацетата 5,10-секохолест-1(10)-ен-5-она (CLXXIII) b(CLXXIV)
CLXXH!CLXXIVCLXXV
и обработке последнего HI в уксусной кислоте наряду с другими продуктами был выделен и охарактеризован la-оксихолестерин (CLXXV) и его моно- и диацетаты.
В 1973 г. японские исследователи Morisaki, Bannai и Ikekawa [646, 450] завершили синтез Pelc и Kodicek [703]. Эпоксидацией (CLXXI) 35%-
ной Н2О2 в 5%-ном NaOH/CHCl3—МеОН получен 1а,2а-эпоксид (CLXXVI). В результате восстановления кетогруппы NaBH4 в смеси МеОН—эфир получена смесь эпимерных 3^- и За-спиртов (4: 1) (CLXXVII), а после омыления — смесь эпимерных диолов (CLXXVI II).
Далее хроматографированием на силикагеле и ацетилированием 1/2 эквивалента Ас2О выделен Зр-ацетат (CLXXIX) с общим выходом 24% по исходному (CLXXI). Дегидратацией 3|3-ацетата (CLXXIX) РОС13 получен олефин (CLXXX) с 75%-ным выходом. Последующее восстановление LiAlH4 в кипящем тетрагидрофуране приводит к образованию 1а-оксихолестерина (CLXXV).
Авторами этой работы предложен еще один вариант синтеза (CLXXV) из (CLXXVII) без выделения промежуточных продуктов с общим выходом 30%: неочищенный (CLXXVII) обрабатывали тетрагидропираном с СН2С12 в присутствии /г-TsOH и тетрагидропираниловый эфир (CLXXXI) трансформировали в спирт (CLXXXII). Дегидратацией РОС13 и восстановлением LiAlH4 получена смесь эпимеров Зр- и За-тетрагидропираниловых эфиров (CLXXXIII), а обработка HCl/MeOH для удаления ТНР-группы и хроматографическая очистка на колонке с силикагелем привели к получению 1а-оксихолестерина.
ТНРОТНРО
ТНРО
ТНРО
Несколько позднее Morisaki и др. [649] разработали отличающийся от способа Pelc и Kodicek способ получения (CLXXI) и довели синтез до получения la-OHD3, но общий выход не превышал 1%.
Furst, Labler, Meier и Pfoertner (химическая исследовательская лаборатория фирмы «Hoffman— La Roche», Базель) [342] в качестве исходного продукта также брали синтезированный Pelc и Kodicek [7031 кетон (CLXXII). В результате обработки кетона щелочной перекисью водорода образуется эпоксид (CLXXXIV), который после восстановления NaBH4 дает диол (CLXXXV). Частичным ацетилированием диола в Зр-ацетат (CLXXXVI) и дегидратацией с РОС13 в пиридине получен ненасыщенный продукт (CLX XXVII), который восстановлен в la-оксихолестерин (CLXXV). Ацетилирование, бромирование, дегидробромирование и омыление известными методами
CLXXXV1
CXCI
позволили получить неописанный ранее 5,7-диен (CLXXXIX). УФ-облучением диацетата холеста-5,7-диен-1а,Зр-диола (СХС) в растворе н-гексана и последующей термической изомеризацией, омылением и хроматографической очисткой получен кристаллический la-OHD3 (CXCI). Однако первыми кристаллический la-OHD3 получили американские химики Barton, Hesse, Pechet и Rizzardo [134, 414].
При дегидрировании холестерина (IX) дихлордицианбензохиноном [887] авторы получили кетотриен (CXCII) [292], который превращали щелочной Н2О2 [351] в 1а,2а-эпоксихолеста-4,6-диен-3-он (CXCI II) с общим выходом 45%.
СХС1
При обработке эпоксида (СХСШ) большим избытком металлического лития в МН3 — ТГФ (1 : 1) образуется (CLXXV). Ацетилированием (или бензолированием), бромированием и дегидробромированием получают эфир провитамина (СХС). Последний облучают УФ-светом с X 275—330 нм в эфире при 0° до 50%-ного превращения и выделяют хроматографированием на силикагеле, импрегнированном AgNO3, ацетат превитамина (CXCIV), который термически изомеризуется в растворе изооктана в ацетат la-OHD3, а после омыления, хроматографирования на силикагеле и кристаллизации получают кристаллический la-OHD3 (CXCI).
Недавно опубликовано сообщение, в котором описан модифицированный вариант синтеза la-OHD3 [333]. При восстановлении эпоксидиенола (СХСШ) литием в жидком аммиаке авторы получили смесь трех 112
продуктов— 15% холестерина (IX), 20% la-оксихолестерина (CLXXV) и 45% 5а-холест-6-ен-1а,3р-диола (CXCV). Последний превращен в ацетат провитамина (СХС) при бромировании диацетата (CXCVI) в диаксиальный дибромид (CXCVII) и дегидробромировании при 130° в гексаметилфос- форамиде и триэтилметиламмониевой соли диметилфосфата.
CXCVII
Синтез la-OHD3 был осуществлен также Holick, Semmler, Schnoes и DeLuca [429, 257] по методам, описанным выше [813], из холестерина вместо гомохолевой кислоты; однако кристаллический продукт не был получен.
В 1973—1975 гг. опубликованы работы большой группы японских исследователей и запатентованы способы синтеза la-оксихолестерина и la-OHDg [520, 521, 452, 495, 494, 649]. Холеста-1,4-диен-3-он (CXCVIII) превращали в холеста-1,5-диен-3-он (CXCIX), используя известную реакцию деконъюгации, которая состоит в обработке 3-кето-Д1,4-диена третбутилатом калия в диметилсульфоксиде.
Далее проводят восстановление 3-кетогруппы NaBH4 в метаноле при 0° или, лучше, Са(ВН4)2в этаноле при—10°, что приводит к образованию хо- леста-1,5-диен-Зр-ола (СС). Гидроборирование и последующее окисление щелочной Н2О2 дает с невысоким выходом (CLXXV). Несколько больший выход (CLXXV) был достигнут при обработке Зр-ацетата (СС) HgO в присутствии трифторуксусной кислоты и последующем восстановлении NaBH4 [452]. В результате ацетилирования (CLXXV), бромирования, дегидробромирования и щелочного гидролиза LiAlH4 в эфире образуется хо- леста-5,7-диен-1а,Зр-диол. Далее был получен la-OHD3, но не в кристаллическом виде.
Используя в качестве исходного вещества холеста-1,4,6-триен-3-он (СХСП), японские исследователи [522, 495, 494] получили 1а-оксихолес- терин следующим путем. (CXCII) изомеризовали (калий в трет-бутаноле) в холеста-1,5,7-триен-3-он (CCI) с последующим восстановлением кетона Са (ВН4)2 в Зр-ол (ССП) [495].
Затем осуществляли защиту 5,7-двойных связей получением 1,4-циклоаддукта (ССШ) с 4-фенил-1,2,4-триазолин-3,5-дионом и окислением л-хлор- надбензойной кислотой в эпоксид (CCIV). Восстановление LiAlH4 приводит к получению провитамина (CLXXXIX).
Harrison, Lythgoe и Wright [378, 379] (из Лидского университета, Англия) осуществили полный синтез la-OHD3 и получили кристаллический продукт.
СИНТЕЗ
3-ДЕЗОКСИ-1а-ОКСИХОЛЕКАЛЬЦИФЕРОЛА
Синтезированный в 1974 г. в лабораториях DeLuca [5781 и Norman [683, 639] 3-дезокси-1а-оксихолекальциферол (3-D-la-OHD3) не только является биологически активным аналогом гормональной активной формы витамина D3— la,25(OH)2D3, но и представляет большой интерес как соединение, у которого отсутствуют две гидроксильные группы при С3 и С25, до недавнего времени считавшиеся совершенно необходимыми для проявления биологической активности.
Lam, Onisko, Schnoes и DeLuca [578] синтезировали 3-D-la-OHD3 исходя из эпоксикетона (CCV), полученного авторами при синтезе la-OHD3 [429, 262]. При обработке эпоксикетона гидразингидратом и последующем каталитическом гидрировании (Pd/C, Н2) промежуточного Д2-олефина получено la-оксипроизводное (CCVI). Удаление кеталя мягким кислотным гидролизом и ацетилирование дало 6-кетон (CCVII), который после восстановления NaBH4 был превращен в 6-спирт (CCVIII), а после дегидратации РОС13— в ацетат холест-5-ен-1а-ола (CCIX).
Возможен также синтез (CCIX) из диацетата холест-5-ен-1а,Зр-диола (CLXXXVIII). В результате омыления ацетатной группы при С3, образования тозилата (ССХ) и восстановления LiAlH4 получен холест-5-ен-1а-ол (CCXI), а его ацетилированием — (CCIX). Последний аллильно бромиро- вали и дегидробромировали в ацетат провитамина (ССХII), который далее облучали УФ-светом в превитамин, термически изомеризовали и омыляли к 3-D-la-OHD3 (ССХIII).
Okamura, Mitra, Wing и Norman [683], а затем Mitra, Norman и Okamura [639] синтезировали 3-D-la-OHD3 другим путем и подробно охарак- 114
теризовали основные продукты синтеза. Холестерин был превращен в эпо- ксидиенон (CXCIII) при обработке дихлордицианбензохиноном [887], а затем щелочной Н2О2 [351]. Далее возможны два пути получения холест- 5-ен-1а-ола (CCXI): восстановление (CXCIII) LiAlH4 в диол (CCXIV), а затем Li/NHg в (CCXI) или восстановление (CXCIII) по Barton и др. [134]
ссхш
в (CLXXV), получение тозилата (CCXV) и восстановление последнего LiAlH4 в (CCXI). В результате ацетилирования, бромирования и дегидро-
бромирования получен с выходом 10% ацетат провитамина (ССХП), а после фотохимической, термической изомеризаций и омыления с 8%-ным выходом был получен 3-D-la-OHD3 (ССХШ) в виде масла.
ГИДРОКСИЛИРОВАННЫЕ АНАЛОГИ
ВИТАМИНА D2
В 1969 г. сотрудники лаборатории DeLuca установилиВ 1969 г. сотрудники лаборатории DeLuca установили[842. 843], что подобно витамину D3 эргокальциферол трансформируется в организме в 25-OHD2 и далее в la,25-(OH)2D2, обладающие такой же[842. 843], что подобно витамину D3 эргокальциферол трансформируется в организме в 25-OHD2 и далее в la,25-(OH)2D2, обладающие такой же
В 1969 г. сотрудники лаборатории DeLuca установили
В 1969 г. сотрудники лаборатории DeLuca установили
[842. 843], что подобно витамину D3 эргокальциферол трансформируется в организме в 25-OHD2 и далее в la,25-(OH)2D2, обладающие такой же
[842. 843], что подобно витамину D3 эргокальциферол трансформируется в организме в 25-OHD2 и далее в la,25-(OH)2D2, обладающие такой же
ССХХП высокой биологической активностью, как и метаболиты витамина D3. Способ получения 25-OHD2 запатентован DeLuca [250].
Lam, Schnoes и DeLuca [577] осуществили химический синтез активного аналога витамина D2— la-OHD2 (ССХХП) исходя из эргоста-4,6,22- триен-3-она (CCXVII). Последний получали при окислении эргостерина (LXXII) по Оппеннауэру трет-бутилатом алюминия с последующей изомеризацией полученного эргостерона (CCXVI) соляной кислотой. Далее (CCXVII) окисляли двуокисью селена в эргоста-1,4,6,22-тетраен-3-он (CCXVIII), а последний обрабатывали щелочной Н2О2 и полученный la,2a- эпоксид (CCXIX) восстанавливали Li в растворе NH3 и ТГФ в 1а-окси- 7,8-дигидроэргостерин (ССХХ). Далее, как при синтезе аналога витамина D3, проводили ацетилирование, бромирование, дегидробромирование и получали провитамин (CCXXI), а после фотохимической, термической изомеризации и омыления — la-OHD2 (ССХХП).
Полный синтез витаминов D и родственных соединений
После установления в 1936 г. структуры витаминов D начались исследования по полному синтезу кальциферолов или модельных соединений с цис-триеновым хромофором витаминов D.
В 1938 г. группа сотрудников лаборатории общей химии Геттингенского университета во главе с Dimroth приступила к синтезу модельного соединения (I), содержащего простую систему трех полуциклических двойных связей. Такое соединение могло быть получено при конденсации циклогексанона (II) и альдегида (III) в кетон (IV) с последующей заменой ^С=О-
группы на
Л1
Синтез альдегида и кетона был проведен, однако ввести метиленовую группу вместо кетогруппы не удалось из-за чрезвычайной' лабильности получаемого продукта [275—278]. Далее для синтеза модельного соединения (I) был избран другой путь: конденсацией 2-(диметиламинометил)-цикло- гексанона (V) и циклогексилиденэтилбромида (VI) получен спирт (VII), превращенный затем в бромид (VIII), диен (IX) и триен (I) [279]. Однако этот триен чрезвычайно легко полимеризуется и не пригоден для дальнейшего построения молекулы витамина D. Поэтому с использованием вместо (VI)
IXIXII
IX
IX
I
I
а-декагидронафтилиденэтилбромида подобным методом был синтезирован триен (X), более устойчивый, чем I [280], а затем Dimroth введена гидроксильная группа в кольцо А и получен окситриен (XI) [281, 282]:
И, наконец, в 1942 г. Dimroth и Stockstrom [283—285] осуществили частичный синтез витамина D2 и его эпимера из альдегида (XII), полученного при окислении витамина D2. Восстановлением (XII) изопропилатом алюминия получен соответствующий спирт (XIII), превращенный затем в бромид (XIV). В результате реакции (XIV) с 3-ацетокси-6-(диметиламино- метил)-циклогексаноном (XV) и омыления образовался маслообразный продукт (XVI). Далее ряд описанных выше превращений в бромид, диен и, наконец, отщепление диметиламиногруппы дали витамин D2 (XVII) с т. пл. 114°, а из эпимера (XVI) аналогично был получен 3-эпивитамин D2 (XVIII) с т. пл. 179—180°.
XIIхшXIVXIIхшXIVXVXVОСОСНзОСОСНз
XIIхшXIV
XIIхшXIV
XV
XV
ОСОСНз
ОСОСНз
Формально можно считать, что полный синтез витамина D3 был завершен в 1951—1952 гг., когда Woodward с сотр. [998—1000] осуществил полный синтез холестерина — исходного продукта в синтезе витамина D3 по Win- daus [962, 9631.
Исследования по синтезу антирахитических витаминов и подобных им соединений проводили также Milas и сотрудники в Массачусетском технологическом институте [636—638], которым удалось получить модельное соединение (XIX), и несколько позднее Braude и Wheeler в Лондоне [181, сн2 //
\—/\=сн2
XIX
. Наиболее значительный вклад в решение проблемы полного синтеза витаминов D и их изомеров внесли две группы исследователей. Inhoffen (ученик Windaus) вместе с сотрудниками в Геттингенском университете с 1954 по 1960 г. провел широкие исследования и опубликовал большую серию работ [461—492]. В Лидском университете в Англии Harrison и Lythgoe с 1955 г. до настоящего времени ведут исследования по полному синтезу витаминов D и в последнее время успешно осуществили полный синтез 3-дезо- ксивитамина D2 и la-оксивитамина D3 [170, 171, 187, 236, 237, 239—242, 338, 349, 373—379, 600, 612—614].
. Конечно, полный синтез витаминов D не может конкурировать с более простым частичным синтезом путем фотохимического превращения провитаминов D, но эти исследования кроме теоретического интереса, который они, несомненно, представляют, сыграли в конце 50-х — начале 60-х годов важную роль в установлении строения многих изомерных витаминам D соединений. Кратко полный синтез витаминов D описаи в книгах А. А. Ах- рема, Ю. А. Титова [2] и В. М. Березовского [4], а также в обзорной статье Kobayashi [557].
ЧАСТИЧНЫЙ СИНТЕЗ ВИТАМИНОВ D2 И D3
Во всех ранних работах по полному синтезу витаминов D главная трудность состояла во введении экзоциклической метиленовой группы при С10. Поэтому, считая необходимым прежде всего осуществить синтез цис-триенового хромофора витаминов D, Inhoffen и Lythgoe пошли по пути частичного синтеза витаминов D. Для этого они использовали готовую систему колец С и D и боковой цепи, которую представляет собой альдегид Heilbron (XII), полученный в 1936 г. при окислении витаминов D хромовой кислотой или перманганатом калия [399]. Путем альдольной конденсации (XII) с п-оксициклогексаноном (XX) в присутствии этилата натрия получали эпимерную смесь (1 : 1) кетонов (XXI) и (XXII) [461].
Далее с помощью реакции Wittig [993] при взаимодействии кетонов с трифенилфосфинметиленом кетогруппа была заменена на метиленовую и получена смесь эпимерных 5,6-транс-витаминов D (XXIII) и (XXIV) [468, 478].
В 1957 г. Inhoffen с сотр. [479, 483] установил, что при облучении 5,6- трпнс-витаминов D профильтрованным УФ-светом с X > 290 нм происходит изомеризация в г{ис-изомер (XVII), и таким образом завершил частичный синтез витаминов D2 и D3 [483, 488].
Lythgoe с сотр. [373—375] провел частичный синтез витаминов D таким же путем, изменив лишь последовательность стадий: сначала они изомеризовали УФ-светом полученную Inhoffen [4611 смесь кетонов из транс- в ^uc-соединения (XXV), а затем по реакции Wittig
превратили кетоны в витамины D. Как и в случае получения витаминов D из их провитаминов, при частичном синтезе не удалось избежать стадии фотохимической изомеризации.
ПОЛНЫЙ СИНТЕЗ ВИТАМИНОВ D
ПО INHOFFEN
Полный синтез витаминов D включает решение трех основных задач [4851:
синтез структуры с цис- полиеновым хромофором и гидроксильной группой при С3 (XXVI);
построение гидриндановой системы колец С и D в транс-сочленении с ангулярной метильной группой (XXVII);
создание алифатической системы из 8 или 9 углеродных атомов, соответствующей боковой цепи витаминов D2 или D3 (XXVIII и XXIX).
XXVIXXVII IIR2= -C-CItaCH-C-CH-CH3
XXVI
XXVI
XXVIII
СНзСНз
II
R3= -с—сн-сна-сн2-сн-сна
XXIX
Исследования, связанные с созданием цис-триенового хромофора, привели к открытию целого ряда новых изомеров витамина D: 5,6-тране-ви- таминов D (XXIII) [476, 478], изовитамина D (XXX) [461], (/-тахистерина (XXXI) [472], изотахистерина (XXXII) [461]. Строение каждого изомера подтверждено частичным или полным синтезом.
Jnhoffen уделял также большое внимание синтезу тахистерина (XXXIII) [466, 469, 470, 472, 475], так как, согласно общепринятой в то время схеме Windaus [959], именно он считался непосредственным предшественником витамина D2.
OH(R)XXVIIOH(R)XXVII
OH(R)
XXVII
OH(R)
XXVII
Построению 8-метилгидриндан-4-ол-1-она (XXVII) и 8-метилгидриндан- 1,4-диона (XXXIV) был посвящен ряд работ Inhoffen с сотр. [463, 464, 467, 480—484, 486] и было найдено несколько вариантов синтеза этого структурного компонента. Наиболее простой путь получения оптически активного (XXVII) с природной конфигурацией состоит в расщеплении озонолизом витаминов D2 или D3 [480] или дегидровитамина D2 (XXXV) — побочного продукта при получении дигидротахистерина [484]. Восстановление озонида LiAlH4 дало спирт (XXXVI), а окисление его динитробензоата хромовой кислотой и омыление приводят к образованию (XXVII).
Затем кетон (XXVII) был синтезирован из кетодикарбоновой кислоты (XXXVII) [486]. Сама кислота была получена Inhoffen с сотр. [464] из эфира Hageman (XXXVIII) — продукта циклической конденсации ацетоуксусного эфира и формальдегида—с последующим декарбоксилированием и
XLIXLIIХИН
отщеплением воды. Эфир (XXXVIII) конденсировали с Р-хлорпропионовым эфиром (XXXIX) и после омыления и декарбоксилирования получали 3- метилциклогексен-2-он-1-пропионовую кислоту (XXXVII). Почти количественное присоединение HCN ведет к у-кетонитрилу (XL). Однако далее возможно получение природных и неприродных гидриндановых производных, причем неприродный цис-изомер (XLIII) получается гораздо легче: щелочной гидролиз нитрила и этерификация диазометаном ведут к получению эфира кетодикарбоновой кислоты (XLI). В результате дикмановской циклизации (XLI) и последующего омыления эфира бициклического дике-
тона (XLII) и декарбоксилирования образовался цяс-гидриндан- 1,4-дион (XLIII) [464]. '
Природный транс-изомер (XXVII) получен также из кислоты (XXXVII) [4861. Присоединение цианистого калия и кислотный (а не щелочной) гидролиз дают смесь цис- и транс-кетодикарбоновых кислот (XLI) и (XLIV), из которых вначале кристаллизуется более труднорастворимая транс-кислота, а оставшуюся ^ос-кислоту можно снова изомеризовать под действием минеральной кислоты в транс-форму.
Этерификация транс-кетокислоты (XLIV) диазометаном и восстановление диметилового эфира (XLV) NaBH4 приводят к оксидиэфиру (XLVI). Дикмановская циклизация в случае транс-соединения протекает с низким выходом вследствие затрудненного транс-структурой кольцеобразования. Полученный оксикетоэфир (XLVII) после омыления и декарбоксилирования дает транс-гидринданолон (XXVII) с т. пл. 110°, идентичный полученному при окислительном расщеплении витамина D2 [484].
Построение боковой цепи витамина D3 и завершение полного синтеза витаминов D были проведены Inhoffen с сотрудниками в 1959 г. [490, 491].
Гриньяровская реакция гидринданолона (XXVII) с кротилбромидом дает диол (XLVIII) с концевой двойной связью, которую затем окисляли осмиевым ангидридом в тетрол (XLIX). Последний при расщеплении тетраацетатом свинца и дегидратации дает смесь цис (L)- и транс-изомеров (LI) ненасыщенных альдегидов, которые после ацетилирования смеси легко разделяются хроматографически.
цис-Альдегид (L) по реакции Wittig с изоамилтрифосфонийбромидом превращали в диен (LII). Каталитическое гидрирование диена и омыление ацетатной группы дают С18-спирт (LIII) с природной конфигурацией боковой цепи, идентичный полученному из витамина D3 [480].
Спирт (LIII) был получен также из транс-альдегида (LI). Восстановление ненасыщенного альдегида (LI) литием в жидком аммиаке дает с очень низким выходом смесь насыщенного альдегида (LIV) и его 20-эпимера, которая была разделена хроматографированием на кремневой кислоте. В результате реакции (LIV) с изоамилтрифосфонийбромидом по Wittig и омыления образуется ненасыщенный продукт (LV), а после его гидрирования — спирт (LIII). Окисление последнего хромовым ангидридом в пиридине приводит к кетону (LVI) [480], который по реакции Wittig превращается в бутадиенпроизводное (LVII). Озонированием концевой двойной связи (LVII) и восстановлением озонида LiAlH4 получен спирт (LVIII), который окисляли МпО2 в а,Р-ненасыщенный альдегид (LIX) [482]. Завершается полный синтез получением 5,6-транс-витамина D3 и его фотохимической изомеризацией в витамин D3 [483, 485].
ПОЛНЫЙ СИНТЕЗ ВИТАМИНА D3
ПО LYTHGOE •
Inhoffen и сотрудникам не удалось избежать на последнем этапе полного синтеза витаминов D применения УФ-облучения для превращения 5,6-/пранс-изомера в 5,6-цис-витамин D. В 1970 г. английские исследователи во главе с Lythgoe завершили полный синтез витаминов D, совершенно не используя фотохимическую реакцию [289, 242]. Они пошли по пути полного синтеза превитамина D3, не содержащего экзоциклической метиленовой группы витаминов D, введение которой представляет наибольшую трудность. Как известно, превращение превитамина в витамин происходит в результате реакции термической изомеризации и не требует облучения.
В качестве исходных продуктов в полном синтезе D3 через превитамин Lythgoe и сотрудники использовали 9а-хлор-дез-АВ-холестан-8-он (LX) и 5-3-этинил-4-метилциклогекс-3-ен-1-ол (LXI) в виде Li-производного, предварительно защитив оксигруппу тетраметилсилированием.
Смесь этих веществ в растворе эфира при 0° переходит в ТМС-производ- ное хлоргидрина (LXII), полученного в чистом виде после удаления ТМС- группы. При взаимодействии (LXII) с бис-(этилендиамин)хроматом в диме- тилформамиде образуется ен-ин-ен (LXIII). Восстановлением последнего в присутствии катализатора Линдлара в растворе петролейного эфира и хроматографической очисткой получен превитамин-3 (LXIV), выделенный в виде 3,5-динитробензоата. В результате термической изомеризации в растворе бензола образуется 3,5-динитробензоат витамина D3, а после омыления — витамин D3 (LXV). Выход превитамина-3 по исходному хлор- кетону (LX) составляет 21%.
LX I
Синтезы исходных соединений (LX) и (LXI), осуществленные Lythgoe и сотрудниками, описаны ниже. ■
9а-Хлор-дез-АВ-холестан-8-он (LX). Первоначально соединения подобной структуры были получены Lythgoe из ацетата 7-кетохолестерина [236] или холестерина [349], а затем был осуществлен их синтез.
Диеновый синтез метилметакрилата (LXVI) с /пранс-пента-2,4-диеновой кислотой (LXVII) и щелочной гидролиз приводят к 1-метилциклогекс-З- ен-1, ^«с-2-дикарбоновой кислоте (LXVIII) и ее транс-изомеру (LXIX) (в соотношении 2 : 1), выделенным кристаллизацией [170]. При нагревании обеих кислот с уксусным ангидридом образуется ^«с-ангидрид, гидролиз которого дает только рацемическую цыс-кислоту (LXVIII) с выходом 55—60% по (LXVII). Оба энантиомера выделены с хорошими выходами из рацемата при разделении хинином. При эпоксидировании (—)-кислоты (LXVIII) лгхлорнадбензойной кислотой и кислотном гидролизе эпоксида
LXXXVI LX
образуется оксилактоновая кислота (LXX). Щелочным гидролизом и этерификацией мезитойной (2,4,6-триметилбензойной) кислотой получен мези- тоат (LXXI). Далее в результате серии реакций переэтерификации и бисдекарбоксилирования образуется 1-мезитоат-2-ацетат (LXXII), из которого также рядом реакций омыления и этерификации получают 4-метилцикло- гекс-З-ен-1, /пранс-2-диол-1-бензоат (LXXIII). Более подробно синтез (LXXIII) описан Lythgoe и др. [170].
Второй компонент, необходимый для дальнейших превращений,— ме- тилортодигидроцитронеллат (LXXIV) — был получен из цитронеллони- трила М (LXXV), который восстанавливали в дигидросоединение (LXXVI) и затем через иминоэфир превращали в (LXXIV) [171].
LXXVLXXVLXXVILXXVILXXIVLXXIV
LXXV
LXXV
LXXVI
LXXVI
LXXIV
LXXIV
При взаимодействии соединений (LXXIII) и (LXXIV) и щелочном гидролизе получали оксиэфир (LXXVII). Обработка его 1-диметиламино-1- метоксиэтиленом (LXXVIII) и щелочной гидролиз дали двухосновную кислоту (LXXIX). Этерификация ее диазометаном и циклизация диметилового эфира в присутствии NaH в диметилсульфоксиде приводят к смеси (6 : 1) двух кетонов, разделяющихся хроматографически, основной из которых (LXXX) эпоксидируют л-хлорнадбензойной кислотой и после гидролиза получают диоксикетон (LXXXI). При взаимодействии диацетата (LXXXII) с этандитиолом в присутствии эфирата BF3 образуется соответствующий этилентиоацетат, восстановлением которого никелем Ренея и омылением получают транс-диол (LXXXIII). Выход его по исходному продукту (LXXIII) составляет 18% [171].
Необходимый для дальнейших превращений 8£, 9£-эпоксид (LXXXV) был получен тремя различными методами [600]. Один из них состоял в превращении транс-диола (LXXXIII) в 9а-тозилат (LXXXIV), щелочная обработка которого дала эпоксид (LXXXV). Реакция эпоксида с НС1 в диоксане приводит к кристаллическому хлоргидрину (LXXXVI), из которого 9а-хлор-дез-АВ-холестан-8-он (LX) был получен при окислении хромовой кислотой. Выход продукта (LX) по 8а,9р-диолу (LXXXIII) составляет 73% [600].
- 5-3-этинил-4-метилциклогекс-3-ен-1-ол (LXI), необходимый для создания кольца А превитамина-3, был синтезирован Lythgoe и сотр. [239, 290, 2411 в 1971 г. Восстановлением 5-метокси-2-метилбензойной кислоты (LXXXVII) Li в NH3 получена метоксикислота (LXXXVIII), которая после гидролиза превращается в рацемическую кетокислоту (LXXXIX). После оптического разделения хинином энантиомер с т. пл. 101° и [а]д —385° (СНС13) восстановлен NaBH4 в (—)-лактон (ХС). Последний по методу Bruck, Lythgoe и др. [187] взаимодействием с метилатом натрия и восстановлением LiAlH4 превращен в оптически активный 5-3-оксиметил-4-метил- циклогекс-З-ен-1-ол (XCI).
LXXXIXLXXXIXСН3 ОСНзОЫаСН3 ОСНзОЫаХСХС
LXXXIX
LXXXIX
СН3 ОСНзОЫа
СН3 ОСНзОЫа
ХС
ХС
Окисляя этот диол МпО2 в ацетоне получают альдегид (ХСП), который по реакции Wittig с (С6Н5)3Р=СНС1 превращают в ю-хлордиен (ХСШ) (смесь цис- и транс-изомеров). Дегидрохлорирование смеси NaNH2 в аммиаке дает (LXI).
ПОЛНЫЙ СИНТЕЗ ТАХИСТЕРИНА
Синтез ненасыщенной триеновой системы тахистерина (XXXIII), в которую входят две эндоциклические двойные связи, соединенные ациклической транс-(—СН=СН—[-группой, представляет более простую проблему при полном синтезе, чем других 9,10-секостероидов. Полному синтезу тахистерина посвящен ряд исследований Inhoffen и сотрудников, проведенных в 1954—1956 гг. [466, 469, 470, 472, 4751, работы Lythgoe и сотрудников, опубликованные в 1967 г [187, 2371.
Построение структуры тахистерина, по Inhoffen, может идти двумя путями: углеродные атомы С6 и С7 и средняя двойная связь триеновой системы создаются за счет ацетиленовой группы (XCIV), соединяющей два.
■кетона (XCV) и (XCVI). Нагревание диола (XCVII) с А12О3 и частичное гидрирование тройной связи приводит к тахистерину (XXXIII). Этот способ получения (XXXIII) и синтезы структурных компонентов (XCV) и (XCVI) описаны в работах [462, 466, 469, 470, 474].
Возможен также другой путь [475] посредством соединения двух кольцевых систем (XCVIII) и (XCIX): углеводородный мост С6— С7 образуется при реакции Wittig между моноциклическим альдегидом (XCVIII) и би- ■циклическим фосфораном (XCIX).
Lythgoe с corp. [235, 2371 показал, что наиболее просто получить тахи- стерин, используя реакцию Wittig между бициклическим альдегидом (С) щ моноциклическим фосфораном (CI).
С[С[
С[
С[
Синтез (CI) был осуществлен следующим путем [1871: при конденсации 2-этоксибутадиена и цитраконового ангидрида был получен аддукт (СП), при кипячении которого с разбавленной соляной кислотой образовалась кетокислота (СШ). Кетокислоту восстанавливали NaBH4 и получали цис-, цис-оксикислоту (CIV). Оксикислота (CIV) при нагревании с соляной кислотой образует два лактона, из которых более стабильным является оптически активный 6-лактон (CV). Выделенный из рацемата при разделении хинином правовращающий энантиомер был гидролизован до оксикислоты, в результате обработки которой уксусным ангидридом и. пиридином была
CIXCIXexexCXICXICICI
CIX
CIX
ex
ex
CXI
CXI
CI
CI
получена у-лактоновая кислота (CVI). Далее кислоту трансформировали в хлорид, азид, изоцианат и фенилуретан (СУП). При обработке последнего этанольным раствором хлористого водорода образовался аминоэфир (СУШ), который затем был превращен в диметиламинокислоту (CIX). В результате реакций с йодистым метилом и последующей обработки метанольным раствором метилата натрия был получен метиловый эфир (СХ), который был восстановлен ЫА1Н4 до диола (CXI). Общий выход диола по исходному у-лактону составил около 10%. Затем диол (CXI) был превращен в фосфоран (CI) [237].
Бициклический компонент (С) для синтеза тахистерина был получен при окислении ацетата 7-кетохолестерина [2361 или холестерина [3491, а также из дикетона (СХП) путем расщепления его в дикислоту (СХШ) [235]. Циклизацией дикислоты получен кетон (CXIV), который разделен на оптические антиподы, а последующее введение боковой цепи в d-энантиомер и удаление защитной бензильной группы привели к соединению (CXV).
CXVICXVIIС "
Окисление оксигруппы в кетогруппу, превращение кетосоединения в монодегидропроизводное (СХ VI), а затем в оксиметиленовое производное (СХ VII), селективное гидрирование и восстановление ЫА1Н4 изопропилового эфира по оксиметиленовой группе дали желаемый альдегид (С).
ЧАСТИЧНЫЙ СИНТЕЗ ДРУГИХ ИЗОМЕРОВ ВИТАМИНОВ D
Поиски путей построения ^ыс-триенового хромофора витаминов D привели Inhoffen с сотр. [461, 462] к получению новых изомерных соединений. Так, конденсация альдегида (XII) с п-ацетоксициклогексаноном
(CXII) в присутствии этилата натрия дает смесь эпимерных кетонов (XXI). Замена кетогруппы на метильную при реакции с метиллитием и дегидратация диола (СХШ) на А12О3 привели к получению изовитамина D2 (XXX) [4611. В результате конденсации кетона (CXIV), полученного Windaus и Grundman [9651 из витамина D2, с литийацетиленидом (CXV),
синтезированным Inhoffen и др. [4621, образуется диол (CXVI). Селективное гидрирование ацетиленовой связи в присутствии катализатора Линдлара, восстановление диола (CXVII) двухйодистым фосфором и омыление метилового эфира (CXVIII) дают изотахистерин-2 (XXXII).
Окисление изотахистерина по Оппенауэру дает 3-кетон, который изомеризуется ВЕ3 в U-тахистерон (CXIX). Восстановление последнего LiAlH4 приводит к получению U-тахистерина (XXXI) [472].
ПОЛНЫЙ СИНТЕЗ 1а-ОКСИВИТАМИНА D3
В 1973 г. Lythgoe с сотр. [378, 379] осуществил полный синтез 1а-оксивитамина D3 (СХХ). При реакции оптически активного лактона (СХХ!) с л-хлорнадбензойной кислотой образуется а-эпок- сид (СХХП). Обработка эпоксида метанольным раствором метилата натрия дает эфир, который после гидролиза превращается в кристаллическую диокси-а, ji-ненасыщенную кислоту (СХХШ). Ацетилирование приводит к получению 3а,5|3-диацетоксикислоты, которую переводят в соответствующий хлорид и затем восстанавливают три-трет-бутоксиалю- могидридом лития в альдегид (СХХIV). Последний превращают при реакции с хлорметилентрифенилфосфораном в смесь Е- и Z-изомеров (CXXV).
CXXV1I1CXXV1I1CXXV11CXXV11
CXXV1I1
CXXV1I1
CXXV11
CXXV11
Смесь обрабатывают амидом натрия в жидком аммиаке, затем ацетоксигруппы омыляют метилатом натрия в метиловом спирте, заменяют их триметилсилиловыми группами и получают маслообразный енин (CXXVI) с общим выходом по исходному лактону (CXXI) 18%. Конденсация литиевого производного енина с 9а-хлор-дез-АВ-холестан-8-оном (LX) после замены ТМС-групп на ацетатные приводит к образованию хлоргидрина (CXXVII). После обработки хлоргидрина бис-(этилендиамин)-хромом в диметилформамиде и хроматографирования на силикагеле получают 1а, 3^- диацетат-9,10-секохолеста-5 (10),8-диен-6-ин (CXXVIII), который селективно гидрируют над катализатором Линдлара в петролейном эфире в диацетат la-оксипрекальциферола-З (CXXIX). После термической изомеризации, омыления и хроматографической очистки образуется 1а-оксивитамин D3 с т. пл. 134—136°. Выход витамина по хлоркетону (LX) составляет 22%.
глава viii Аналитические методыисследования витаминов Dи родственных соединений
. Аналитические исследования витаминов D и родственных соединений обширны и многогранны. Прежде всего они направлены на поиски методов качественного и количественного определения этих соединений. В настоящее время длительные и трудоемкие биологические методы определения [12, 819, 361 заменены более быстрыми и точными физико-химическими методами. Для этой цели используются цветные реакции, различные виды хроматографии, полярография, УФ-, ИК-, ЯМР-, масс-спектроскопия и т. д.
Аналитические методы исследования сыграли большую роль в выделении и идентификации активных метаболитов витаминов D и способствовали прогрессу в понимании механизма действия и метаболизма витаминов D. Широкое применение находят методы тонкослойной, колоночной и i азо- жидкостной хроматографии, УФ-спектроскопии и другие для аналитического контроля на всех стадиях промышленного получения витаминов D2 и D3.
ЦВЕТНЫЕ РЕАКЦИИ И КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЕ
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Витамины D и родственные им стерины дают цветные реакции с различными реагентами, что широко используется при колориметрическом определении витаминов D.
Реакция с треххлористой сурьмой. В 1936 г. Brockman и Chen [184] установили, что витамины D2 и D3 дают со SbCl3 в хлороформе оранжевожелтое окрашивание с максимумом абсорбции при X 500 нм. Эту реакцию многократно усовершенствовали: в 1940 г. Nield и др. [669] для повышения стабильности реагента предложили проводить определение в присутствии ацетилхлорида, a Luthra и Taj al [610] точно определили его процентное содержание (2,5—3%); Wilkie и др. [944] нашли, что целесообразно проводить реакцию с добавлением уксусного ангидрида. При изучении механизма реакции Kobayashi [550, 551, 553] установил, что витамин D3 с реактивом Nield образует два бистероида.
Проведение реакции. К 1 мл хлороформного раствора витамина D2 (~0,05 мг) приливают три капли ацетилхлорида или уксусного ангидрида и 6 мл раствора SbCl3 в хлороформе (23 г SbCl3 на 100 мл хлороформа). Через 4 мин окрашенный^ в желтовато-розовый цвет раствор колориметрируют.
Реакция витаминов D со SbCl3 является высокочувствительной и позволяет определить 0,2 мкг витамина. Оптическая плотность комплекса при 500 нм равна 1800. Провитамин D и люмистерин дают со SbCl3 красное окрашивание, а холестерин и изопировитамин — желтое, но чувствительность реакции в десятки раз ниже [184].
Коэффициент молярной экстинкции окрашенного комплекса при 500 нм является функцией концентрации витамина D в растворе. Поэтому реакция витаминов D со SbCl3 положена в основу метода колориметрического определения содержания витаминов D в биологических и синтетических продуктах [359, 27, 35]. Несмотря на недостаточную специфичность, реакция со SbCl3 широко применяется для количественного определения витаминов D [33].
Реакция Либермана — Бурхарда. Большинство стер инов, в том числе и витамины D, дают интенсивное окрашивание с серной кислотой. В 1885 г. Lieberman [594] предложил проводить реакцию стеринов с серной кислотой и уксусным ангидридом, a Burchard [190] в 1889 г. провел эту же реакцию в растворе хлороформа. ■
Проведение реакции: к раствору 0,5 мг витамина D3 в 5 мл хлороформа добавляют 0,3 мл уксусного ангидрида и 0,1 мл концентрированной серной кислоты и полученную смесь энергично встряхивают; появляется яркокрасное окрашивание, быстро переходящее в фиолетовое, а затем через голубое в зеленое.
Появление при реакции быстро сменяющихся окрашиваний связано, вероятно, с образованием галохромных солей ненасыщенного стерина или продукта его дальнейшей дегидратации.
Исследованию реакции Либермана — Бурхарда для различных стеринов посвящено много работ. Установлено [298, 299], что положительную реакцию дают стерины, имеющие двойные связи при С4 и С5 с (или без) дополнительной двойной связью или гидроксильной группой при С3 или С7. Наличие кетогруппы в этих положениях приводит к отрицательной реакции.
Серная кислота является составной частью многих реагентов, дающих цветные реакции со стеринами: при смешивании раствора стерина в хлороформе с концентрированной серной кислотой происходит окрашивание обоих слоев (реакция Залковского [67]), а смесь уксусный ангидрид—серная кислота в трихлорэтане вызывает флуоресценцию витаминов D и ДГТ3. Последняя реакция является исключительно чувствительным методом определения [208].
Реакция Чугаева. Впервые описана еще в 1900 г. [72] и состоит в образовании окрашенных продуктов при взаимодействии хлороформных растворов стеринов с реактивом Чугаева — хлористым ^гинкацетилхло- ридом. -
Проведение реакции: к 0,5 мл хлороформного раствора стерина (0,25— 1,0 мг/мл) прибавляют 1 мл 20%-ного раствора хлористого цинка в ледяной уксусной кислоте и 0,5 мл ацетилхлорида. Смесь нагревают на водяной бане при 65° в течение 6 мин, после чего объем доводят хлороформом до 5 мл и снимают спектры поглощения продуктов реакции.
Предполагаемый механизм реакции заключается в дегидратации стеринов до диенов или в разрыве кольца В при С10 [2161. Чувствительность этой реакции в два—четыре раза превосходит чувствительность широко применяемой для анализа стериновых соединений реакции Либермана—Бурхарда [17], специфичность ее также значительно выше. Автор совместно с Ю. А. Холодовой и В. П. Вендтом [71] исследовал спектрофотометрические
характеристики продуктов реакции Чугаева для 40 стериновых соединений, в том числе витаминов D2 и D3, их эфиров, фторированных аналогов, провитаминов D, различных фотодериватов и большого количества производных холестерина.
Установлено, что максимумы светопоглощения для различных стери- нов лежат в различных областях спектра и значительно отличаются по оптической плотности. Реакция Чугаева может успешно применяться для идентификации и количественного определения витаминов D и других стеринов.
Реакция с 1,3-дихлоргидрином глицерина. Открыта в 1945 г. Sobel с corp. [827] и модифицирована Campbell [195]; она состоит в появлении зеленого окрашивания (максимум поглощения цветного комплекса при X 625 нм) при прибавлении реагента к раствору витаминов D в присутствии ацетилхлорида. Коэффициент экстинкции ЕГ™ продукта реакции при X 625 нм равен 2200.
. Комплексы с эргостерином, 7-дегидрохолестерином или холестерином характеризуются небольшим поглощением при 625 нм.
Реакция с ароматическими альдегидами. Витамины D дают цветные реакции с ароматическими альдегидами в присутствии трихлоруксусной кислоты, из которых наиболее типичной является реакция с фурфуролом [710]. Провитамины D не дают реакцию с альдегидами, а превитамины хотя и дают аналогичную реакцию, но с меньшей интенсивностью окраски.
Проведение реакции: к 1 объему бензольного раствора витамина D2 добавляют равный объем бензольного раствора фурфурола и 5 объемов насыщенного бензольного раствора трихлоруксусной кислоты. После нагревания на кипящей водяной бане получается розово-фиолетовое окрашивание. Максимум поглощения окрашенного соединения наблюдается в области длин волн 500—550 нм. Чувствительность реакции: 5 мкг витамина D2 или D3 или их эфиров.
Для колориметрического определения витамина D в фармацевтических препаратах была использована реакция с п-метоксибензальдегидом [111]. Абсорбционный максимум окрашенного соединения наблюдается при 685 нм. Чувствительность реакции 0,1—0,5 мкг витамина D, точность определения составляет 100,2 ± 1,44%.
Реакция с йодом в этилендихлориде [611]. Витамины D2 и D3 дают в этом случае интенсивное желтое окрашивание с максимумом абсорбции при X 450 нм. Максимум развития окраски наблюдается через 7 мин; интенсивность окраски повышается при добавлении n-хлорбензоата ртути. Реагент обладает высокой специфичностью в отношении витаминов D и более чувствителен, чем 1,3-ди хлор гидрин глицерина, хотя менее чувствителен, чем SbCl3. Провитамин D, люмистерин и холестерин практически не мешают определению.
Green [356] установил, что треххлористый йод в СС14 количественно реагирует с витамином D с выделением свободного йода, и разработал на основе этой реакции метод количественного определения витаминов D. Ошибка определения составляет ±5%.
Реакция с пятихлористой сурьмой. В. П. Вендт [15] предложил колориметрический метод определения витаминов D2 и D3, основываясь на реакции витаминов с дихлорэтановым раствором SbCl5. Метод позволяет определить 2 мкг витамина.
Реакция Розенхейма [771] состоит в добавлении нескольких капель водного раствора трихлоруксусной кислоты к хлороформному раствору стерина. Голубое окрашивание указывает на наличие системы сопряженных
двойных связей (например, при С5— С6 и С7— С8). Красное окрашивание специфично для стероидов с А1,2 или А1,13 двойными связями.
Недавно [350] предложен колориметрический метод определения витамина D2 с использованием трифторуксусной кислоты. Максимум оптической плотности окрашенного комплекса наблюдается при 490 нм. Метод дает хорошие результаты при определении 5—15 мкг витамина D2 в пробе и применяется для анализа фармацевтических препаратов [206].
Реакция с хлоридом олова [873]. Реагент представляет собой 0,01 %-ный раствор SnCl2 в ацетилхлориде. С хлороформным раствором витаминов D образует окрашенное соединение. Максимум оптической плотности достигается через 3 мин и не изменяется в течение б мин. Реакция применима для колориметрического определения витаминов D.
Реакция с тетрацианэтиленом, протекающая как присоединение по Diels — Alder, в последнее время изучается некоторыми авторами [308, 197] с целью использования ее для определения нанограммовых количеств витаминов D.
ХРОМАТОГРАФИЯ ВИТАМИНОВ D
И РОДСТВЕННЫХ СОЕДИНЕНИЙ
Хроматографический метод находит широкое применение при решении многих задач, связанных с исследованиями в области витаминов D, таких как:
выделение витаминов D из биологических материалов (например, жира печени рыб и т. п.) [185, 186];
изучение метаболизма витаминов D для разделения, препаративного накопления и очистки метаболитов витамина D3 [672, 608, 167, 384, 584, 723, 845, 846, 422, 431, 825];
анализ витаминов D в различных фармацевтических препаратах [169, 370, 59];
анализ синтетических смесей, полученных при фотохимической изомеризации провитаминов D и химической изомеризации витаминов D [358, 359, 34, 5, 546, 630, 91, 836];
выделение витамина D из смесей природных и синтетических продуктов для последующего количественного определения по колориметрической реакции с треххлористой сурьмой или спектрофотометрически [656, 310, 359, 562, 554, 91];
качественный (включая экспресс-методы) и количественный контроль на всех стадиях синтеза при промышленном получении витаминов D2 и D3 [78, 40, 91]. .
Во всех указанных случаях используют различные виды хроматографии — бумажную, колоночную, тонкослойную, газожидкостную и гельфильтрацию.
Бумажная хроматография. Работы по разделению витаминов D, их провитаминов и холестерина с помощью бумажной хроматографии появились в начале 50-х годов. Kritchevsky и Kirk [572] в 1952 г. сообщили о разделении на фильтровальной бумаге, импрегнированной куилоном. в метаноле холестерина (Rf 0,56), эргостерина и 7-ДГХ (Rf 0,84 и 0,88). Davis, McMahon и др. [238] подобрали условия (система метанол — вода — эфир 65 : 10 : 25) для отделения витаминов D2 и D3 (Rf 0,86 и 0,88) от холестерина, эргостерина и 7-ДГХ (Rf 0,52; 0,55 и 0,56 соответственно). Затем Kodicek и Ashby [561] на фильтровальной бумаге, импрегнированной
жидким парафином, разделили витамины D2 и D3, холестерин, 7-ДГХ, эргостерин, люмистерин и супрастерин. И. Н. Гаркина [28] разработала способ разделения стеринов на бумаге, отмытой 10%-ной НС1 и пропитанной 1%-ным раствором парафина в хлороформе с применением подвижной фазы — 87%-ного метанола. В этих условиях, по данным И. Н. Гаркиной, холестерин и эргостерин остаются на старте, а 7-ДГХ и витамин D3 имеют Rf 0,43 и 0,81 соответственно. На бумаге, отмытой 10%-ной НС1 и импрег- нированной 3%-ным раствором вазелина в хлороформе, в 72%-ном диоксане И. Н. Гаркиной удалось хорошо разделить даже витамины D (Rf витамина D2 0,27, а витамина D3— 0,76). Недостатки бумажной хроматографии: длительное время разделения, невозможность препаративного накоп-
Рис. 5. Разделение фотоизомеров эргостерина на колонке силикагель — окись алюминия [630]:Р — превитамии-2; L — люмистерии-2, Т — тахнстерии-2, Е — эргостерин.Рис. 5. Разделение фотоизомеров эргостерина на колонке силикагель — окись алюминия [630]:Р — превитамии-2; L — люмистерии-2, Т — тахнстерии-2, Е — эргостерин.ления веществ, не всегда удовлетворительное качество разделения.
Рис. 5. Разделение фотоизомеров эргостерина на колонке силикагель — окись алюминия [630]:
Р — превитамии-2; L — люмистерии-2, Т — тахнстерии-2, Е — эргостерин.
Рис. 5. Разделение фотоизомеров эргостерина на колонке силикагель — окись алюминия [630]:
Р — превитамии-2; L — люмистерии-2, Т — тахнстерии-2, Е — эргостерин.
Колоночная хроматография. В 1936 г. Brockman [185, 186] применил колоночную хроматографию для выделения витамина D3 (в виде 3,5-динитробензоата) из концентрата жира печени рыб, используя в качестве сорбента окись алюминия и систему бензол — бензин. Затем Velluz с сотр. [898] на колонке с нейтральной А12О3 при элюции смесью петролейного эфира + 10% бензола выделили из смеси продуктов облучения превитамин-2 и превитамин-3 (как 3,5- динитробензоаты).
Norman и DeLuca [672] использо-
. вали колонку с кремневой кислотой. При элюции смесью 10—20% эфира в н-гексане были разделены витамины D2, эргостерин и тахистерин. Parekh и Wasserman [6961 использовали колонку с силикагелем G, a Dolmet и Norman [294] описали обратно-фазовую колоночную хроматографическую систему, способную отделять витамин Dg от D3 и эргостерин от 7-ДГХ и холестерина, используя специальное соевое масло как стационарную фазу. Применялись и другие инертные носители для выделения витамина D, такие, как флоридин [357], флюоро- пак [207, 210], окись алюминия [527, 545], смесь окиси алюминия и силикагеля [630]. Разделение витаминов D, их провитаминов и фотодериватов на колонке с активированной А12О3 описали Shaw и Jefferies (элюция петро- лейным эфиром + 6% ацетона) [815], a Kobayashi [545] разделил люми- стерин-2, тахистерин-2 и эргостерин в смеси н-гексан — диэтиловый эфир (2 : 1)
Tulecki и Adamczewska [878—881, 883] провели серию исследований по подбору сорбентов и условий хроматографического разделения на колонках эргостерина, витамина D2 и их 3,5-динитробензоатов.
Mermet-Bouvier [630] использовал колонку с силикагелем, содержащим 12% А12О3 и диэтиловый эфир как подвижную фазу для разделения превитамина-2 и витамина D2, а также смеси, полученной после облучения
эргостерина, причем достигнуто удовлетворительное разделение превитамина-2 (Р), люмистерина-2 (L), тахистерина-2 (Т) и эргостерина Е (рис. 5). Необходимо отметить, что отделить превитамин-2 от люмистерина-2 довольно трудно даже с помощью ТСХ.
Особенно широко колоночная хроматография применяется в последние годы для разделения и выделения метаболитов витаминов D. Метод
колоночной хроматографии на кремневой кислоте был разработан Norman и DeLuca [672], а затем модифицирован Haussler, Myrtle и Norman [384], Ponchon и DeLuca [723], Lawson, Wilson и Kodicek [584]. При хроматографировании на кремневой кислоте Lund и DeLuca [608] обнаружили, что меченный тритием витамин D3, метаболизируясь в организме, образует пять радиоактивных фракций, и выделили первый активный метаболит — 25-OHD3 [166, 843].
При выделении метаболитов, более полярных, чем 25-OHD3, Holick и DeLuca [422] установили, что диоксипроизводные витамина D3 не разделяются на колонке с кремневой кислотой, тогда как на сефадексе LH-20 в смеси СНС13— скеллизольв В (65 : 35) хорошо разделяются 24,25- и 25,26- (OH)2D3. Сефадекс LH-20 был использован для выделения и очистки 1а,25- (OH)2D3 и его триметилсилилового эфира [585, 423, 424]. Для выделения
Рис. 6. Разделение витамина D3, его метаболитов и аналогов на сорбенте Zorbax Sil [455]:
а — элюция смесью 2%-иого метанола в хлористом метилене; б — элюцня смесью 0,02—6%-ного метанола в хлористом метилене.
триоксипроизводного витамина D3 — la,24,25-(OH)3D3 был применен новый сорбент — фенилоксиэтилпроизводное сефадекса LH-20 [431]. Элюцию колонки проводили смесью хлороформ—петролейный эфир (65 : 35).
С помощью высокоскоростной жидкостной хроматографии Matthews и др. [619] разделили смесь la,25-(OH)3D3, 25,26-(OH)2D3, 25-OHD3 и la- OHD3. Ikekawa и Koizumi [4551 применили колоночную хроматографию под высоким давлением для разделения метаболитов и некоторых аналогов витамина D3. Хроматографированием на колонке «Zorbax Sil» при элюции смесью 0,02—6% метанола в хлористом метилене были разделены витамин D3, 25-OHD3, 24,25-(OH)3D3 и la,25-(OH)2D3, la-OHD3, 24-OHD3 и la,24- (OH)2D3. Более того, удалось разделить 24Д- и 245-эпимеры la,24-(OH)2D3 и la,24,25-(OH)3D3, а в случае 24-OHD3 и 24,25-(OH)2D3 на R- и S-эпимеры были разделены их триметилсилиловые производные (рис. 6).
Хроматография на колонке с А12О3 под высоким давлением была успешно применена Steurle [836] для разделения смеси и последующего количественного определения витамина D3, 7-ДГХ и его фотодериватов.
Тонкослойная хроматография. Norman и DeLuca в 1963 г. [672] провели хроматографическое разделение смесей витаминов D2 и D3, эргостерина, 7-ДГХ, дигидротахистерина (ДГТ), ацетата эргостерина, ацетата холестерина, 3,5-динитробензоата витамина D2 и облученного раствора на пластинках с кремневой кислотой (толщина слоя 250 нм), активированных при 140° в течение 16 ч. Наилучшими для разделения смеси были системы 5% ацетона —95% гексана (I), 10% ацетона — 90% н-гексана (II) и хло-
роформ (III). Так, в системе III величина Rf тахистерина, витамина D2 и эргостерина равна 0,64; 0,44 и 0,35 соответственно. Parekh и Wasserman (6961 использовали пластинки с силикагелем G, предварительно активированные при 100° в течение 1 ч, и систему растворителей ацетон—я-гексан— метанол (15 : 135 : 3) для разделения радиоактивного витамина D3 и 7-ДГХ (Rf 0,58 и 0,46).
А. Богословский, Л. О. Шнайдман и др. [5] исследовали хроматографическое поведение витамина D2, прекальциферола, люмистерина, тахистерина и эргостерина, а также продуктов, образующихся при УФ-облучении эргостерина, на пластинках с тонким слоем окиси алюминия или силикагеля. Установлено, что на окиси алюминия в системе циклогексан—
Вещество
А12О3
Силика- renb+Ag.NO3
Эргостерин
0,31
0,38
Витамин D2
0,38
0,67
Тахистерин
0,43
0,77
Люмистерин
0,53
0,34
Прекальцнферол
0,59
0,85
Таблица 9. Значения Rf продуктов облучения эргостерина [5]Таблица 9. Значения Rf продуктов облучения эргостерина [5]эфир (1:4) прекальцнферол и люми- стерин, а также витамин D2 и тахи- стерин плохо отделяются друг от друга (табл. 9). Более удовлетворительное разделение было получено' при хроматографировании в тонком слое силикагеля с азотнокислым серебром в системе хлороформ — метанол (96: 4).
Таблица 9. Значения Rf продуктов облучения эргостерина [5]
Таблица 9. Значения Rf продуктов облучения эргостерина [5]
На тонкослойных пластинках с силикагелем, импрегнированных 5% AgNO3, Sklan и Budowski [823] не только отделили витамины D от холес
терина, эргостерина и других стеринов, но и разделили смесь витаминов D2 и D3, a Ditullio и др. [288] достигли разделения таких близких но строению стеринов, как холестерин, латостерин и десмостерин.
Ponchon и Fellers [722] изучили хроматографическое поведение витамина D2, прекальциферола, холестерина и их эфиров на тонкослойных пластинках с силикагелем G и окисью алюминия, подобрали условия качественного разделения и разработали метод количественного извлечения витамина D2 из сорбента для последующего спектрофотометрического определения. Pinelli и др. [7201 достигли наилучшего разделения витамина D и холестерина на пластинках с силикагелем G в смеси растворителей этилендихлорид — бензол — ацетон (90 : 90 : 20) или этиленхлорид — метил- изобутилкетон (180 : 20).
Ряд авторов описали условия хроматографического разделения слабополярных стероидов — продуктов окисления холестерина, в том числе 7-оксихолестеринов, 25-оксихолестерина и других, на пластинках с силикагелем G в системе бензол — этилацетат (2:1) [889] и на колонке с сефадексом LH-20 [891].
В последние годы тонкослойная хроматография широко применяется для выделения витаминов D и родственных стеринов при количественном определении колориметрическим или спектрофотометрическим методом [620, 339, 293, 554]. При разработке таких методов анализа необходимо подобрать условия (сорбент, систему растворителей) для качественного разделения смеси веществ иа тонкослойных пластинках; количественно элюировать вещества из сорбента [120]; определить стабильность исследуемых веществ в условиях хроматографирования.
Для элюирования витамина D и других стеринов из сорбента используют этиловый и метиловый спирт [91, 40], ацетон [672], хлороформ, эфир и другие растворители. Стабильность витамина D в тонких слоях силикагеля доказали Bolliger и др. [169], а на пластинках с окисью алюминия — Э. А. Петрова с сотр. [58].
Автор с сотр. [911 разработал метод количественного определения витамина D3, 7-ДГХ, превитамина-3 и люмистерина-3 в смесях, полученных после УФ-облучения 7-ДГХ, и в спиртовом концентрате витамина D3 хроматоспектрофотометрическим методом. С этой целью было изучено хроматографическое поведение указанных соединений на различных сорбентах и установлено, что лучшее разделение веществ наблюдается на окиси алюминия II степени активности в смеси растворителей бензол — ацетон (93 : 7), на силикагеле КСК или G в системах петролейный эфир — эфир (1 : 1) и хлороформ — эфир (9 : 1), а также на готовых пластинках «Силу- фол UV 254» (ЧССР) во всех указанных системах.
и спиртового концентрата (Б):и спиртового концентрата (Б):а — на пластинке с А12О3 в смеси бензол — ацетон (93 : 7); б — на пластинке с силикагелем в смеси хлороформ — эфир (9 : 1); / — витамин D8; II — 7-дегидрохолестерин; III — превитамни; IV — люмнстерни; V — перекись 7-дегндрохолестерниа; пунктиром обозначены продукты фотоокислеиия 7-дегндрохолестерииа.а — на пластинке с А12О3 в смеси бензол — ацетон (93 : 7); б — на пластинке с силикагелем в смеси хлороформ — эфир (9 : 1); / — витамин D8; II — 7-дегидрохолестерин; III — превитамни; IV — люмнстерни; V — перекись 7-дегндрохолестерниа; пунктиром обозначены продукты фотоокислеиия 7-дегндрохолестерииа.
и спиртового концентрата (Б):
и спиртового концентрата (Б):
а — на пластинке с А12О3 в смеси бензол — ацетон (93 : 7); б — на пластинке с силикагелем в смеси хлороформ — эфир (9 : 1); / — витамин D8; II — 7-дегидрохолестерин; III — превитамни; IV — люмнстерни; V — перекись 7-дегндрохолестерниа; пунктиром обозначены продукты фотоокислеиия 7-дегндрохолестерииа.
а — на пластинке с А12О3 в смеси бензол — ацетон (93 : 7); б — на пластинке с силикагелем в смеси хлороформ — эфир (9 : 1); / — витамин D8; II — 7-дегидрохолестерин; III — превитамни; IV — люмнстерни; V — перекись 7-дегндрохолестерниа; пунктиром обозначены продукты фотоокислеиия 7-дегндрохолестерииа.
Хроматограммы смеси продуктов облученного раствора и спиртового концентрата на А12О3 и силикагеле представлены на рис. 7. Результаты исследования стабильности витамина D3, 7-ДГХ и его фотодериватов на различных сорбентах приведены в табл. 10. Из всех изученных соединений лишь для превитамина-3 не удалось подобрать условий для количественного определения. Не менее важно было подобрать условия для разделения и количественного определения продуктов реакции дегидробромирования при получении провитамина D3—7-ДГХ.
Автором совместно с Л. К- Курченко [40] установлено, что только на пластинках с силикагелем G, импрегнированных 10% AgNO3 (система хлороформ — гексан (3 : 1)), удается разделить различные возможные продукты реакции дегидробромирования: Зр-бензоаты холестерина, холестадиенов-5,7; -4,6; -5,8(9); -8,14; холестатриены-2,4,6 и -4,6,8; Зр-бензоаты холестен-5- диола-3р,7а и -Зр, 7р. На окиси алюминия в системе петролейный эфир — ацетон (98 : 2) хорошо отделяются только диены от триенов и оксипроизводных. Большинство изученных соединений, особенно холестатриены и бензоат холестадиен-4,6-ола-3р, нестабильны в условиях хроматографирования на многих изученных нами сорбентах. Наиболее подходящим сорбентом оказалась нейтральная окись алюминия фирмы «Бельм».
Обнаружение витаминов D и родственных соединений на ТСХ-пластин- ках. Для обнаружения витамина D и родственных соединений широко применяются следующие смеси для опрыскивания пластинок: 50%, 75%, 98%- ная серная кислота [395, 891, 722], насыщенный раствор SbCl3 или SbCl5 в хлороформе [6961, 50%-ный раствор SbCl3 в ледяной уксусной кислоте [722], 0,2%-ный раствор КМпО4 в 1 %-ной Na2CO3 [672], 20%-ный раствор фосфорновольфрамовой кислоты в абсолютном этаноле и 10%-ный раствор фосфорномолибденовой кислоты [722].
Таблица 10. Стабильность витамина D3, 7-дегидрохолестерина, превитамина-3 и люмистерина-3 при хроматографировании на различных сорбентах
Сорбент
Нанесено, мкг
Определено, %
витамина
D3
7-ДГХ
превита- мина -3
люмисте- рина-3
А12О3, кислая («Бельм»)
150
92,0
90,0
61,0
95,0
100
92,0
83,4
55,0
98,0
50
85,0
80,0
—
96,0
А13О3, основная («Бельм»)
150
94,9
94,7
82,0
96,0
100
94,0
94,0
74,0
94,7
50
94,0
92,0
72,8
95,0
А12О3, нейтральная («Бельм»)
150
98,7
98,0
50,0
98,0
100
102,0
99,0
57,0
98,0
50
98,0
96,0
—
96,7
А12О3, II степень активности, слабоще-
150
101,0
98,7
80,0
100,0
лочная
100
97,8
101,0
86,0
98,3
50
100,0
100,0
95,0
98,0
Силикагель G
100
93,0
90,2
73,0
94,0
Пластинки «Силуфол UV 254»
100
98,5
100,0
78,0
95,0
Автор предпочитает использовать смесь концентрированной серной кислоты, хлорного железа и о-фосфорной кислоты. Смесь готовят следующим образом: 2 г хлорного железа растворяют в 100 г о-фосфорной кислоты и 5 мл полученного раствора приливают к 100 г серной кислоты. При опрыскивании этой смесью пластинок витамины D2 и D3 проявляются в виде желто-коричневого пятна, переходящего в зелено-коричневое; превитамин имеет такую же окраску, 7-ДГХ — розовую, быстро переходящую в голубую, люмистерин — имеет вид пятна голубого цвета, холестерин — розового, перекиси 7-ДГХ и эргостерина — зеленого.
При проведении количественного анализа наиболее удобно определять положение пятен стеринов на хроматограмме с помощью УФ-света (254 нм) или опрыскивать каким-либо реагентом контрольную полосу.
ГАЗОЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
Исследование витаминов D2 и D3 с помощью газожидкостной хроматографии (ГЖХ) было проведено в 1960 г. Ziffer с сотр. [10031. Они установили, что витамины D циклизуются в нагретой зоне колонки в смесь пиро- и изопирокальциферолов [192] и в результате этой трансформации обнаруживаются на хроматограмме в виде двух пиков (рис. 8).
Время выхода,мин1,84; 2,081,66; 1,881,832,082,352,051.68Время выхода,мин1,84; 2,081,66; 1,881,832,082,352,051.68Рис. 9. Газовые хроматограммы [риметилси- лиловых эфиров вита минов D2 и D3 на носителе OV-17.Обозначения те же, htq на рис. 8.Рис. 9. Газовые хроматограммы [риметилси- лиловых эфиров вита минов D2 и D3 на носителе OV-17.Обозначения те же, htq на рис. 8.Рис. 8. Газовые хроматограммы витаминов D2и D3 [875];а, а' — пирокальциферол; б, б' — изопирокальциферолРис. 8. Газовые хроматограммы витаминов D2и D3 [875];а, а' — пирокальциферол; б, б' — изопирокальциферолколичествах [121,количествах [121,вв
Время выхода,мин
1,84; 2,08
1,66; 1,88
1,83
2,08
2,35
2,05
1.68
Время выхода,мин
1,84; 2,08
1,66; 1,88
1,83
2,08
2,35
2,05
1.68
Рис. 9. Газовые хроматограммы [риметилси- лиловых эфиров вита минов D2 и D3 на носителе OV-17.
Обозначения те же, htq на рис. 8.
Рис. 9. Газовые хроматограммы [риметилси- лиловых эфиров вита минов D2 и D3 на носителе OV-17.
Обозначения те же, htq на рис. 8.
Рис. 8. Газовые хроматограммы витаминов D2и D3 [875];
а, а' — пирокальциферол; б, б' — изопирокальциферол
Рис. 8. Газовые хроматограммы витаминов D2и D3 [875];
а, а' — пирокальциферол; б, б' — изопирокальциферол
количествах [121,
количествах [121,
в
в
Пик пироизомера имеет больше площадь, и время выхода его раньше. Отношение площадей двух пиков (пиро/изопиро) около 1,86 (при 230°) и очень мало зависит от температуры и количества вводимой пробы. Время выхода продуктов термической циклизации витаминов D2 и Ds различное, как и их провитаминов — эргостерина и 7-ДГХ [1003]:
Соединение
Витамин D2
Витамин D3 Пирокальциферол-2 Изопирокальциферол-2 Эргостерин 7-ДГХ Люмистерин
Nair и др. [6621 изучили поведение при ГЖХ трифторацетатов (ТФА) и триметилсилиловых (ТМС) производных витаминов D, их провитаминов и дигидротахистерина (ДГТ). Относительное время выхода в случае производных витаминов D уменьшается, но сохраняется общая последовательность элюции соединений, за исключением ДГТ (табл. 11). Разделение витаминов D3 и D3 и других стеринов в виде ТМС-эфиров более четкое (рис. 9). Evans [309] исследовал поведение при ГЖХ витаминов D2 и D3, ДГТ и холестерина в виде свободных соединений, ацетатов и триметилсилиловых производных. Наилучшее разделение получено в случае ТМС-производных. Определение витаминов D с помощью ГЖХ в виде ТМС-производных в настоящее время используется наиболее широко [326].
Высокая чувствительность определения витаминов D (0,2—0,4 мкг) методом ГЖХ позволяет применять его для исследования различных биологических проб, в которых витамины D содер;
657]. Однако образование двух пиков пиро- и изопиросоединений, а также не вполне удовлетворительное отделение от холестерина затрудняют применение метода ГЖХ для количественного определения витаминов D. Поэтому были предложены методы, включающие предварительную химическую изомеризацию витаминов D в различные изомерные им соединения, дающие при ГЖХ один пик. Так, Murray и др. [657, 658] обрабатывали витамин D SbCls и таким образом превращали его в изовитамин D. Изовитамины D2 и D3 четко отделяются друг от друга и от холестерина. Витамин D изомеризовали в изотахистерин [659, 816, 544] или его гептафторбутират [663, 945]. Однако введение дополнительных операций по
химической изомеризации витаминов D значительно затрудняет проведение анализа. В связи с этим многие исследователи предпочитают проводить определение витаминов D с помощью ГЖХ по величине площади одного из пиков [875]. В качестве внутреннего стандарта обычно используют хо- лестан [1003, 662] или ацетат 7-ДГХ [875].
С помощью ГЖХ определяли витамины D2 и D3 в смеси продуктов фотохимической изомеризации эргостерина [555] и 7-ДГХ [8261, разделяли
Таблица 11. Время выхода на неполярной фазе SE-52 (фенилсилоксан SE-52) относительно холестана [662]
Соединение
Время выхода, мин
исходного соединения
ТФА
тмс
Витамин Da
2,01; 2,38
1,85; 2,22
1,77; 2,75
Витамин D3
1,96; 2,30
1,60; 1,95
1,56; 2,37
Холестерин
2,21
1,67
2,46
Эргостерин
2,66
1,98
3,15
7-ДГХ
2,39 .
1,73
2,78
дгт
2,44
1,37
2,07
смеси витаминов D и их превитаминов [573], гидроксилированных производных витамина D3— la,25-(OH)2D3, 25,26-(OH)2D3, 25-OHD3 и la-OHD3, а также многих производных холестерина [212, 865].
Газожидкостная хроматография является одним из наиболее чувствительных методов количественного определения витаминов D и все более широко применяется при биологических исследованиях и анализе различных препаратов витаминов D [137, 304, 306, 876].
ПОЛЯРОГРАФИЯ
Полярографическая активность витаминов D установлена в 1961—1962 гг. японскими исследователями Takahashi и Tachi [848—851]. Полярографическое поведение и механизм восстановления сопряженной системы двойных связей витаминов D2 и D3, эргостерина, 7-ДГХ, пиро- и изопироэргокальциферолов изучили В. Г. Майрановский и Г. И. Самохвалов [45—47, 49—501. При полярографировании в растворе чистого диметил- формамида или в присутствии 5% воды на фоне четвертичной аммониевой соли — (С2Н5)4 NJ все исследованные соединения восстанавливаются полярографически, давая на полярограмме одну двухэлектронную волну. Основным фактором, определяющим легкость восстановления, является количество двойных связей, находящихся в сопряжении. При переходе от системы двух сопряженных двойных связей к триеновой системе витаминов D значение потенциала полуволны Eif, становится менее отрицательным — на 0,35—0,36 В [47].
В. Г. Майрановский, И. А. Богословский и Г. И. Самохвалов провели полярографическое изучение веществ, образующихся при получении витамина D из эргостерина — прекальциферола, люмистерина, тахистери- на, изотахистерина и 5,6-транс-витамина D2 [48]. Все изученные соединения оказались полярографически активными; значения Ei/, приведены в табл. 12.
Полярографическое поведение диеновых структур (эргостерина и люмистерина) по сравнению с поведением триеновых соединений подтверждает установленный ранее факт, что легкость восстановления определяется чис-
лом двойных связей. Полярографическая волна эргостерина и люмистерина перекрывается током разряда фона. Существенная разница между Eilt прекальциферола и Ец., витамина D2 и тахистерина объясняется, по мнению авторов, структурными факторами, и в частности стерическими препятствиями, обусловливающими некопланарность сопряженной системы прекальциферола и затрудняющими восстановление. Это различие (особенно четкое в случае производной полярограммы) позволяет определять витамин D2 и прекальциферол-2 при совместном присутствии, например в растворе после УФ-облучения провитаминов D или в спиртовом концентрате. Однако близость значений Е\р витамина D2 и тахистерина требует удаления по
следнего или с помощью аддукта сследнего или с помощью аддукта смалеиновым ангидридом, или путеммалеиновым ангидридом, или путем
следнего или с помощью аддукта с
следнего или с помощью аддукта с
малеиновым ангидридом, или путем
малеиновым ангидридом, или путем
ВеществоФон Афон БВитамин D22,552,49Эргостерин—2,88 ±0,03Лю мистерии—2,88 ±0,03Прекальциферол2,662,61Тахистерин2,562,53Изотахистерин2,682,635,6-транс-Витамин D22,38—ВеществоФон Афон БВитамин D22,552,49Эргостерин—2,88 ±0,03Лю мистерии—2,88 ±0,03Прекальциферол2,662,61Тахистерин2,562,53Изотахистерин2,682,635,6-транс-Витамин D22,38—Таблица 12. Значения—Ei/2(B) витамина D2и родственных соединений относительно насыщенного каломельного электрода на фоне 0.04М (С2Н5)4М1 в ДМФ (фон А) и в смеси ДМФ — 8% воды (фон Б)Таблица 12. Значения—Ei/2(B) витамина D2и родственных соединений относительно насыщенного каломельного электрода на фоне 0.04М (С2Н5)4М1 в ДМФ (фон А) и в смеси ДМФ — 8% воды (фон Б)Бензоат1 волна11 волнаХолестерина1,822,347-Бромхолестерина1,762,125,6-Дибромхолестерина1,922,337р-Оксихолестерина1,852,287-Кетохолестерина1,87—4-Бром-7-кето холестерина1,462,087-ДГХ1,872,31Бензойная кислота1,73—Бензоат1 волна11 волнаХолестерина1,822,347-Бромхолестерина1,762,125,6-Дибромхолестерина1,922,337р-Оксихолестерина1,852,287-Кетохолестерина1,87—4-Бром-7-кето холестерина1,462,087-ДГХ1,872,31Бензойная кислота1,73—Т а б л и ц а 13. Значения—fi/2(B) некоторых продуктов синтеза витамина D3Т а б л и ц а 13. Значения—fi/2(B) некоторых продуктов синтеза витамина D3
Вещество
Фон А
фон Б
Витамин D2
2,55
2,49
Эргостерин
—
2,88 ±0,03
Лю мистерии
—
2,88 ±0,03
Прекальциферол
2,66
2,61
Тахистерин
2,56
2,53
Изотахистерин
2,68
2,63
5,6-транс-Витамин D2
2,38
—
Вещество
Фон А
фон Б
Витамин D2
2,55
2,49
Эргостерин
—
2,88 ±0,03
Лю мистерии
—
2,88 ±0,03
Прекальциферол
2,66
2,61
Тахистерин
2,56
2,53
Изотахистерин
2,68
2,63
5,6-транс-Витамин D2
2,38
—
Таблица 12. Значения—Ei/2(B) витамина D2и родственных соединений относительно насыщенного каломельного электрода на фоне 0.04М (С2Н5)4М1 в ДМФ (фон А) и в смеси ДМФ — 8% воды (фон Б)
Таблица 12. Значения—Ei/2(B) витамина D2и родственных соединений относительно насыщенного каломельного электрода на фоне 0.04М (С2Н5)4М1 в ДМФ (фон А) и в смеси ДМФ — 8% воды (фон Б)
Бензоат
1 волна
11 волна
Холестерина
1,82
2,34
7-Бромхолестерина
1,76
2,12
5,6-Дибромхолестерина
1,92
2,33
7р-Оксихолестерина
1,85
2,28
7-Кетохолестерина
1,87
—
4-Бром-7-кето холестерина
1,46
2,08
7-ДГХ
1,87
2,31
Бензойная кислота
1,73
—
Бензоат
1 волна
11 волна
Холестерина
1,82
2,34
7-Бромхолестерина
1,76
2,12
5,6-Дибромхолестерина
1,92
2,33
7р-Оксихолестерина
1,85
2,28
7-Кетохолестерина
1,87
—
4-Бром-7-кето холестерина
1,46
2,08
7-ДГХ
1,87
2,31
Бензойная кислота
1,73
—
Т а б л и ц а 13. Значения—fi/2(B) некоторых продуктов синтеза витамина D3
Т а б л и ц а 13. Значения—fi/2(B) некоторых продуктов синтеза витамина D3
окисления на свету в присутствии фотосенсибилизатора. Эти исследования послужили Н. А. Богословскому, В. Г. Майрановскому и др. [61 основой для разработки полярографического метода определения витамина D2 в продуктах облучения эргостерина.'
Автор и сотрудники изучали полярографическую активность некоторых стеринов, являющихся основными и побочными продуктами реакций аллильного бромирования эфиров холестерина и дегидробромирования в синтезе витамина D3: Зр-бензоатов холестерина, 7-бромхолестерина, 5,6- дибромхолестерина, 4-бром-7-кетохолестерина, 7-ДГХ, а также бензойной кислоты.
В условиях полярографирования (анод — серебряная пластинка, раствор ДМФ, фон — растворитель ДМФ, индифферентный электролит — те- траэтиламмоний йодистый) изученные соединения проявили полярографическую активность. Все соединения, кроме бензоата 7-кетохолестерина и бензойной кислоты, образуют в интервале — 1,0 ±2,6 В по две четко'
выраженные волны, высота которых пропорциональна концентрациям, бензоат 7-кетохолестерина и бензойная кислота образуют по одной волне.
Значения £1/2 для изученных соединений приведены в табл. 13. Основной продукт реакции бромирования бензоата холестерина — бензоат 7- бромхолестерина имеет на полярограмме две волны с £1/2— 1,76 и —2,12 В. Реакционная смесь в тех же условиях полярографирования имеет три волны с £1/2—1,45; —1,76 и—2,12 В. Из исследованных веществ только на полярограмме бензоата 4-бром-7-кетохолестерина наблюдается волна с Е\№ —1,46 В, остальные возможные продукты реакции при —1,45 В неактивны. Таким образом, удалось обнаружить не описанный ранее побочный продукт реакции бромирования [881.
УФ-, ИК-, ЯМР- И МАСС-СПЕКТРОСКОПИЯ
Витамины D и родственные им стерины имеют максимумы поглощения в области ближнего ультрафиолета — при X 200—400 нм. И хотя максимум поглощения в УФ-спектре характерен не столько для индивидуального соединения, сколько для определенной хромофорной группировки, УФ-спектры играют важную роль при установлении строения, и количественном анализе стеринов.
Основные термины, принятые в спектрофотометрии, определены в книге А. Гиллема и Е. Штерна [29] : коэффициент молярной экстинкции е (чаще применяют log е); для веществ с неизвестным молекулярным весом пользуются символом Е1^» который связан с е следующим соотношением:
' о _
ь — £ 1 см " 1Q i
где М — молекулярный вес.
Для характеристики УФ-спектра используют различные варианты записи положения и интенсивности полос поглощения и растворителя, в котором проведено измерение (например, УФ-спектр (этанол): Хмакс 265 нм, £ 19200).
цис-Триеновая хромофорная группировка витаминов D характеризуется максимумом поглощения при 265 нм, довольно значительным коэффициентом молярной экстинкции в максимуме поглощения (~ 19000) и минимумом поглощения при 228 нм. Замена цис-триенового хромофора на транс-триеновый (5,6-транс-витамин D3) ведет к смещению максимума поглощения к 273 нм, а для триеновой системы тахистерина характерно поглощение при X 280 нм.
Для провитаминов D, имеющих две двойные связи в кольце В при С5—С„ и С7—С8, характерны три максимума поглощения в УФ-спектре, при длине волны 271, 282 и 293 нм. Другие гомоаннелярные диены (содержащие двойные связи в одном кольце) также поглощают в области 260—285 нм, тогда как гетероаннелярные диены (имеющие сопряженные двойные связи в разных кольцах) характеризуются максимумом поглощения в области X 220—250 нм и более высоким коэффициентом молярной экстинкции [681.
Данные УФ-спектров (Хмакс и коэффициент молярной экстинкции) витаминов D и родственных им стеринов, имеющих хромофорные группы, приведены в работах Dorfman [296], Ю. А. Титова, И. С. Левиной [65] и др. УФ-спектры витамина D2, эргостерина и его фотодериватов — преви- тамина-2, тахистерина-2 и люмистерина-2 в интервале длин волн 230—318 нм подробно описаны в статье Sternberg и др. [834].
ИК-спектры, более характерные для индивидуальных соединений, чем УФ-спектры, в последнее время являются важным источником информации о химическом строении стеринов и играют важную роль при их идентификации. Для исследований могут быть взяты как спирты, так и этерифици- рованные стерины [43, 56]. Данные по корреляции ИК-спектров стероидов с их структурой представлены в книге Л. Физер, М. Физер [68], обзорной работе Ю. Н. Левчука [42] и многочисленных оригинальных работах.
ИК-спектры витаминов D2 и D3 исследованы Morris и др. [651]; было установлено четкое различие в ИК-спектрах двух практически подобных соединений, обусловленное колебаниями —С—Н-связи ненасыщенной боковой цепи витамина D2— наличие полосы поглощения при 970 см-1, которая отсутствует в спектре витамина D3, имеющего насыщенную боковую 144
цепь. ИК-спектры витаминов и большого количества родственных им стери- нов сняты автором и представлены в главе X.
С помощью ИК-спектроскопии проведено количественное определение 3,5-динитробензоатов эргостерина, витамина D2, люмистерина-2 и перекиси эргостерина в их смесях [561.
ЯМР- и масс-спектроскопия дают возможность получить дополнительную информацию о структуре и используются для определения витаминов D в смесях [877]. Основные сведения о применении ЯМР-спектроскопии в химии стероидов изложены в книге Н. Бхакна и Д. Уильямса [14]
Исследования с помощью УФ-, ИК-, ЯМР- и масс-спектроскопии позволили идентифицировать ряд активных метаболитов и синтетических аналогов витаминов D. Данные УФ-, ИК-, ЯМР- и масс-спектров являются важной характеристикой витаминов D и родственных соединений.
Ю 8-269
Технология получения витаминов D2 и D3
В настоящее время в промышленном масштабе получают витамины D2 и D3, необходимые для профилактики и лечения рахита у людей, сельскохозяйственных животных и птиц.
Витамин D2 выпускается в кристаллическом виде для приготовления медицинских препаратов — масляного или спиртового растворов. Для животноводства используют так называемую фотосмолу, представляющую смесь продуктов фотохимического превращения эргостерина, из которой готовят масляный раствор. Кроме того, для нужд сельского хозяйства выпускают облученные дрожжи. Препараты витамина D2 применяются для профилактики и лечения рахита у молодняка крупного рогатого скота и свиней.
Витамин D3 кристаллический или его комплекс с холестерином («виде- хол») используют для приготовления лекарственных препаратов—масляного или спиртового раствора, а также для производства белкового комплекса витамина D3 — видеина-3 [25]. Препараты витамина D3 для сельского хозяйства, в основном птицеводства, выпускаются в виде масляного раствора «фотосмолы» или белкового комплекса («видеин D3»), технология которого разработана В. П. Вендтом [19—21].
Технология производства витаминов D2 и D3 описана в книгах Vogel- Knobloch [916], Л. О. Шнайдмана [73, 74] и многочисленных статьях [30, 77, 79, 23, 84, 86, 24, 53 и др.].
ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА ПРОЦЕСС .
ФОТОХИМИЧЕСКОЙ ИЗОМЕРИЗАЦИИ ПРОВИТАМИНОВ D
Сложный процесс фотохимической изомеризации провитаминов D, лежащий в основе получения витаминов D, в теоретическом аспекте изучен довольно детально (см. главу IV). Но при промышленном проведении процесса ряд факторов оказывает значительное влияние на состав получаемой смеси продуктов фотолиза провитаминов и определяет выход витамина D.
ИСТОЧНИКИ УЛЬТРАФИОЛЕТОВОГО ИЗЛУЧЕНИЯ
Еще в 1928 г. авторы ряда работ [933, 5711 пришли к заключению, что фотохимическое превращение эргостерина зависит от длины волны применяемого УФ-излучения. Более детальные исследования провели в 1929 г. Reerink и др. [758, 759] и Windaus и др. [9491. Так как
получить монохроматический свет тогда было трудно, в качестве источников УФ-излучения использовали кварцевую и ртутную лампы или магниевую вспышку и различные светофильтры. Reerink и др. [759] применяли следующие фильтры: слой 0,5 см, наполненный бензолом, который поглощает УФ-свет с длиной волны короче 275 нм; пары хлора — этот фильтр пропускает 90% лучей с X 254 нм, но поглощает почти полностью свет с длиной волны 275—390 нм; слой 0,5 см, заполненный 0,5%-ным раствором KNO3 в дистиллированной воде, который поглощает волны короче 241 нм.
2.95НМ2.95НМ3030.20.20^Ю^ЮТаким образом, Reerink и другим удалось получить две области длин волн—больше 275 нм и коротковолновое излучение с X 254 нм—и установить,, что при длинноволновом излучении выход витамина D2 может достигать почти 60%, тогда как при коротковолновом излучении ■— только 15%; при дальнейшем облучении происходит сдвиг максимума в УФ-спектре к 282 нм.
2.95НМ
2.95НМ
30
30
.20
.20
^Ю
^Ю
00250 500 550 Х,нмРис. 10. Зависимость между длиной волны ультрафиолетового излучения и выходом витамина D2.250 500 550 Х,нмРис. 10. Зависимость между длиной волны ультрафиолетового излучения и выходом витамина D2.Windaus и др. [954] изучали фотохимическую изомеризацию эргостерина при облучении его ртутно-кварцевой лампой (непрофильтрованный свет), дающей в основном коротковолновое излучение; вспышкой магния с наибольшей интенсивностью при 276—280 нм; ртутной лампой с ис
0
0
250 500 550 Х,нм
Рис. 10. Зависимость между длиной волны ультрафиолетового излучения и выходом витамина D2.
250 500 550 Х,нм
Рис. 10. Зависимость между длиной волны ультрафиолетового излучения и выходом витамина D2.
пользованием двойного фильтра из увиолевого стекла (длинноволновое излучение с X больше 290 нм); светом ртутной лампы, профильтрованным через раствор салициловой кислоты (область 275—325 нм удалена). В этих исследованиях было установлено, что выход витамина максимальный (до 40% при 50%-ном превращении) при применении длинноволнового излучения с X 290 нм.
Несколько позднее Windaus и др. [959] установили, что облучение УФ- светом с X > 280 нм ведет к накоплению люмистерина, а с X < 280 нм — тахистерина. Эти данные были уточнены Havinga и др. [387] при облучении 7-ДГХ: при облучении УФ-светом с X > 284 нм кроме витамина D3 образуется много люмистерина-3, а при X < 284 нм — мало люмистерина-3 и большое количество тахистерина-3, тогда как количество витамина в обоих случаях одинаково; при облучении коротковолновым светом с'Х 254 нм образуется много тахистерина и мало витамина D3.
Оптимальной областью УФ-излучения, обеспечивающей наиболее высокий выход витаминов D, является 275—310 нм [5401. При облучении эргостерина и 7-ДГХ монохроматическим УФ-светом, полученным из кварцевого монохроматора с длиной волны 248,3; 253,7; 265,2; 280,4; 296,7; 302,5 и 313 нм, было установлено [372, 188, 1891, что наиболее эффективен УФ- / свет с X 296,7 нм.
Недавно Kobayashi и др. [556], используя газожидкостную хроматографию для количественного определения продуктов УФ-облучения эргостерина, установили зависимость между длиной волны ультрафиолетового излучения и выходом витамина D2. Полученные результаты, представленные на рис. 10, показывают, что наиболее эффективной длиной волны для превращения эргостерина в витамин D2 является 295 нм (выход витамина D2 31,5%). Аналогичные результаты получены и другими исследователями- [101].
Получение монохроматического излучения с оптимальной для фотолиза- провитаминов длиной волны в производственных условиях связано с боль- 10*147
шими трудностями, поэтому нужную область спектра выделяли с помощью различных светофильтров. Кроме описанных выше использовали растворы неорганических и органических соединений (сернокислый никель, ацетат свинца [829], сероуглерод [410], ксилол, пары брома, стекла специального состава). Для фотохимической изомеризации провитаминов D применяли катодные лучи [421], излучения радия [615, 641], электроны, у-лучи от Со60 [915], ртутно-кварцевые [73], эритемные и бактерицидные лампы [16, 18]. Однако многие из этих источников излучения и светофильтры не нашли промышленного применения. В настоящее время в прошими трудностями, поэтому нужную область спектра выделяли с помощью различных светофильтров. Кроме описанных выше использовали растворы неорганических и органических соединений (сернокислый никель, ацетат свинца [829], сероуглерод [410], ксилол, пары брома, стекла специального состава). Для фотохимической изомеризации провитаминов D применяли катодные лучи [421], излучения радия [615, 641], электроны, у-лучи от Со60 [915], ртутно-кварцевые [73], эритемные и бактерицидные лампы [16, 18]. Однако многие из этих источников излучения и светофильтры не нашли промышленного применения. В настоящее время в производстве витамина D2 и D3 применяют в основном ртутно-кварцевые лампы ПРК-2 и эритемные с различными люминофорами.Ртутно-кварцевые лампы ПРК имеют линейчатый спектр в широкойизводстве витамина D2 и D3 применяют в основном ртутно-кварцевые лампы ПРК-2 и эритемные с различными люминофорами.Ртутно-кварцевые лампы ПРК имеют линейчатый спектр в широкой60г«50-60г«50-313313^50I#^50I#254254265265302257302257248248280280TJTJ289289I I. I . I I I 11,1Д_250 260 270 280 290 300 510Х^МI I. I . I I I 11,1Д_250 260 270 280 290 300 510Х^МРис. 12. Спектр излучения эритемных ламп с люминофором Э-3.Рис. 12. Спектр излучения эритемных ламп с люминофором Э-3.Рис. 11. Спектр излучения ртутнокварцевых ламп ПРК.Рис. 11. Спектр излучения ртутнокварцевых ламп ПРК.
шими трудностями, поэтому нужную область спектра выделяли с помощью различных светофильтров. Кроме описанных выше использовали растворы неорганических и органических соединений (сернокислый никель, ацетат свинца [829], сероуглерод [410], ксилол, пары брома, стекла специального состава). Для фотохимической изомеризации провитаминов D применяли катодные лучи [421], излучения радия [615, 641], электроны, у-лучи от Со60 [915], ртутно-кварцевые [73], эритемные и бактерицидные лампы [16, 18]. Однако многие из этих источников излучения и светофильтры не нашли промышленного применения. В настоящее время в про
шими трудностями, поэтому нужную область спектра выделяли с помощью различных светофильтров. Кроме описанных выше использовали растворы неорганических и органических соединений (сернокислый никель, ацетат свинца [829], сероуглерод [410], ксилол, пары брома, стекла специального состава). Для фотохимической изомеризации провитаминов D применяли катодные лучи [421], излучения радия [615, 641], электроны, у-лучи от Со60 [915], ртутно-кварцевые [73], эритемные и бактерицидные лампы [16, 18]. Однако многие из этих источников излучения и светофильтры не нашли промышленного применения. В настоящее время в про
изводстве витамина D2 и D3 применяют в основном ртутно-кварцевые лампы ПРК-2 и эритемные с различными люминофорами.
Ртутно-кварцевые лампы ПРК имеют линейчатый спектр в широкой
изводстве витамина D2 и D3 применяют в основном ртутно-кварцевые лампы ПРК-2 и эритемные с различными люминофорами.
Ртутно-кварцевые лампы ПРК имеют линейчатый спектр в широкой
60г
«50-
60г
«50-
313
313
^50
I#
^50
I#
254
254
265
265
302
257
302
257
248
248
280
280
TJ
TJ
289
289
I I. I . I I I 11,1Д_
250 260 270 280 290 300 510Х^М
I I. I . I I I 11,1Д_
250 260 270 280 290 300 510Х^М
Рис. 12. Спектр излучения эритемных ламп с люминофором Э-3.
Рис. 12. Спектр излучения эритемных ламп с люминофором Э-3.
Рис. 11. Спектр излучения ртутнокварцевых ламп ПРК.
Рис. 11. Спектр излучения ртутнокварцевых ламп ПРК.
области ультрафиолетового излучения (рис. 11). Энергия, необходимая для фотолиза провитаминов, составляет малую долю от общей энергии лампы. Сильное коротковолновое излучение этих ламп способствует образованию большого количества тахистерина — токсичного, легко окисляющегося побочного продукта, способствующего разрушению витамина D. Кроме того, лампы ПРК излучают много тепловой энергии,'что создает проблему отвода тепла и повышает взрывоопасность процесса облучения. .
В 1956 г. В. П. Вендт [16, 18] предложил использовать для фотолиза провитаминов D эритемные лампы. Эти лампы особенно привлекают тем, что их спектральные характеристики определяются люминофором. В настоящее время применяют люминофоры Э-2 и Э-3, с максимумом излучения при X 310—312 и 302—305 нм (рис. 12). Кроме того, возможно получение люминофоров, имеющих спектральные характеристики, еще более соответствующие необходимой области. Коротковолновое излучение у эритемных ламп практически отсутствует, и основными побочными продуктами при облучении 7-ДГХ являются антирахитически активный люмистерин-3 или нетоксичный люмистерин-2 в случае эргостерина. Холодная поверхность эритемных ламп позволяет проводить облучение в аппаратах, в которых облучаемый раствор контактирует непосредственно с поверхностью ламп. При этом достигается максимальное использование энергии источника ультрафиолетового излучения.
Автором совместно с В. П. Вендтом [23, 94, 261 проведены сравнительные исследования фотоизомеризации провитаминов D — эргостерина и
7-дегидрохолестерина под действием излучения ртутно-кварцевой лампы ПРК-2, бактерицидной и эритемной с люминофором Э-2 и Э-3; полученные результаты приведены в табл. 14.
При облучении провитаминов D лампами ПРК-2 максимальный выход превитамина (55—60%) получают при 20%-ном превращении провитамина. Одновременно образуется значительное количество тахистерина (около 20%). При увеличении процента превращения провитамина выход превитамина снижается. Максимальный выход витамина D в расчете на превращенный провитамин при таком облучении не превышает 35—40%.
При применении фильтра из эритемного стекла, который поглощает коротковолновое излучение (К < 280 нм), интенсивность излучения ламп заметно уменьшается, при этом количество тахистерина снижается почти
Таблица 14. Результаты опытов облучения 7-ДГХ и эргостерина лампами ПРК-2 и эритемными ,
Источник УФ-излучения
Превращения провитамина, %"
Выход, %
превитамина
тахисте-
люмистерина
мина
ПРК-2
20
55—60
18
40
50
45
23
32
ПРК-2 с фильтром
34
55
12
38
Эритемные и бактерицидные лампы
43
65
5
20
43
Эритемные лампы с люминофором Э-2
45
70
Следы
18
47
Эритемные лампы с люминофором Э-3
39
90
»
2
70
45
85
5
68
52
80
2
7
65
65
75
4
12
60
в два раза. Максимальный выход превитамина (55%) достигается при 34%- ном превращении провитамина.
Совместное облучение эритемными лампами с люминофором Э-2 и бактерицидными БУВ-30 в стационарном аппарате в условиях, близких к производственным, позволяет превращать до 43% провитамина с максимальным выходом превитамина 65%. Однако при таком облучении образуется значительное количество люмистерина (18—20%). Выход витамина составляет 43—45%. Эритемное облучение лампами с люминофором Э-2 дает аналогичные результаты.
Применение для реакции фотопревращения провитаминов D эритемных ламп с люминофором Э-3 оказалось более эффективным. Мы изучали фотохимическое превращение 7-ДГХ со степенью конверсии 35—65%. Выход превитамина во всех опытах высокий (80—90%) и лишь при превращении 65% исходного провитамина несколько снижается (до 75%). Количество люмистерина не превышает 5—-7%, а тахистерин обнаруживается в небольших количествах. Витамин D3 образуется с выходом 70% по превращенному 7-ДГХ. Облучение эргостерина дало подобные результаты. ■ Дальнейшее исследование фотохимического превращения эргостерина и 7-ДГХ при облучении эритемными лампами, проведенное автором, было основано на сравнении УФ-спектров облученных растворов при различной степени конверсии провитаминов.
Pfoertner и Weber [716, 717] показали, что при облучении эргостерина УФ-светом с длиной волны 253,7 нм с увеличением времени облучения величина экстинкции при 280 нм значительно возрастает (рис. 13), что свидетельствует о накоплении в растворе тахистерина, имеющего основной
максимум поглощения при X 280 нм с высоким коэффициентом экстинкции (е280 29 550 по сравнению с е282 11 700 у эргостерина).
При облучении эритемными лампами с люминофором Э-2 (лучше Э-3) с изменением степени конверсии эргостерина и 7-ДГХ от 25 до 95%
автор и сотрудники наблюдали заметное снижение оптической плотности облученного раствора и смещение максимума поглощения к 260 нм (рис. 14). Для растворов с большим процентом конверсии (приблизительно 90%) УФ-спектр имеет основной ярко выраженный максимум при 260 нм, характерный для превитамина. Снижение величины оптической плотности также характерно для превитамина, так как его коэффициент молярной экс-
Рис. 14. Изменение УФ-спектра 7-дегид- рохолестерина при облучении эритемной лампой с люминофором Э-3.Рис. 14. Изменение УФ-спектра 7-дегид- рохолестерина при облучении эритемной лампой с люминофором Э-3.Рис. 13. Изменение УФ-спектра эргостерина при облучении УФ-светом с X 253,7 нм.Рис. 13. Изменение УФ-спектра эргостерина при облучении УФ-светом с X 253,7 нм.тинкции меньше (е260 9100), чем у провитаминов. После термической изомеризации облученного раствора с 90—95%-ной конверсией УФ-спектр полученного спиртового концентрата имеет максимум при X 265 нм, характерный для витаминов D. .
Рис. 14. Изменение УФ-спектра 7-дегид- рохолестерина при облучении эритемной лампой с люминофором Э-3.
Рис. 14. Изменение УФ-спектра 7-дегид- рохолестерина при облучении эритемной лампой с люминофором Э-3.
Рис. 13. Изменение УФ-спектра эргостерина при облучении УФ-светом с X 253,7 нм.
Рис. 13. Изменение УФ-спектра эргостерина при облучении УФ-светом с X 253,7 нм.
Таблица 15. Состав спиртового концентрата витамина D3, полученного . при различной степени фотопревращения 7-ДГХ и его ацетата (облучение эритемными лампами с люминофором Э-3)
Провитамин
Превращение провитамина, %
Выход (по превращенному провитамину), %
превитамнна-3
люмистерина-3
| витамина D3
7-ДГХ
39,0
21,0
2,3
73,0
45,0
20,4
5,9
69,7
55,0
19,0
10,0
68,2
92,0
16,3
18,7
59,5
Ацетат 7-ДГХ
41,2
22,9
2,0
73,6
90.0
14,4
15,2
69,1
Состав смеси продуктов спиртовых концентратов витамина D, полученных при облучении провитаминов D до различной степени конверсии, был определен хроматоспектрофотометрическим методом [91], и полученные результаты представлены в табл. 15.
Проведенные исследования позволили В. П. Вендту и автору предложить новый способ получения препарата витамина D3 для животноводства путем превращения 7-ДГХ или его ацетата до 90—95% (при применении других источников излучения обычно проводят фотоизомеризацию провитаминов до 35—50%-ной конверсии, чтобы исключить накопление побочных продуктов). Исследование биологической активности препарата витамина D3, полученного новым методом, которое проведено нами совместно с Институтом птицеводства Южного отделения ВАСХНИЛ, показало его высокую эффективность при выращивании бройлеров и кур-несушек. Технологические преимущества получения спиртового концентрата витамина D3 путем 90—95%-ной конверсии 7-ДГХ описаны далее.
ОБЛУЧАТЕЛЬНЫЕ АППАРАТЫ
Выбор конструкции облучательного аппарата определяется прежде всего источником УФ-излучения. При применении ламп ПРК в настоящее время используют кварцевые стаканы, описанные в книге Л. О. Шнайдмана [731. Ранее были предложены другие конструкции об- лучательных аппаратов [64, 13].
Для облучения эритемными и бактерицидными лампами В. П. Вендт и др. [57] предложили стационарный аппарат, представляющий собой ем
кость для облучаемого раствора провитамина, в которую погружены источники излучения и мешалка для перемешивания раствора. Для достижения 40—45%-ного превращения облучение проводят в течение 1,5—2 ч.
Конструкция облучательного аппарата непрерывного действия, основанная на облучении раствора провитамина, протекающего в виде пленки по металлической поверхности на некотором расстоянии от эритемных ламп [39], не обеспечивала удовлетворительного выхода витамина D3 и не нашла промышленного применения.
В. П. Вендт, автор и В. А. Богуславский разработали облучательный аппарат непрерывного действия, который состоит из набора 6—20 облу- чательных элементов; каждый из них является эритемной лампой, заключенной в металлический трубчатый кожух из нержавеющей стали или алюминия с кольцевым зазором 2—Змм для пропускания раствора провитамина. Облучательные элементы соединены зигзагообразно и последовательно посредством штуцеров и соединительных патрубков (рис. 15). Набор облучательных элементов монтируется в герметичном металлическом корпусе с
Рис. 15. Схема аппарата для облучения провитаминов D эритемными лампами:/ — эритемная лампа; 2 — кожух эритемной лампы; 3— кожух аппарата: 4 — ввод раствора провитамина; 5 — вывод облученного раствора; 6—питание эритемных ламп.Рис. 15. Схема аппарата для облучения провитаминов D эритемными лампами:/ — эритемная лампа; 2 — кожух эритемной лампы; 3— кожух аппарата: 4 — ввод раствора провитамина; 5 — вывод облученного раствора; 6—питание эритемных ламп.прозрачными боковыми стенками, который запол
Рис. 15. Схема аппарата для облучения провитаминов D эритемными лампами:
/ — эритемная лампа; 2 — кожух эритемной лампы; 3— кожух аппарата: 4 — ввод раствора провитамина; 5 — вывод облученного раствора; 6—питание эритемных ламп.
Рис. 15. Схема аппарата для облучения провитаминов D эритемными лампами:
/ — эритемная лампа; 2 — кожух эритемной лампы; 3— кожух аппарата: 4 — ввод раствора провитамина; 5 — вывод облученного раствора; 6—питание эритемных ламп.
няется инертным газом, чем достигается взрывобезопасность аппарата.
Раствор провитамина, подаваемый через ротаметр в облучательные
элементы, заполняет всю систему и полностью вытесняет воздух из пространства между лампой и кожухом. Раствор провитамина протекает непосредственно по поверхности эритемных ламп. На каждом четвертом об- лучательном элементе имеется рубашка для подачи воды и охлаждения
облучаемого раствора. Скорость подачи раствора и степень превращения провитамина контролируются ротаметром.
Облучательные аппараты данной конструкции имеют следующие преимущества:
полное использование энергии источника УФ-облучения;
сведение к минимуму окислительных процессов за счет исключения контакта облучаемого раствора с воздухом;
облучение в тонком проточном слое исключает переоблучение;
возможность регулировать скорость подачи раствора и степень превращения провитамина;
обеспечивает взрывобезопасность в процессе облучения.
В настоящее время описанный облучательный аппарат широко применяется в производстве витамина D3.
РАСТВОРИТЕЛИ
Фотохимическую изомеризацию провитаминов D практически всегда проводят в растворе, обычно используя 0,1—1%-ные, преимущественно 0,1—0,2%-ные, растворы. В качестве растворителей применялись: этиловый спирт, изопропиловый спирт, эфир, гексан, изооктан, бензол, толуол, ксилол, циклогексан, декалин, парафин, диоксан, смесь 10% диоксана и 90% бензина, смесь спирта и бензола и др. [951, 952, 759, 615, 984].
Обычно используют этиловый и изопропиловый спирты, эфир, изооктан, бензол и о-ксилол. Преимуществом этилового и изопропилового спиртов является то, что в связи с низкой растворимостью провитаминов в спиртах непревращенный провитамин отделяют при концентрировании облученного раствора в 10—100 раз. В бензоле и ксилолах выход витаминов несколько выше, поскольку эти растворители почти полностью поглощают коротковолновое излучение. Однако хорошая растворимость провитаминов в бензоле, ксилолах, а также в эфире вызывает необходимость полного упаривания облученных растворов до фотосмолы и отделения непревращенного провитамина растворением остатка в спирте, что связано с технологическими трудностями.
ВЛИЯНИЕ ТЕМПЕРАТУРЫ'
Фотохимическую изомеризацию проводили при различных температурах (от 120° [820] до —195° [265]), однако сравнительные данные о выходе витамина D в зависимости от температуры фотолиза провитаминов отсутствуют. Некоторые авторы считают оптимальной температуру 70—90° [820]. Действительно, скорость активации провитаминов больше при более высокой температуре. Однако термическое превращение превитамина в витамин в процессе фотолиза является не совсем желательным процессом, и поэтому умеренные температуры (20—40°) более благоприятны.
ВЛИЯНИЕ КИСЛОРОДА
Фотохимическая изомеризация провитаминов D и термическое превращение превитаминов в витамины D всегда сопровождаются окислительными процессами. Наиболее нестабильным из фотодериватов является тахистерин, он легко окисляется и способствует окислению других продуктов фотолиза и витаминов. Как известно, препарат витамина D
для животноводства представляет неочищенную смесь всех продуктов фотохимической изомеризации провитаминов D. Поэтому очень важно выделить, идентифицировать и изучить биологические свойства и в первую очередь токсичность различных продуктов окисления, содержащихся в D-витаминном препарате.
Автор и др. [83, 87] исследовали некоторые продукты фотоокисления 7-ДГХ, имеющиеся в спиртовом концентрате витамина D3. С помощью тонкослойной хроматографии на пластинке с А12О3 или силикагелем удалось получить хорошее разделение всех компонентов смеси (рис. 16).
Установлено, что первичным продуктом окисления 7-ДГХ при фотохимической изомеризации является перекись 7-ДГХ, полученная впервые Schenk и др. [797]. При облучении в эфире количество перекиси 7-ДГХ Может достигать 8—10%, при облучении в спирте — 5—7%. Кроме перекиси 7-ДГХ в растворе присутствует ряд продуктов окисления, названных условно ФО-1 (Rf 0,67), ФО-2 (Rf 0,88), ФО-3 (Rf 0,36) и ФО-4 (Rf 0,20). Все эти вещества ярко флуоресцируют в УФ-свете. Исследование биологической активности ФО-1 и ФО-2 [83, 31] показало, что данные вещества не обладают антирахитической активностью, но сти-
мулируют действие витамина D3.
Продукты окисления эргостерина, которые
ФО-2
Ф0-1
ФО-4
ФО-3
Перекись7-ДГХ
Рис. 16. Хроматограмма, спиртового концентрата витамина D3 (пунктиром обо-
значены продукты фотоокисления).
образуются при УФ-облучении дрожжей, были
изучены Furst [343, 345], который выделил и исследовал перекись эрго
стерина и некоторые продукты ее дальнейшего превращения.
ОБЛУЧЕНИЕ ЭФИРОВ ПРОВИТАМИНОВ D
Эргостерин и особенно 7-ДГХ отличаются невысокой устойчивостью к кислороду воздуха, более стабильны их эфиры. Еще в 1928 г. Windaus и др. [948] установили, что эфиры эргостерина (ацетат, бензоат, пальмитат, фенилуретан, аллофанат и др.) после облучения УФ-светом и омыления образуют витамин D2. Однако лишь в последние годы появилось несколько патентов [820, 866, 867] на способы получения витаминов D путем облучения эфиров провитаминов (ацетата, бензоата, пропионата, валери- ата) и последующего омыления реакционной смеси.
В виде ацетатов облучают также провитамины активных метаболитов и аналогов витаминов D [818, 135, 342, 134]. Автор и сотрудники также исследовали фотохимическую изомеризацию ацетата 7-ДГХ и установили, что при 90—95%-ном превращении провитамина выход ацетата витамина D3 достигает почти 70%, тогда как при облучении 7-ДГХ выход витамина D3 составляет 60%. Кроме того, установлено, что в облученном растворе и спиртовом концентрате практически отсутствуют продукты окисления, а равновесие при термической изомеризации ацетата превитамина-3 больше смещено в сторону ацетата витамина D3.
ПОЛУЧЕНИЕ СПИРТОВОГО КОНЦЕНТРАТА
ВИТАМИНА D
ФОТОХИМИЧЕСКАЯ ИЗОМЕРИЗАЦИЯ ПРОВИТАМИНОВ D ДО 40—50%-НОЙ КОНВЕРСИИ
Метод включает следующие технологические этапы: приготовление 0,1—0,2%-ного спиртового раствора провитамина; фотохимическую изомеризацию;
концентрирование облученного раствора в 10 раз;
кристаллизацию непревращенного провитамина при охлаждении;
фильтрацию «вымороженного» провитамина (I осадок);
повторное концентрирование облученного раствора в 10 раз;
повторную кристаллизацию непревращенного провитамина;
фильтрацию «вымороженного» провитамина (II осадок);
термическую изомеризацию превитамина в витамин для получения спиртового концентрата.
Для получения высококачественного спиртового концентрата, содержащего не менее 50% витамина, необходимо следующее:
Готовить спиртовый раствор строго определенной концентрации (0,1 или 0,2%). При облучении в аппарате непрерывного действия с установленной на определенную концентрацию скоростью подачи раствора процент превращения провитамина зависит от концентрации раствора. При приготовлении исходного раствора с концентрацией, больше заданной, процент превращения может быть очень низким, а при меньшей концентрации возможно переоблучение.
Осуществлять продувку исходного раствора инертным газом. Проводить процесс облучения в токе инертного газа для снижения потерь за счет окисления провитаминов и их фотодериватов, которые могут составлять 10—15%.
Осуществлять строгий контроль степени превращения провитамина и выхода превитамина и изменять условия облучения при снижении этих параметров.
Концентрирование облученного раствора необходимо проводить при упаривании в вакууме при температуре не выше 45—50°, чтобы уменьшить превращение превитамина в витамин, особенно в случае получения витамина D3. Последний легко образует молекулярный комплекс с 7-ДГХ, .который при вымораживании будет выделяться вместе с непревращенным провитамином. Потери витамина D3 могут составлять 10—15%. Кроме того, упаривание при высокой температуре ведет к разрушению провитамина и снижению процентного содержания «вымороженного» провитамина (иногда с 85% до 60%).
Для полного удаления непревращенного провитамина, особенно в случае 7-ДГХ, следует увеличивать концентрацию облученного раствора не менее чем в 100 раз (при исходной 0,2%) и проводить вымораживание при температуре —15 -;25°. Неудаленный провитамин мешает получению
чистого 3,5-динитробензоата витамина D2, затрудняет выделение комплекса витамина D3 и холестерина, а в препарате для животноводства снижает его качество.
Термическую изомеризацию превитамина в витамин необходимо проводить в атмосфере инертного газа.
Описание технологического процесса. В реактор растворения, снабженный механической мешалкой и рубашкой для подачи теплоносителя, 154
загружают 200 л этилового спирта и 0,445—0,47 кг 7-ДГХ с содержанием 85—90% основного вещества для получения 0,2%-ного раствора. Растворение ведут при перемешивании и температуре не выше 45—50°. После полного растворения 7-ДГХ полученный раствор охлаждают до 18—20° и в течение 30—40 мин пропускают ток инертного газа (азота) для удаления кислорода. Затем раствор через нутч-фильтр подают в напорный бак облу- чательного аппарата, где отбирают пробу для определения процентного содержания полученного раствора 7-ДГХ. Аппарат для облучения имеет 20—25 эритемных ламп. Спиртовый раствор подают через ротаметр со скоростью 18—25 л/ч, обеспечивающий 40—50%-ное превращение 7-ДГХ. Облученный раствор собирают в сборник или непосредственно в вакуум- выпарной аппарат. Из облученного раствора отбирают пробу для определения процента превращения 7-ДГХ и выхода превитамина. Облученный раствор упаривают в вакуум-выпарном аппарате при температуре теплоносителя не выше 45—50° до объема 20 л.
Полученный концентрированный раствор оставляют при температуре —15 4 20° на 12 ч для выкристаллнзацин непревращенного 7-ДГХ. Выпавшие кристаллы 7-ДГХ отфильтровывают, промывают 1—2 л холодного (—15°) этилового спирта и сушат в вакуум-сушильном шкафу при температуре 35° в течение 3—4 ч. Вымороженный 7-ДГХ взвешивают. Проба направляется на спектрофотометрическое определение процентного содержания. Вес вымороженного 7-ДГХ около 200 г, содержание основного вещества 80—85%.
Спиртовый фильтрат после отделения вымороженного 7-ДГХ, полученный после облучения на нескольких облучательных аппаратах, упаривают в вакуум-выпарном аппарате при температуре теплоносителя 45—50° в 10 раз. Полученный концентрат оставляют на 12 ч при температуре —15 44—20° для повторной кристаллизации непревращенного 7-ДГХ. Выпавшие кристаллы 7-ДГХ отфильтровывают, промывают холодным этиловым спиртом и сушат в вакууме.
Фильтрат после вторичного отделения 7-ДГХ загружают в реактор с обратным холодильником и кипятят 2,5 ч в токе азота для термического превращения превитамина-3 в витамин D3. После превращения раствор оставляют подтоком азота для охлаждения до комнатной температуры; после охлаждения измеряют объем полученного спиртового концентрата витамина D3 и отбирают пробу для определения количества витамина D3.
Выход витамина D3 на превращенный 7-ДГХ составляет 45—50%.
ФОТОХИМИЧЕСКАЯ ИЗОМЕРИЗАЦИЯ ПРОВИТАМИНОВ D ДО 90-95%-НОЙ КОНВЕРСИИ
Метод включает следующие технологические этапы: приготовление 0,1—0,2%-ного спиртового раствора провитамина; фотохимическую изомеризацию;
термическую изомеризацию превитамина в витамин в процессе концентрирования облученного раствора.
При проведении процесса облучения провитамина с 90—95%-ной конверсией необходимо строго следить за степенью конверсии, чтобы исключить переоблучение или большое количество непревращенного провитамина в спиртовом концентрате.
Описание технологического процесса. Для облучения используют 7-ДГХ с содержанием не менее 90%. Приготовление 0,1—0,2%-ного
исходного раствора и облучение его со скоростью 10—12 л/ч проводят, как описано выше.
Упаривание облученного раствора осуществляют в вакуум-выпарном аппарате при температуре 90—95° в рубашке аппарата в течение 2,5 ч в 50 раз в случае 0,1 %-ного раствора. Из полученного спиртового концентрата отбирают пробу для количественного определения витамина D3, преви- тамина, люмистерина и непревращенного 7-ДГХ хроматоспектрофотометрическим методом.
Полученный описанным методом спиртовый концентрат содержит: витамина D3 — 45—55%, превитамина-3 —12—17%, люмистерина-3—12—15%, 7-ДГХ — 8—10%.
Спиртовый концентрат витамина D3 поступает на приготовление готовых форм — масляного раствора или белкового комплекса «видеин».
МЕТОДЫ АНАЛИТИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ
Определение непревращенного 7-ДГХ в облученном растворе. 6 мл (при облучении 0,1 %-ного раствора) или 3 мл (при облучении 0,2%-ного раствора) облученного раствора упаривают в вакууме при температуре не выше 30° на роторном испарителе. Остаток в колбе растворяют в 0,5 мл бензола. На хроматографическую пластинку (13 X 18 см) с тонким слоем А12О3 (II степени активности) или«Силуфол UV 254» в четыре точки наносят микропипеткой на 0,1 мл по 0,03 мл бензольного раствора. Пластинку помещают в хроматографическую камеру и проявляют в смеси растворителей бензол—ацетон (93 : 7). После подъема жидкости по слою адсорбента на 16—17 см пластинку вынимают из камеры и сушат в вытяжном шкафу. Центральную часть пластинки закрывают крышкой из оргстекла и проявляют боковые контрольные точки парами пятихлористой сурьмы. 7-ДГХ проявляется в виде большого вытянутого пятна розового цвета близко возле старта. Параллельно контролю отмечают место нахождения 7-ДГХ в двух других точках и осторожно снимают скальпелем слой сорбента, содержащий 7-ДГХ. Одновременно снимают такой же по весу слой чистого сорбента для контроля. Пробы помещают в центрифужные пробирки, приливают по 10 мл этилового спирта, хорошо перемешивают стеклянной палочкой и центрифугируют. После этого растворы заливают в кюветы спектрофотометра и снимают УФ-спектр в диапазоне 240—300 нм.
Количество непревращенного 7-ДГХ в 1 мл облученного раствора определяют по формуле
X = 1,8 • Еюа, где Еам— показание спектрофотометра при 282 нм. Процент превращения 7-ДГХ (Y) определяют по формуле
Y = -~ — • 100,а
где а — количество 7-ДГХ в 1 мл исходного раствора.
Определение витамина D3 в спиртовом концентрате. 1 мл спиртового концентрата разбавляют 1 мл этилового спирта. На хроматографическую пластинку «Силуфол UV 254» в три точки наносят по 0,01 мл полученного раствора. В четвертую точку наносят 0,02 мл стандартного раствора, приготовленного из 20 мг 50%-ного видехола в 2 мл бензола.
Пластинку помещают в хроматографическую камеру и проявляют в смеси растворителей бензол—ацетон (93 : 7). После подъема растворите- 156
лей по слою адсорбента на 16—17 см пластинку вынимают из камеры и сушат в вытяжном шкафу. Затем пластинку просматривают под ультрахеми- скопом. Примерно на середине пластинки располагается пятно витамина D3. Зоны, содержащие витамин D3, в исследуемом и стандартном образцах тщательно снимают скальпелем, помещают в пробирки, приливают по 8 мл этилового спирта, перемешивают и отстаивают 20—25 мин. Снимают УФ- спектры растворов в диапазоне 240—300 нм.
Количество витамина D3 (X, мг) в 1 мл спиртового концентрата определяют по формуле
Х=4» -20,
^265
где £265 — оптическая плотность исследуемого образца при 265 нм; £265 — оптическая плотность стандартного образца при 265 нм.
Определение витамина D3 в масляных растворах. В настоящее время определение витамина D3 в готовом препарате — масляном растворе — проводят в соответствии с методикой, описанной в ГОСТе 11222-65 [33]. Метод основан на омылении масляного раствора спиртовой щелочью, экстракции витамина D3 вместе с другими продуктами фотолиза 7-ДГХ и колориметрическом анализе со SbCl3. В этом случае определяется суммарное содержание всех стеринов и количество витамина D3 оказывается сильно завышенным (иногда на 20—25%). Сотрудниками Киевского витаминного завода совместно с автором [44] разработан более достоверный метод анализа, включающий омыление, экстракцию, хроматографическое разделение смеси веществ на тонкослойных пластинках «Силуфол UV 254», элюцию витамина D3 с сорбента и его спектрофотометрическое (или колориметрическое) определение.
В последнее время во многих работах [531, 555, 556 и др.] предлагается определять не витамин D, а так называемый потенциальный витамин D, представляющий суммарное количество превитамина D и витамина D. В случае получения препаратов витамина D3 для животноводства, возможно, целесообразно включить в эту сумму также и люмистерин-3, обладающий антирахитической активностью [32].
ПОЛУЧЕНИЕ КРИСТАЛЛИЧЕСКИХ ВИТАМИНОВ D
ПОЛУЧЕНИЕ КРИСТАЛЛИЧЕСКОГО ВИТАМИНА D3
Основной способ выделения витамина D2 из смеси продуктов фотолиза эргостерина состоит в отделении непревращенного эргостерина кристаллизацией, этерификации полученной фотосмолы 3,5-динитробен- зоилхлоридом в пиридине, выделении технического 3,5-динитробензоата витамина D2 и его кристаллизации из ацетона. Выход 3,5-динитробензоата с т. пл. 145—147° составляет около 75% от количества витамина D2, содержащегося в фотосмоле. Далее эфир омыляют 5%-ным раствором КОН в метаноле и выделяют технический витамин D2, который кристаллизуют из метанола [53] . Были предложены методы выделения витамина D2 в виде 3,5-динитробензоата путем хроматографирования этерифицированной фотосмолы на А12О3 [905], различные способы этерификации — 3,5-динитробен-
зоилхлоридом или 3,5-динитробензойной кислотой в присутствии РОС1, [301], а также получение двойных соединений с холестерином, холестано- лом, капростанолом, ситостерином, стигмастерином [5981.
ПОЛУЧЕНИЕ КРИСТАЛЛИЧЕСКОГО ВИТАМИНА D3
Получение витамина D3 в кристаллическом виде значительно сложнее, чем витамина D2, так как и витамин D3, и его эфиры плохо кристаллизуются. В 1936 г. Windaus с сотр. [963, 9711 впервые выделил из смеси продуктов облучения 7-ДГХ витамин D3 в виде 3,5-динитробензоата после отделения непревращенного провитамина дигитонином, тахистери- на — цитраконовым ангидридом, после этерификации полученного остатка 3,5-динитробензоилхлоридом и очистки эфира витамина D3 путем хроматографирования на А12О3. Омыление 3,5-динитробензоата и перекристаллизация из 90%-ного ацетона позволили Schenk [7981 получить кристаллический витамин D3.
Вскоре Linsert [599] обнаружил свойство витамина D3 образовывать хорошо кристаллизующиеся аддукты с холестерином, 7-дегидрохолесте- рином, холестанолом и другими стеринами. Эти два метода выделения кристаллического витамина D3 используются как в лабораторной практике, так и при его промышленном получении.
Выделение в виде эфиров. Из эфиров витамина D3 лишь некоторые хорошо кристаллизуются, например бензоат, n-нитробензоат, 3,5-динитробензоат.
Для выделения витамина D3 предложены способы, состоящие в этерификации облученного раствора 3,5-динитробензоатхлоридом, выделении эфира превитамина-3 хроматографированием на нейтральной А12О3, кристаллизации из метилэтилкетона, термической изомеризации в эфир витамина D3 и омылении [904]. Другой способ заключается в хроматографировании фотосмолы на А12О3 в смеси бензол— лигроин (1 : 1), выделении фракции, содержащей витамин D3, этерификации 3,5-динитробензоилхлоридом, кристаллизации эфира витамина D3 из смеси ацетон — метанол и последующем омылении эфира [362, 409].
Эфиры витамина D3 и монокарбоновых кислот, имеющие два—пять атомов углерода, также хорошо кристаллизуются. Кроме того, они интересны тем, что обладают высокой антирахитической активностью и сохраняют стабильность при длительном хранении. К таким эфирам относятся: пропионат, валерат, и в первую очередь бутират витамина D3. Масляной кислотой этерифицируют или 7-ДГХ и облучают бутират 7-ДГХ УФ-све- том [9261, или фотосмолу [750, 751]; бутират витамина D3 отделяют кристаллизацией из смеси ацетон — метанол и омыляют. Эфиры витамина D3 обычно омыляют спиртовой щелочью при комнатной температуре [99, 152, 751, 750], щелочной А12О3 [362, 151, 300, 7501 или ЫА1Н4 [152].
Выделение в виде аддуктов со стеринами. Кроме аддукта витамина D3 с холестерином [599] из спиртового раствора фотосмолы можно выделить аддукт витамина D3 и 7-ДГХ (42—45% витамина D3) [152, 498, 785, 786, 61], а также тройной аддукт: витамин D3 + холестерин + 7-ДГХ соответственно (45%, 40% и 15%) [149]. Из этих трех аддуктов, по данным автора, наиболее легко выделяется из фотосмолы двойное соединение с 7-ДГХ и тройной аддукт. Получение чистого аддукта с холестерином, который может использоваться как медицинский препарат [2661, представляет наибольшие трудности. Для этого необходимо подобрать условия фотохимической изомеризации 7-ДГХ, обеспечивающие получение максимального
выхода витамина D3 в фотосмоле и минимальное количество побочных продуктов (например, тахистерина), а затем практически полностью отделить кристаллизацией непревращенный 7-ДГХ и люмистерин-3. Такой способ получения аддукта витамина D3 и холестерина, так называемого видехола, был разработан автором совместно с В. П. Вендтом и др. [93]. Витамин D3 более устойчив к кислороду, когда он хранится в виде комплекса с холестерином [128].
Для выделения витамина D3 из его аддуктов используют следующие методы: при обработке аддукта полярным растворителем (например, ацетоном) высаждается практически чистый 7-ДГХ, а оставшаяся смола, обогащенная витамином D3, этерифицируется 3,5-динитробензоатхлоридом; эфир витамина D3 кристаллизуется, омыляется метанольным раствором КОН, метилатом натрия или при пропускании через щелочную А12О3 [152, 151].
Таблица 16. Условия кристаллизации витамина D3
Растворитель
Da: растворитель, г/мл; температура; время
Выход, %
Т. пл., °C
+ см
Литература
Ацетон +10% воды
—15°
[971]
Ацетон
1 : 2,4; —5°; 16 ч
74,0
—
[750]
Ацетон + вода
1 : 1,8: 0,4; —18°; 6 дней
80,0
84—85
482
[152]
Ацетон + вода
1 : 24: 6; 0°; 12 ч
74,5
84—86
—
[362]
Ацетон + вода
—
84,0
83—85
—.
[785]
Ацетон ■— ацетонитрил
1:1: 4; +5°; 48 ч
92,6
—
—
[792]
Бензол — ацетонитрил
1 : 2: 4 или 1:4:8; —15°; 3 ч
70,0
—
483
[792]
Этилформиат
—
—
83—84
—
[616]
Метилформиат
1 ; 10; —20°
90,0
83—84
480
[99]
Более успешно применяется хроматографическое разделение аддуктов на различных сорбентах. Аддукт с холестерином хроматографировали на А12Оэ (III степени активности) в бензоле, получали 90% витамина D3 от содержащегося в смоле, далее проводили элюцию смесью 80% бензола + + 20% ацетона. В качестве сорбента применяли также MgO, элюцию осуществляли смесью петролейного эфира (98%) и ацетона (2%) [506]. Аддукт с 7-ДГХ хроматографировали на колонке с А12О3 (III степени активности), элюцию проводили сначала чистым бензолом, затем с добавкой 10% этанола [785]. Тройной аддукт разделяли на А12О3 (III степень активности) в смеси бензол — гексан (1 : 1) [149].
Предложен также способ получения витамина D3, который основан на выделении из фотосмолы, содержащей не менее 30% витамина, аддукта с 7-ДГХ. Далее аддукт этерифицировали хлористым бензоилом и получали смесь бензоатов 7-ДГХ и витамина D3, которую разделяли кристаллизацией. Из гексана выделяли эфир 7-ДГХ, а из остатка при кристаллизации из смеси диоксана и метанола был получен чистый бензоат витамина D3. В результате дополнительной хроматографической очистки эфира и омыления LiAlH4 получен чистый витамин D3 [152].
Кристаллизация смолы витамина D3. После омыления эфиров или хроматографического разделения аддуктов витамин D3 получают в виде бесцветной смолы, содержащей не менее 95—98% витамина D3. Витамин D3 кристаллизуется значительно хуже, чем витамин D2, и только высококачественную смолу витамина D3 удается превратить в кристаллическое вещество с температурой плавления не менее 83—84°. Длительное время единственным растворителем для кристаллизации витамина D3 был только ацетон или водный ацетон. В связи с этим были предложены различные
варианты получения кристаллического витамина D3 из ацетона (табл. 16) [971, 362,750, 152, 785]. Однако кристаллизация из ацетона часто сопровождается образованием геля, который затрудняет выделение кристаллов витамина D3.
В последнее время предложены другие растворители, например смесь бензола или ацетона с ацетонитрилом [792], этилформиат [616], метилфор- миат [99]. Последний обладает целым рядом преимуществ перед другими растворителями: имеет низкую температуру кипения (32°), что способствует быстрому удалению растворителя; витамин D3 легко растворяется в метилформиате при 20е и почти нерастворим при —10°, благодаря чему его потери минимальны; практически всегда образуются кристаллы. Однако при кристаллизации из ацетона с водой удается получить витамин D3 с более высокой температурой плавления.
ПОЛУЧЕНИЕ ПРОВИТАМИНОВ D
ПОЛУЧЕНИЕ ЭРГОСТЕРИНА
Промышленный способ получения эргостерина из дрожжей описан в книге Л. О. Шнайдмана [74].
ПОЛУЧЕНИЕ 7-ДЕГИДРОХОЛЕСТЕРИНА
Промышленный способ получения 7-дегидрохолестер ина включает следующие стадии:
получение бензоата холестерина (бензоилирование);
получение бензоата 7-бромхолестерина (бромирование);
получение бензоата 7-дегидрохолестерина (дегидробромирование);
получение 7-ДГХ (омыление).
бензоат 7-дегидро-7-дегидрохолестерин
холестеринаМ.в. 384,64
М.в. 488,76
I стадия. Получение бензоата холестерина. Из эфиров холестерина наиболее подходящим для промышленного производства является бензоат. Его производство экономически более выгодно, чем других эфиров, а по сравнению с доступным ацетатом выход бензоата 7-дегидрохолестерина на стадии дегидробромирования гораздо выше. Так, при дегидробромировании бензоата 7-бромхолестерина ешм-коллидином выход бензоата 7-дегидрохолестерина составляет 41,5%, а в случае ацетата — 24,7—31% [144, 146], при дегидробромировании NaHCO3 -}- а-пиколин автор и Л. К. Курченко
получали бензоат 7-дегидрохолестерина с выходом 47%, а ацетат — с выходом 28%.
Бензоат холестерина получают при взаимодействии холестерина и хлористого бензоила в растворе пиридина. Реакция идет с максимальным выходом при бензоилировании 20—25%-ных растворов холестерина в пиридине при молярном соотношении холестерина и хлористого бензоила 1 : 3,15.
Выход бензоата холестерина составляет 98% при содержании 99%. При получении бензоата холестерина необходимо соблюдать следующие условия.
Холестерин, пиридин и аппаратура должны быть сухими (вода мешает проведению реакции).
Реакция бензоилирования экзотермическая; нельзя допускать повышения температуры больше 50° при прибавлении хлористого бензоила.
Реактор должен быть снабжен термометром, погруженным в реакционную массу.
4. Необходимо проводить тщательную отмывку продукта реакции от бензойной кислоты и пиридина.
Описание технологического процесса. В сухой чистый реактор бензоилирования на 250 л, снабженный механической мешалкой, обратным холодильником, рубашкой для охлаждения и термометром, загружают 80 л сухого пиридина, 20 кг холестерина и перемешивают при комнатной температуре до полного растворения холестерина. Затем приливают 20 л (24,4 кг) хлористого бензоила порциями по 2,5—3 л в течение 20—25 мин. По мере прибавления хлористого бензоила температура реакционной смеси повышается, поэтому в рубашку аппарата подают воду для охлаждения; реакцию проводят при температуре 40—45°. После прибавления хлористого бензоила реакционную массу перемешивают в течение 3 ч, охлаждают до температуры 18—25° и оставляют на 12—14 ч для кристаллизации бензоата холестерина. Затем в реактор заливают около 150 л водопроводной воды для полного выделения бензоата холестерина из раствора и разложения избытка хлористого бензоила. Реакционную массу сливают на центрифугу, отфильтровывают и промывают горячей (60—70°) водой. Для полного удаления пиридина кристаллы бензоата холестерина промывают на центрифуге 2%-ным раствором соляной кислоты, полученной из 50—60 л воды и 3 л концентрированной соляной кислоты, и горячей водой до нейтральной реакции (по индикатору). Для полного удаления бензойной кислоты продукт промывают 8—10%-ным раствором двууглекислого натрия и горячей водой до нейтральной реакции; затем бензоат холестерина промывают 30 л ацетона. Сушат продукт при температуре 30— 40° в течение 24 ч. Получают 24,8 кг бензоата холестерина с содержанием основного вещества не менее 99%. Выход по холестерину составляет 98%.
Методы аналитического контроля. Экспресс-метод определения конца реакции бензоилирования холестерина. В основу положено качественное определение продуктов реакции бензоилирования путем хроматографического разделения на тонкослойных пластинках «Силуфол UV 254» в смеси растворителей бензол — ацетон (93 : 7). Конец реакции бензоилирования определяют по исчезновению пятна холестерина с Rf 0,2 и наличию одного пятна бензоата холестерина.
Около 10 мг бензоата холестерина растворяют в 2 мл бензола и наносят 0,02 мл в точку на пластинку «Силуфол UV 254» размером 70 X 40 мм. Пластинку помещают в хроматографическую камеру со смесью растворителей бензол — ацетон (93 : 7) или с чистым бензолом. После хроматографирования и высушивания пластинку проявляют раствором хлорного
железа в серной кислоте. На пластинке должно проявиться розовое пятно бензоата холестерина с Rf 0,8.
Данный метод может быть использован для определения качества бензоата холестерина: наличие на хроматограмме только одного пятна бензоата холестерина свидетельствует о высокой чистоте продукта (~99%). При появлении розового пятна холестерина с Rf 0,2 проводят количественное определение бензоата холестерина. Продолжительность хроматографического анализа 7—10 мин.
Количественное определение содержания бензоата холестерина. Метод основан на свойстве бензоата холестерина количественно омыляться избытком спиртовой щелочи. Омыление бензоата холестерина проводят титрованным раствором едкого кали (0,1 н.) в этиловом спирте. Для приготовления титрованного раствора щелочи растворяют 0,56 г КОН в 100 мл этилового спирта, раствор фильтруют в коническую колбу, отбирают пипеткой 20 мл полученного раствора и титруют 0,1 н. раствором соляной кислоты. Отмечают объем кислоты Кь пошедший на титрование спиртовой щелочи.
Навеску испытуемого бензоата холестерина (0,5 г), взятую на аналитических весах, помещают в круглодонную колбу, приливают 20 мл титрованного раствора спиртовой щелочи; после этого колбу присоединяют к обратному холодильнику и содержимое кипятят на водяной бане в течение 1—1,5 ч. Затем колбу охлаждают, отсоединяют от обратного холодильника и избыток спиртовой щелочи оттитровывают 0,1 н. раствором соляной кислоты в присутствии фенолфталеина.
Процентное содержание бензоата холестерина рассчитывают по формуле
Y (^1 — W • 490,78
А 10а *
где X — содержание бензоата холестерина в исследуемом образце, %; Ух— объем соляной кислоты нормальности Мъ пошедшей на титрование 20 мл щелочи (контрольный опыт); У2 — объем соляной кислоты, пошедшей на титрование избытка щелочи, взятой для омыления; Мг— нормальность титрованного раствора соляной кислоты; а — навеска, г. Формула для расчета процентного содержания бензоата холестерина применима только при отсутствии бензойной кислоты.
Количественное определение примеси бензойной кислоты в бензосипе холестерина. Навеску бензоата холестерина 3 г, взятую на аналитических весах, помещают в колбу на 250 мл и заливают 100 мл кипящей дистиллированной воды. Затем жидкость хорошо перемешивают и приливают 10— 15 мл этанола, переносят на складчатый фильтр и отфильтровывают. Осадок промывают на фильтре пять-шесть раз кипящей дистиллированной водой так, чтобы общий объем составлял 170—200 мл.
Прибавляют несколько капель спиртового раствора фенолфталеина (0,1%-ный раствор) и титруют 0,1 н. раствором щелочи (NaOH) до появления розовой окраски. Расчет проводят по следующей формуле:
„ = VN • 122~ 10а ’
где X — процентное содержание бензойной кислоты; V — объем щелочи, пошедшей на титрование бензойной кислоты; N — нормальность щелочи; а—навеска, г. Максимально допустимое количество бензойной кислоты 0,1 %.
Определение конца отмывки бензоата холестерина. Определение конца отмывки технического бензоата холестерина от следов пиридина производится органолептически. Отмытый технический бензоат холестерина не должен иметь запаха пиридина.
II стадия. Получение бензоата 7-бромхолестерина. В лабораторной практике общепринятым является способ получения бензоата 7-бромхолестерина, разработанный Hunziker и Milliner [444]. Бромирование бензоата холестерина проводят 1,3-дибром-5,5-диметилгидантоином (диброман- тином) в смеси бензина (т. кип. 70—110°) и петролейного эфира (т. кип. 50—70°) при соотношении растворителей 1:1, температура кипения смеси 63°. Реакцию ведут 10 мин. Поданным автора, выход бензоата 7-бромхолестерина в этом случае достигает 90%. В производственных условиях проводить реакцию довольно сложно в связи с огнеопасностью и взрывоопасностью применяемых растворителей. Поэтому автор с сотр. [82] исследовал процесс бромирования бензоата холестерина в различных растворителях и установил, что при проведении реакции в кипящем четыреххлористом углероде при температуре обогрева реактора 100—105° в присутствии радикальных инициаторов — перекиси бензоила или, лучше, динитрила азоизомасляной кислоты — выход основного продукта реакции в лабораторных условиях достигает 94 %. В настоящее время этот метод является промышленным способом получения бензоата 7-бромхолестерина [24]. '
Оптимальными являются следующие соотношения реагентов: бензоат холестерина — дибромантин 2:1,1 (молярное); динитрил азоизомасляной кислоты — дибромантин 1 : 35 (молярное); на 1 весовую часть бензоата холестерина — 6,5 объемных частей четыреххлористого углерода.
В производственных условиях обычно не проводят выделения кристаллического бензоата 7-бромхолестерина из реакционного раствора. При бромировании в четыреххлористом углероде после упаривания растворителя получают смолообразный остаток, из которого кристаллический продукт выделяют ацетоном [528], однако это связано с потерей 25—30% основного вещества [80, 88]. Поэтому на стадии бромирования получают раствор бензоата 7-бромхолестерина в четыреххлористом углероде, который сразу поступает на следующую стадию дегидробромирования. При правильном проведении процесса выход может достигать 87%. При получении бензоата 7-бромхолестерина необходимо соблюдать следующие условия.
Бензоат холестерина, четыреххлористый углерод и аппаратура должны быть совершенно сухими; бензоат 7-бромхолестерина чрезвычайно легко гидролизуется до 7-оксипроизводного. .
Температура обогрева реактора должна быть 100—105°, при этой температуре происходит разложение динитрила азоизомасляной кислоты и инициирование реакции.
Дибромантин, применяемый для реакции, должен представлять собой кристаллический порошок оранжевого цвета, что свидетельствует о присутствии абсорбированного брома, необходимого для инициирования процесса бромирования. Дибромантин следует измельчить (до 200 меш) непосредственно перед реакцией. Это необходимо потому, что реакция аллильного бромирования протекает на поверхности кристаллов дибромантина и чем поверхность больше, тем выше скорость превращения.
Оптимальное время слива суспензии дибромантина и инициатора в четыреххлористом углероде в реактор составляет 30 сек.
Реакция бромирования протекает очень бурно. Реактор бромирования должен быть снабжен эффективным холодильником для быстрого охлаждения паров и слива растворителя в реактор.
Реакционный раствор перед фильтрацией осадка диметилгидантои- на необходимо быстро охладить до температуры не выше 20°. Фильтрация при более высокой температуре приводит к неполному отделению
5,5-диметилгидантоина, который отрицательно влияет на выход бензоата 7- дегидрохолестерина.
Осадок 5,5-диметилгидантоина на нутч-фильтре необходимо промыть небольшим количеством четыреххлористого углерода, иначе возможны довольно значительные потери основного продукта реакции.
Раствор после бромирования должен быстро поступать на стадию дегидробромирования.
Описание технологического процесса. В стеклянный реактор емкостью 100 л, снабженный обогревом (внешняя рубашка или внутренняя спираль), механической мешалкой, эффективным обратным холодильником и отверстием для слива суспензии дибромантина загружают раствор 5 кг бензоата холестерина в 28 л сухого четыреххлористого углерода (раствор готовят в реакторе для растворения и через нутч-фильтр подают в реактор бромирования). Включают обогрев реактора (масло или пар с температурой 100—105°) и смесь нагревают до кипения. Одновременно готовят суспензию из 1,6 кг дибромантина, 0,03 кг динитрила азоизомасляной кислоты и 4 л четыреххлористого углерода и быстро (в течение 20 сек) приливают к кипящему раствору бензоата холестерина. Начинается бурная реакция бромирования, которая заканчивается через 1,5—2 мин.
После окончания реакции реакционную массу сливают в реактор с охлаждением, быстро охлаждают до температуры не выше 20° и фильтруют на нутч-фильтре в сборник броммассы с градуировкой объема. Реактор для бромирования и осадок 5,5-диметилгидантоина промывают 3 л четыреххлористого углерода, который присоединяют к основному фильтрату. Последовательно проводят две операции бромирования. Измеряют общий объем полученного раствора и отбирают пробу для аргентометрического анализа бензоата 7-бромхолестерина. Получают 75 л светло-оранжевого раствора, содержащего 9,8—10 кг 100%-ного бензоата 7-бромхолестерина. Выход по исходному бензоату холестерина составляет 85—87%.
Метод количественного определения бензоата 7-бромхолестерина. Метод основан на свойстве бензоата 7-бромхолестерина количественно реагировать с раствором азотнокислого серебра. Реакцию проводят в растворе диоксана. Возможные побочные продукты реакции — бензоаты 5а,бр-дибромхолестерина, 4-бром-7-кетохоле- стерина и другие — определению не мешают.'
К 2 мл раствора после бромирования приливают 30 мл сухого перегнанного диоксана и 10 мл титрованного 0,05 н. раствора азотнокислого серебра. Через 2—3 мин после выделения бромистого серебра к раствору добавляют 5 мл 6 н. азотной кислоты и 1 мл насыщенного раствора железоаммонийных квасцов. Избыток азотнокислого серебра титруют 0,05 н. раствором роданистого аммония.
Содержание бензоата 7-бромхолестерина (мг) в 1 мл раствора рассчитывают по формуле
v(IV^ —1V2V2) • 569,7
А —2,
где Мг— нормальность раствора азотнокислого серебра; М2— нормальность раствора роданистого аммония; У2—объем раствора роданистого аммония; Уг—объем раствора азотнокислого серебра.
Выход бензоата 7-бромхолестерина (Q) в процентах по бензоату холестерина рассчитывают по формуле
п XV . 100
у *
где V — объем отбромированного раствора, л; X — содержание бензоата 7-бромхолестерина, мг/мл; У — загрузка бензоата холестерина, кг.
111 стадия. Получение бензоата 7-дегидрохолестерина. Наиболее высокий выход бензоата 7-дегидрохолестерина (7-ДГХБ) получен в случаях применения в качестве дегидробромирующих агентов различных фосфорорганических соединений (триалкилфосфиты, диоксафосфоланы) [444, 923, 409, 362, 363]. Выход бензоата 7-ДГХ по бензоату холестерина, указанный в этих патентах, составляет 52—58%. Однако применение фосфорорганических соединений в промышленном производстве витамина D3 осложняется их чрезвычайной токсичностью и высокой стоимостью. Кроме того, при проверке многих патентных данных, проведенной Tulecki и Skwarski [885], а также автором, не подтвердился столь высокий выход.
Разработанный автором с сотр. [82] способ получения 7-ДГХБ основан на использовании дешевых и доступных дегидробромирующих агентов — двууглекислого натрия и а-пиколина, применяемого в каталитических количествах. В лабораторных условиях выход 7-ДГХБ по бензоату холестерина достигает 50% при чистоте продукта 88—90%. Этот способ получения 7-ДГХБ легко осуществим в производственных условиях и в настоящее время используется при промышленном получении витамина D3 [86].
Детальное исследование реакции дегидробромирования бензоата 7- бромхолестерина двууглекислым натрием и а-пиколином, проведенное автором и Л. К. Курченко [85, 90], позволило определить оптимальные условия этого сложного процесса. В производственных условиях используют следующие соотношения бензоата 7-бромхолестерина, двууглекислого натрия и а-пиколина: 1:5: 0,2—0,7 (молярное). На одну весовую часть бензоата 7-бромхолестерина берут 4 объемные части ксилола. Выход 7- ДГХБ в производственных условиях составляет 50—55% по бензоату 7-бромхолестерина при содержании основного продукта 80—85%. Выход по бензоату холестерина 43%.
При проведении процесса дегидробромирования бензоата 7-бромхолестерина необходимо следующее.
Двууглекислый натрий, ксилол и аппаратура должны быть совершенно сухими. Вода резко понижает выход и качество бензоата 7-ДГХ. Так, при добавлении 1 моля воды (0,3 л) к реакционной смеси (10 кг бензоата 7-бромхолестерина в 70 л четыреххлористого углерода,’10 кг NaHCO3 и 40 л ксилола) выход и качество продукта снижаются на 15%.
Двууглекислый натрий должен быть мелкоизмельченным, реакция проходит в гетерогенных условиях.
а-Пиколин необходимо перегонять перед использованием, отбирая фракцию по температуре кипения (129,4°) и показателю преломления (1,5010), строго соответствующим именно а-пиколину. Необходимо иметь в виду, что при использовании (3- и у-пиколина, близких по температуре кипения, выход 7-ДГХБ снижается почти в два раза. В отсутствие а-пиколина основным продуктом реакции является бензоат холеста-8,14-диен-ЗР-ола.
В качестве растворителя используются о-, м-, n-ксилол (лучше о- ксилол, с более высокой температурой кипения).
Реактор дегидробромирования необходимо оборудовать пропеллерной мешалкой со скоростью вращения не менее 120 об/мин для интенсивного перемешивания гетерогенной реакционной массы. Мешалка должна доходить до дна реактора, так как к концу процесса в реакторе емкостью 250 л остается не более 20 л реакционной смеси.
Реактор должен быть снабжен двумя термопарами — внутри аппарата и в рубашке. Термопара, находящаяся внутри реактора, должна быть
опущена почти до дна, чтобы регистрировать температуру конца реакции, когда в реакторе остается не более 20 л реакционной смеси.
Следует установить градуированный сборник отгона четыреххлористого углерода, воды и ксилола. Количество отгона — один из показателей для определения конца реакции.
Оптимальная температура проведения процесса—160° в рубашке аппарата. По данным автора [90] и многих исследователей [874, 667], при этой температуре выход 5,7-диена максимальный, при более низкой температуре значительно удлиняется время проведения процесса и образуется больше 4,6-диена, при более высокой температуре — значительные количества холеста-2,4,6-триена.
Необходимо проводить аргентометрическое определение бензоата 7-бромхолестерина в ксилольном фильтрате после реакции. Он должен полностью отсутствовать. При неправильном проведении процесса может оставаться значительное количество (около 2 кг из 10 кг) исходного продукта.
Необходимо точно измерять объем ксилольного фильтрата после реакции. После промывки он должен составлять не более 25 л. В этом случае при добавлении двукратного количества ацетона происходит почти полное выделение бензоата 7-ДГХ (потери составляют не более 3%) при температуре кристаллизации 0°, и кристаллический продукт имеет наиболее высокое процентное содержание основного вещества.
Реактор для кристаллизации должен иметь термометр. Температура кристаллизации 0 ± 2°.
Обязательна промывка кристаллов технического бензоата 7-ДГХ на нутч-фильтре холодным ацетоном. Это ведет к повышению процентного содержания основного вещества на 8—10%.
Описание технологического процесса. Эмалированный реактор для дегидробромирования на 250 л снабжен рубашкой для обогрева реактора маслом или паром, механической мешалкой, нисходящим холодильником, термопарами или термометрами для измерения температуры в рубашке и в реакционной массе.
В сухой реактор загружают 10 кг мелкоизмельченного сухого двууглекислого натрия, 40 л о- илил-ксилола и 0,09—0,15 л а-пиколина. Включают обогрев реактора и механическую мешалку. Когда температура реакционной массы в реакторе достигает 108—110°, приливают 75 л раствора бензоата 7-бромхолестерина в четыреххлористом углероде. При этом температура реакционной массы понижается до 85—90°. В рубашке аппарата в течение реакции поддерживают температуру около 160°. В процессе реакции отгоняют четыреххлористый углерод, азеотропную смесь четыреххлористого углерода, реакционной воды и ксилола и, наконец, часть ксилола. К концу реакции должно быть отогнано около 90—95 л смеси растворителей. Реакцию проводят до тех пор, пока температура реакционной массы не поднимется до температуры кипения ксилола (~139—140°). Время реакции при обогреве паром 60—75 мин, при обогреве маслом—100—130мин. В процессе реакции отбирают пробу для определения конца реакции с помощью хроматографического анализа. После окончания реакции дегидробромирования реакционную смесь при перемешивании выгружают на нутч-фильтр и фильтруют. Реактор и соли на фильтре промывают 5—7 л горячего ксилола, который присоединяют к фильтрату. Измеряют объем полученного ксилольного раствора. Общее количество фильтрата должно составлять около 25 л. Отбирают пробу для аргентометрического определения остатка бензоата 7-бромхолестерина.
Ксилольный фильтрат сливают в кристаллизатор, в котором находится 50 л ацетона при комнатной температуре. При перемешивании раствора при той же температуре начинают выпадать кристаллы бензоата 7-дегидро- холестерина; для полного высаждения продукта смесь охлаждают до 0° и оставляют на 4—12 ч. Затем кристаллы отфильтровывают, промывают дважды 3—5 л холодного ацетона (—15°), сушат при температуре 30—35° в ва- куум-сушильном аппарате. Получают 5,5—5,9 кг белого или светло-желтого кристаллического продукта, содержащего 80—85% бензоата 7-дегид- рохолестерина.
Методы аналитического контроля. Хроматографическое определение продуктов реакции дегидробромирования бензоата 7-бромхолестерина. В основу положен метод качественного определения продуктов реакции дегидробромирования путем хроматографического разделения их на тонкослойных пластинках с силикагелем «Силуфол UV 254».
Смесь продуктов дегидробромирования — 7-ДГХБ, бензоат холеста- 4,6-диена, холеста-2,4,6-триен и бензоат 7-бромхолестерина разделяют в смеси растворителей петролейный эфир — ацетон (98 : 2). Конец реакции определяют по исчезновению пятна бензоата 7-бромхолестерина.
0,02 мл ксилольного раствора приливают к 1 мл бензола. Полученный раствор тонким стеклянным капилляром (диаметр 0,5 мл, высота 4 см) наносят на хроматографическую пластинку в точку на расстоянии 1см от края пластинки. Пластинку помещают в бюкс или хроматографическую камеру и проявляют хроматограмму в системе петролейный эфир — ацетон (98 : 2). Когда фронт растворителя поднимется к верхнему краю, пластинку вынимают из камеры, сушат и проявляют концентрированной серной кислотой. Пятна бензоатов 7-дегидрохолестерина и холеста-4,6-диена располагаются в центре, холеста-2,4,6-триена — у фронта пластинки, а бензоата 7-бромхолестерина и продуктов его гидролиза — у старта.
Конец реакции дегидробромирования определяется по отсутствию пятна бензоата 7-бромхолестерина. Слабоокрашенное пятно на месте бензоата 7-бромхолестерина обусловлено продуктами его гидролиза, пятно холеста-2,4,6-триена должно быть слабым. Продолжительность анализа 5—7 мин.
Количественное определение бензоата 7-бромхолестерина в ксилольно и фильтрате. Метод основан на свойстве бензоата 7-бромхолестерина количественно реагировать с раствором азотнокислого серебра. Продукты реакции дегидробромирования определению не мешают. Реакция дегидробромирования считается оконченной в том случае, если в ксилольном фильтрате бензоат 7-бромхолестерина не обнаружен.
К 0,5 мл ксилольного раствора, полученного после дегидробромирования бензоата 7-бромхолестерина, приливают 30 мл сухого перегнанного диоксана и 5 мл титрованного 0,05 н. раствора азотнокислого серебра. После выделения осадка бромистого серебра к раствору добавляют 2,5 мл 6 н. азотной кислоты и 0,5 мл насыщенного раствора железоаммонийных квасцов. Избыток азотнокислого серебра титруют 0,05 н. раствором роданистого аммония.
Количество бензоата 7-бромхолестерина в ксилольном фильтрате определяют по формуле
(MV1 —AW • 569,7а
А 0,5 • 1000 *
где X — количество бензоата 7-бромхолестерина, кг; Мг— нормальность раствора азотнокислого серебра; Х^ — нормальность раствора роданистого
аммония; Vj— объем раствора азотнокислого серебра, мл; У2— объем раствора роданистого аммония, мл; а — количество ксилольного фильтрата, л.
Определение процентного содержания бензоата 7-ДГХ. В основу положен метод спектрофотометрического определения концентрации бензоата 7-ДГХ по величине оптической плотности его раствора при длине волны 282 нм.
Навеску 10 мг исследуемого продукта растворяют в 10 мл дихлорэтана или хлороформа. Затем отбирают 0,25 мл полученного раствора и добавляют 9,75 мл этилового спирта. Для контрольного раствора берут 0,25 мл дихлорэтана или хлороформа и 9,75 мл этилового спирта. После тщательного перемешивания растворы подвергают спектрофотометрлрова- нию. Измерение оптической плотности раствора исследуемого продукта относительно контрольного раствора проводят в ультрафиолетовой области спектра 230—300 нм.
Процентное содержание (X) бензоата 7-ДГХ в исследуемом продукте вычисляют по формуле
X = 144,3 • Е1№, где 144,3 — расчетный коэффициент; Е^— оптическая плотность исследуемого раствора при Л 282 нм.
IV стадия. Получение 7-дегидрохолестерина. 7-ДГХ представляет собой бесцветные длинные иглы, он чрезвычайно легко окисляется, при хранении даже при 0° через месяц бесцветное вещество становится желтым. И чем чище исходный продукт, тем он менее стабилен. Обычно 7-ДГХ хранят в виде метанольной пасты.
Омыление высококачественного 7-ДГХБ связано со значительными потерями образующегося 7-ДГХ за счет его окисления. Поэтому обычно не выделяют чистый 7-ДГХБ, а подвергают омылению спиртовой щелочью техническую смесь продуктов реакции дегидробромирования [7901.
Технический 7-ДГХБ омыляют 5—7%-ным раствором едкого кали в этиловом спирте при кипении в течение 30—45 мин в токе азота. 7-ДГХБ и едкое кали берут в молярном соотношении 1 : 4. Выход технического 7-ДГХ непосредственно после реакции омыления обычно даже в производственных условиях составляет 95—98%, а содержание его, как правило, на 3—5% ниже, чем исходного бензоата..
На стадии фотохимической изомеризации должен использоваться 7-дегидрохолестерин не менее 85—90 %-ной чистоты, поэтому технический 7-ДГХ необходимо перекристаллизовать. Однако ни один из известных в настоящее время способов перекристаллизации 7-ДГХ не может удовлетворить производственным требованиям, так как он или не обеспечивает получение продукта необходимой чистоты, или связан с большими потерями, что ведет к снижению общего выхода на стадии омыления.
В табл. 17 указаны применяемые в настоящее время растворители для кристаллизации технического 7-ДГХ, условия проведения процесса, а также выход и качество полученного продукта.
При получении 7-ДГХ необходимо соблюдать следующие условия: процесс омыления проводить при температуре в рубашке аппарата не выше 95°;
технический 7-ДГХ на центрифуге промывать холодным ацетоном и перед кристаллизацией сушить в вакуум-сушильном аппарате;
фильтрацию технического 7-ДГХ и полученного после кристаллизации проводить на центрифуге (а не на нутч-фильтре) в минимально короткий срок, чтобы исключить потери продукта за счет окисления.
Описание технологического процесса. В реактор для омыления емкостью 200 л, снабженный рубашкой для обогрева, механической мешалкой и обратным холодильником, загружают раствор 7,4 кг КОН в 100 л этилового спирта (полученный в реакторе растворения и профильтрованный через нутч-фильтр). Включают механическую мешалку и обогрев. К слабо кипящему раствору добавляют 20 кг технического (70—80%-ного) 7-ДГХБ . Процесс омыления ведут при перемешивании в течение 30—45 мин под током азота. Температура теплоносителя в рубашке аппарата не должна превышать 95°.
По окончании омыления в реактор добавляют 160 л 2%-ног'о раствора соляной кислоты, приготовленной в специальном аппарате из 11,1 л 36%-ной соляной кислоты и 150 л воды. Содержимое реактора хорошо
Таблица 17. Кристаллизация технического 7-ДГХ из различных растворителей
Растворитель
Содержание технического 7-ДГХ. %
7-ДГХ: растворитель, вес. ед/об. ед; температура
Получено 7-ДГХ
Содержание, %
Выход, %
Толуол ■—метанол (1 : 1,4)
74,0
' 1:5 (—12°)
92,0
87,0
Хлороформ — ацетон (1:1)
71,0
1 :5 (—15°)
84,5
86,0
Ксилол — ацетон (1 : 10)
75,0
1 : 10 (0°)
88,0
80,0
Ацетон (+1 % метанола)
73,3
1 : 15 (5°)
93,0
79,6
перемешивают, охлаждают до температуры 25—30°, сливают на центрифугу и фильтруют. Реактор два раза промывают 16—20 л воды, которую сливают на центрифугу. Массу на центрифуге промывают холодной водой до нейтральной реакции по универсальному индикатору, а затем 20 л холодного ацетона. Промытый и отфильтрованный продукт сушат в вакуум-су- шильном шкафу в течение 3—4 ч при температуре не выше 35°. Получают технический продукт, содержащий 65—75 % 7-ДГХ. Выход провитамина составляет 92—94%. После перекристаллизации из смеси толуола с метанолом или ацетона получают 7-ДГХ с содержанием 80—85%. Общий выход на стадии получения 7-ДГХ по 7-ДГХБ равен 85%.
Недавно автором было установлено, что высококачественный 7-ДГХ можно получить с высоким выходом при омылении технического бензоата 7-ДГХ раствором щелочи в смеси ароматического углеводорода (бензола, толуола, ксилола) и спирта (метанола, этанола). При проведении омыления в таких условиях реакция протекает в растворе, а не в гетерогенной системе. Лучшие результаты получены при использовании смеси толуол— метанол (1 : 1,6). Эта смесь растворителей является оптимальной для перекристаллизации технического 7-ДГХ, поэтому кристаллизацию провитамина целесообразно проводить непосредственно из реакционного раствора. В этом случае исключается выделение технического 7-ДГХ, упрощается технологический цикл, снижаются потери, повышается выход и качество 7-ДГХ. Даже при омылении 7-ДГХБ с низким содержанием основного вещества (7-ДГХ) получается с выходом 92—94% при 87— 92%-ном содержании провитамина. Сравнительные данные о выходе и
качестве 7-ДГХ, полученного из бензоата 7-ДГХ различного качества, приведены в табл. 18.
Содержание 7-ДГХБ, %
7-ДГХ
Выход, %
(содержание, %
65
91
87
72
92
90■
82
94
92
88
94
92
при температуре кипения смесипри температуре кипения смесиТаблица 18. Выход и качество 7-ДГХ, полученного из технического 7-ДГХБТаблица 18. Выход и качество 7-ДГХ, полученного из технического 7-ДГХБОписание технологического процесса. В реактор для омыления емкостью 200 л, снабженный рубашкой для обогрева, обратным холодильником, механической мешалкой и термопарой загружают 95 л смеси толуола (36,2 л) и метанола (58,8 л) и 2,8—4 кг едкого кали. Включают мешалку и обогрев и после полного растворения щелочи добавляют 20 кг 7-ДГХБ. Процесс омыления проводят в токе инертного газа и не выше 90° в рубашке аппарата в течение 20—30 мин. После окончания реакции горячую реакционную смесь сливают в кристаллизатор. Кристаллизацию ведут при комнатной температуре в течение 2 ч, а затем при —12° -.15° в течение
при температуре кипения смеси
при температуре кипения смеси
Таблица 18. Выход и качество 7-ДГХ, полученного из технического 7-ДГХБ
Таблица 18. Выход и качество 7-ДГХ, полученного из технического 7-ДГХБ
8—24 ч. Кристаллический 7-ДГХ фильтруют, на центрифуге промывают 10 л холодного метанола, хорошо отсасывают, затем промывают холодной водой до нейтральной реакции и снова метанолом (8— 10 л). Сушат 7-ДГХ в вакуум-сушильном шкафу при 40°. Получают 7-ДГХ в виде
белого кристаллического вещества. Выход продукта составляет 91—94% при содержании основного вещества в полученном продукте 87—92%.
Методы аналитического контроля. Экспресс-метод определения конца реакции омыления 7-ДГХБ. В основу положен метод качественного определения продуктов реакции омыления путем хроматографического разделения на тонкослойных пластинках с силикагелем «Си- луфол UV 254». Смесь продуктов 7-ДГХБ и 7-ДГХ разделяют в смеси растворителей гептан — этилацетат (80 : 20) или петролейный эфир — ацетон (98 : 2). Конец реакции определяется по исчезновению пятна 7-ДГХБ.
Реакционную смесь (около 0,1 мл) отбирают пипеткой на 1 мл с отрезанным концом (поскольку реакционная масса застывает в кончике пипетки), вносят в пробирку с 1 мл бензола и хорошо взбалтывают. Полученный раствор наносят тонким стеклянным капилляром на пластинку «Силу- фол UV 254» (5 X 7,5 см) в виде пятна диаметром 0,5 см на расстоянии 1 см ■от края пластинки. Для контроля в две другие точки можно нанести 7-ДГХБ и 7-ДГХ. Пластинку хроматографируют в одной из указанных выше систем и проявляют концентрированной серной кислотой.
Пятно 7-ДГХБ располагается в центре пластинки (Rf 0,5). Пятно 7-ДГХ находится над стартовой точкой. Конец реакции омыления определяется по отсутствию пятна 7-ДГХБ. Продолжительность анализа 7 мин.
Определение процентного содержания 7-ДГХ. В основу положен метод спектрофотометрического определения концентрации 7-ДГХ по оптической плотности его раствора при длине волны 282 нм.
Навеску 10 мг исследуемого продукта растворяют в 10 мл этилового спирта при нагревании, затем к 0,25 мл полученного раствора добавляют 9,75 мл этилового спирта. После тщательного перемешивания этот раствор подвергают спектрофотометрированию.
Оптическую плотность измеряют при X 282 нм. Контроль — этиловый спирт. Результаты анализа вычисляют по формуле X = 129,3 • Е282» ^№ X — процентное содержание 7-дегидрохолестерина в исследуемом продукте; £282 — оптическая плотность исследуемого раствора при X 282 нм.
глава х Физико-химические константы витаминов D и родственных соединений
ВИТАМИНЫ D
СН3СН3СН3СН3СН2СН2н3С.СНзн3С.СНзC2SH44O М.в. 396,66 С 84, 79%Н 11, 18%C2SH44O М.в. 396,66 С 84, 79%Н 11, 18%[«1546,1 + 171° (ацетон), СНз[«1546,1 + 171° (ацетон), СНзВитамин Dx. Получен в 1931 г. Windaus и др. [954] и представляет собой молекулярный комплекс (1 : 1) витамина D2 и люмистери-
СН3
СН3
СН3
СН3
СН2
СН2
н3С.
СНз
н3С.
СНз
C2SH44O М.в. 396,66 С 84, 79%
Н 11, 18%
C2SH44O М.в. 396,66 С 84, 79%
Н 11, 18%
[«1546,1 + 171° (ацетон), СНз
[«1546,1 + 171° (ацетон), СНз
на-2. Т. пл.на-2. Т. пл.124—125° (ацетон), [а]Ь° + 140,5°,
на-2. Т. пл.
на-2. Т. пл.
lain +127° (спирт).
Витамин D2 (эргокальциферол). Получен в 1931 г. Windaus и др. [954]. Бесцветные призмы из ацетона или иглы из метанола, т. пл. 114,5—117° 1118], 116—117° [916, 441], 121° [708] (в капилляре, запаянном в вакууме).
[а]д lain lain[а]д lain lainУдельное вращение:
[а]д lain lain
[а]д lain lain
+ 106,25°, [al546.i +124° (спирт) [957]; +85°, [а]524°6,1 +98,6° (ацетон) [954, 957],
+91,2°, [а]мб,1+105,5° (эфир), но-''
lain +52,25°, [а$6.1 +61,75° (хлороформ), [а® +87,5°, [а®б,1 +102,12° (бензол) [123].
ИК-спектр * витамина D2.
ЮОХ
50V
300
та
Масс-спектр витамина D2 [842].
* ИК-спектры сняты в таблетке с КВг.
400
УФ-спектр (спирт): Хмакс 265 нм, е 19 500—19 7001441], 19 400 (ЕЙ 490) 1708], 18 820 (ЕЙ 475) [834], 18 300 (ЕЙ 460) [68]. Данные ЯМР-спектра приведены в работе [246].
Эфиры:
ацетат — т. пл. 86° (ацетон — метанол), [а]д +38° (с 1,0; ацетон) [7081; бензоат — т. пл. 92° (ацетон — метанол), [а]о 4-100° (ацетон) [7081; 3,5-динитробензрат — т. пл. 148—149° [957], 158—159° [898] (ацетон, хлороформ — спирт); [а]д 4-55° (бензол), [а]д 4-79,5° (ацетон) [957], [а]д 4-88° (хлороформ) [8981;
3,5-динитро-4-метилбензоат — т. пл. 113—114° (светло-желтые иглы, этилацетат); [а]д 4-91° (ацетон) [442].
З-нитро-4-метилбензоат — т. пл. 119—120° (гексан), [а]д 4-106,8° (хлороформ) [442];
пропионат — т. пл. 77° (ацетон), [а]д 4-37,6° (с 1,0; ацетон) [193, 708];
олеат — кристаллизуется при —20°, [а]д 4-18,7° (хлороформ) [193, 708];
хальмуграт — т. пл. 53°, [а]д 4-52,8° (хлороформ) [193, 7081; аллофанат — т. пл. 194—195°, [а!д 4-50,4° (хлороформ) [916].
но’но’Витамин D3 (холекальциферол). Получен в 1936 г. Windaus с сотр. [963] в виде масла; кристаллический продукт — в 1937 г. Schenk [798]. Витамин D3 представляет собой бесцветные иглы (из ацетона или метилформиата) или массивные кристаллы (из бензола — ацетонитрила). Т. пл. 82—84° [798] (в капилляре, запаянном в вакууме), 84—85° [441], 84—86° (водный ацетон) [362]; [а]д 4-105—112° (этанол) [362], [а]д 4-84,8° (ацетон), [а]^ 4-51,9° (хлороформ) [441].
но’
но’
I!14 и11111I—
3600 3400 3200 3000 2800 1800 1600140012001000'.. вОО^сп'1
ИК-спектр витамина D3.
№0%50№0%50255 271255 271525I525I351384| 366 |351384| 366 |200300200300400400
№0%
50
№0%
50
255 271
255 271
525I
525I
351384
| 366 |
351384
| 366 |
200300
200300
400
400
Масс-спектр витамина D3 [674].
УФ-спектр (этанол): Хмакс 265 нм, е 18 900—19 200 (Е^м 492—500) U41], 18 700 (Е'см 485) [311]. Данные ЯМР-спектра представлены в работе [2461.
Эфиры:
ацетат — маслообразное вещество, [а]д +37,4° (ацетон), [а]д +30,6° (хлороформ);
бутират — т. пл. 60—62° (иглы, ацетон) [796], 62,5—64,5° (ацетон — метанол) [751], 62—63°; [а]д +39° (хлороформ) [926]; УФ-спектр: ХМакс 265 нм, е 19 300 (ЕЙ 425) [7961;
анизоат — т. пл. 114° (эфир — метанол, ацетон — метанол), [а]д 4-127°' [9721;
пропионат — т. пл. 36—37° (иглы, ацетон), [а]д 4-30,4° (хлороформ) 1926];
изовалерат — т. пл. 66—68° (иглы, ацетон) [926];
бензоат — т. пл. ПО—111° (диоксан — метанол, этилацетат), [а]д 4-105,2° (хлороформ); УФ-спектр: Хмакс 222; 227,5; 265 нм; е 24 400, 24000, 19 700 [1521;"
л-нитробензоат — т. пл. 127° (эфир — метапол), [ale 4-114° (хлороформ) [972];
динитробензоат — т. пл. 142° (эфир) [897], 132° (бензол — метанол) [441]; [а]д 4-62° (бензол), [а]л 4-97° (хлороформ) [897], [а]д 4-96,3° (ацетон) [441];
динитро-4-метилбензоат — т. пл. 128—129° (светло-желтые иглы, спирт) [442], [а]д 4-106,6° (хлороформ), [а1д 4-101,2° (ацетон) [441].
Холекальциферол-холестерин. Молекулярное соединение (1 : 1) получено Linsert в 1941 г. [599]. Т. пл. 118—119° (ацетон) [599], 119—120° [441]; [а]л 4-26,4° (ацетон); УФ-спектр: Хмакс 265 нм, 8 9450—9600 [441].
Витамин D4 (дигидроэргокальциферол).
Получен в 1937 г. Windaus с сотр. [9661. Т. пл. 107—108° (листочки, ацетон) [966], 96—98° [9761; [а]д 4-149° (этанол), [а]о°4- 4-89,3° (ацетон) [966]; УФ-спектр: ?.макс 265 нм.
л<-Нитробензоат — т. пл. 135—136° (ацетон — метанол) [966], 127—128° [976].
Витамин D6 (ситокальциферол), витамин D6 (стигмакальциферол), витамин D7 (кампекальциферол) в кристаллическом виде не получены [1001, 596, 775].НО‘
МЕТАБОЛИТЫ ВИТАМИНОВ D
25-Оксихолек^льциферол (25-OHD3). Выделен из плазмы крови DeLuca с сотр. в 1968 г. [166, 167]. Синтезирован Blunt и DeLuca в 1969 г. [168, 259, 248]. В кристаллическом виде получен Halkes и van Vliet [367]. Т. пл. 95—100° (гидрат, ацетон) [367], 81—83° (водный метанол) [196, 122].
УФ-спектр: Хмакс 265 нм, 8 18 000 [168], 17 700 [367].
НО'НО'ШгШгИК-спектр (КВг): 3500, 3360, 3080, 3030, 1650, 1635, 1050, 900, 880, 860 и 765 см-1 [3671.ЯМР-спектр (CDC13, 6, м. д.) [196]: 0,55 с (18-СН3, ЗН), 0,9) д (21-СН3, ЗН), 1,0 (26- и 27-СН3, 6Н), 3,93 м (Зр-Н, 1Н), 4,83 и 5,07 (19-Н, 2Н), 6,09 д и 6,23 д (6- и 7-Н, J11 Гц, 2Н).3,5-Динитробензоат — т. пл. 147—148° [3671.ИК-спектр (КВг): 3500, 3360, 3080, 3030, 1650, 1635, 1050, 900, 880, 860 и 765 см-1 [3671.ЯМР-спектр (CDC13, 6, м. д.) [196]: 0,55 с (18-СН3, ЗН), 0,9) д (21-СН3, ЗН), 1,0 (26- и 27-СН3, 6Н), 3,93 м (Зр-Н, 1Н), 4,83 и 5,07 (19-Н, 2Н), 6,09 д и 6,23 д (6- и 7-Н, J11 Гц, 2Н).3,5-Динитробензоат — т. пл. 147—148° [3671.11811815615650 -50 -158158125125255 271255 271100100200200500500400400400400Масс-спектр 25-OHD3[167J.Масс-спектр 25-OHD3[167J.25-Оксиэргокальциферол (25-OHD2). Выделен из плазмы крови DeLuca с’сотр. в 1969 г. [842, 843]. УФ-спектр: Хмакс 265 нм.25-Оксиэргокальциферол (25-OHD2). Выделен из плазмы крови DeLuca с’сотр. в 1969 г. [842, 843]. УФ-спектр: Хмакс 265 нм.:1,61%255 п ,412И^ таЛ ||:1,61%255 п ,412И^ таЛ ||Масс-спектр 25-OHD2 [842].Масс-спектр 25-OHD2 [842].1а,25-Диоксихолекальциферол (la,25-(OH)2D3). Химический синтез1а,25-Диоксихолекальциферол (la,25-(OH)2D3). Химический синтезНО'НО'№№впервые осуществлен DeLuca с сотр. [813] в 1972 г. В кристаллическом виде получен Barton и др. [135] в 1974 г. Т. пл. 84—88° (эфир — гексан), при кристаллизации из хлороформа образует монохлороформсольват; т. пл. 106—112°, [аЬ +29° (эфир).УФ-спектр (эфир): Хмакс 264, е 18 000; Хмин 228,5 нм, е 10 100 [135].ЯМР-спектр (CDC13, 6, м. д.) [1351: 0,57 с (18-CHg, ЗН), 1,13 с (26- и 27-СН3, 6Н), 4,85 и 5,30 м (10-СНа, 2Н) и 6,20 (6- и 7-Н, J 11,5 Гц, 2Н).впервые осуществлен DeLuca с сотр. [813] в 1972 г. В кристаллическом виде получен Barton и др. [135] в 1974 г. Т. пл. 84—88° (эфир — гексан), при кристаллизации из хлороформа образует монохлороформсольват; т. пл. 106—112°, [аЬ +29° (эфир).УФ-спектр (эфир): Хмакс 264, е 18 000; Хмин 228,5 нм, е 10 100 [135].ЯМР-спектр (CDC13, 6, м. д.) [1351: 0,57 с (18-CHg, ЗН), 1,13 с (26- и 27-СН3, 6Н), 4,85 и 5,30 м (10-СНа, 2Н) и 6,20 (6- и 7-Н, J 11,5 Гц, 2Н).15415450- ®50- ®398398152152ЮОЮО200200500500^*•7 ‘1400^*•7 ‘1400
НО'
НО'
Шг
Шг
ИК-спектр (КВг): 3500, 3360, 3080, 3030, 1650, 1635, 1050, 900, 880, 860 и 765 см-1 [3671.
ЯМР-спектр (CDC13, 6, м. д.) [196]: 0,55 с (18-СН3, ЗН), 0,9) д (21-СН3, ЗН), 1,0 (26- и 27-СН3, 6Н), 3,93 м (Зр-Н, 1Н), 4,83 и 5,07 (19-Н, 2Н), 6,09 д и 6,23 д (6- и 7-Н, J11 Гц, 2Н).
3,5-Динитробензоат — т. пл. 147—148° [3671.
ИК-спектр (КВг): 3500, 3360, 3080, 3030, 1650, 1635, 1050, 900, 880, 860 и 765 см-1 [3671.
ЯМР-спектр (CDC13, 6, м. д.) [196]: 0,55 с (18-СН3, ЗН), 0,9) д (21-СН3, ЗН), 1,0 (26- и 27-СН3, 6Н), 3,93 м (Зр-Н, 1Н), 4,83 и 5,07 (19-Н, 2Н), 6,09 д и 6,23 д (6- и 7-Н, J11 Гц, 2Н).
3,5-Динитробензоат — т. пл. 147—148° [3671.
118
118
156
156
50 -
50 -
158
158
125
125
255 271
255 271
100
100
200
200
500
500
400
400
400
400
Масс-спектр 25-OHD3[167J.
Масс-спектр 25-OHD3[167J.
25-Оксиэргокальциферол (25-OHD2). Выделен из плазмы крови DeLuca с’сотр. в 1969 г. [842, 843]. УФ-спектр: Хмакс 265 нм.
25-Оксиэргокальциферол (25-OHD2). Выделен из плазмы крови DeLuca с’сотр. в 1969 г. [842, 843]. УФ-спектр: Хмакс 265 нм.
:1,6
1%
255 п ,412
И^ таЛ ||
:1,6
1%
255 п ,412
И^ таЛ ||
Масс-спектр 25-OHD2 [842].
Масс-спектр 25-OHD2 [842].
1а,25-Диоксихолекальциферол (la,25-(OH)2D3). Химический синтез
1а,25-Диоксихолекальциферол (la,25-(OH)2D3). Химический синтез
НО'
НО'
№
№
впервые осуществлен DeLuca с сотр. [813] в 1972 г. В кристаллическом виде получен Barton и др. [135] в 1974 г. Т. пл. 84—88° (эфир — гексан), при кристаллизации из хлороформа образует монохлороформсольват; т. пл. 106—112°, [аЬ +29° (эфир).
УФ-спектр (эфир): Хмакс 264, е 18 000; Хмин 228,5 нм, е 10 100 [135].
ЯМР-спектр (CDC13, 6, м. д.) [1351: 0,57 с (18-CHg, ЗН), 1,13 с (26- и 27-СН3, 6Н), 4,85 и 5,30 м (10-СНа, 2Н) и 6,20 (6- и 7-Н, J 11,5 Гц, 2Н).
впервые осуществлен DeLuca с сотр. [813] в 1972 г. В кристаллическом виде получен Barton и др. [135] в 1974 г. Т. пл. 84—88° (эфир — гексан), при кристаллизации из хлороформа образует монохлороформсольват; т. пл. 106—112°, [аЬ +29° (эфир).
УФ-спектр (эфир): Хмакс 264, е 18 000; Хмин 228,5 нм, е 10 100 [135].
ЯМР-спектр (CDC13, 6, м. д.) [1351: 0,57 с (18-CHg, ЗН), 1,13 с (26- и 27-СН3, 6Н), 4,85 и 5,30 м (10-СНа, 2Н) и 6,20 (6- и 7-Н, J 11,5 Гц, 2Н).
154
154
50- ®
50- ®
398
398
152
152
ЮО
ЮО
200
200
500
500
^*•7 ‘1400
^*•7 ‘1400
Масс-спектр la,25-(OH)2D3 [674].
253 271 '_11А_253 271 '_11А_Мб_LМб_L
253 271 '_11А_
253 271 '_11А_
Мб_L
Мб_L
241,25-Диоксихолекальциферол (24£, 25- (OH)2D3). Химический синтез осуществлен
в 1972 г. в лаборатории DeLuca [576]. В 1975 г. Koizumi и др. [569] установили, что метаболит имеет 24 ^-конфигурацию. УФ-спектр (этанол): Хмакс 265 нм, е 17 000; Хмин 228 нм. ЯМР-спектр (CDC13, 6, м. д.): 6,22 и 6,00 д (6- и 7-Н, J 11 Гц, 2Н), 5,03 и 4,80 (10-СНа, 2Н), 1,15 и 1,19 (26- и 27-СН3, 6Н).
Масс-спектр 241,25-(OH)2D3 [426].
25(/?, 5), 26-Диоксихолекальциферол (25(/?, 5), 26-(OH)2D3). Химический, синтез осуществлен в 1973 г. Redel и др. 1754, 756]. Масс-спектры дии трисилиловых эфиров приведены в [756].
367 383 зщ «5367 383 зщ «5J> I,кУЮJ> I,кУЮ
367 383 зщ «5
367 383 зщ «5
J> I,кУЮ
J> I,кУЮ
Масс-спектр 25(Я, S),26-(OH)2D3 [846].
1а,24,25-Триоксихолекальциферо" (la,24,25-(OH)3D3). Получен в опытах in vivo и in vitro в лаборатории DeLuca в 1973 г. [431, 539]. Ikekawa и др. [454] в 1975 г. осуществили химический синтез двух эпимеров (24/?- и 24S-la,24,25-(OH)3Ds) и установили, что природный метаболит имеет 24/?- конфигурацию. Его ЯМР- и масс-спектры приведены в работе [454].
^"«I ~
Масс-спектр la,24,25-(OH)3D3 1431].
СИНТЕТИЧЕСКИЕ АНАЛОГИ ВИТАМИНОВ D
la-Оксихолекальциферол (lot-OHD3). Кристаллический про,дукт получен в 1973 г. Barton с сотр. [134].
3 Т" пл- 132—*33° t134L 138—139,5° (метил- сI формиат) [342], 134—136° (иглы, этиловый
СНз эфир — петролейный эфир) [379]; [а]д+26° J1(эфир) [134], [а]^ +29° [342].
УФ-спектр (эфир): Хмакс 265 нм, е 20 200 [134], 18 000 [378]. ИК-спектр (СНС13) [3791: С И О3600’ 3450’ 1645,1040,952,912, 895 см-1.
' ' 2М.’в.400^33Данные ЯМР-спектра приведены в работе
С 80, 98%[3791.
НО'НО'Масс-спектр la-OHD3 [386].Масс-спектр la-OHD3 [386].™ Н 11,10%
НО'
НО'
Масс-спектр la-OHD3 [386].
Масс-спектр la-OHD3 [386].
ос-Окси-З-эпивитамин D3 (la-Окси-За-холекальциферол). Синтезирован в 1975 г. [8181. Т. пл. 114—116°. УФ-спектр: Хмакс 264 нм, е 17 000. ЯМР-спектр (CDC!3, 6, м. д.): 4,04 (1-Н, J 4,4 Гц, 1Н), 4,30 (3-Н, J 4,4 Гц, 1Н), 5,00 д (19Z-H, J 2 Гц, 1Н), 5,28 м (19 £-Н, 1Н), 6,01 д и 6,40 д (6- и 7-Н, J 11,5 Гц, 2Н).
la-Оксиэргокальциферол (la-0HD2). Синтезирован в лаборатории DeLuca [5771. УФ-спектр: XMaKC 265 нм, Хмин 228 нм.
134
।Т267т т Т
I I11 41 L L
Масс-спектр la-OHD2 [577].
3-Дезокси-1а-оксихолекальциферол (3-D-la-OHD3). Синтезирован в 1974 г. в лабораториях DeLuca [578] и Norman [683] в виде масла. УФ- спектр: Хмакс 263 НМ, Х„ин 227 нм.
05'
1253 271366
It.1LI..u. i
Масс-спектр 3-D-la-OHDa [578].
3-Дезокси-1а,25-диоксихолекальциферол — (3-D-la,25-(OH)2D3). тезирован в 1975 г. в лаборатории Norman [686]."
Хмии 228 нм. Масс-спектр, т!е-. 400 (М+).
2а-Оксихолекальциферол (2oc-OHD3). Синтезирован в 1975 г. японскими исследователями [5231. '
УФ-спектр (эфир): ХмаКс 266 нм, е 18 000; Хмин 228 нм. ЯМР-спектр (CDC13, 6, м. д.): 3,55 м (2- и 3-Н, 2Н), 4,90 с и 5,12 с (19Z- и 19£-Н, 2Н), 5,97 д и 6,27 д (6- и 7-Н, J 11 Гц, 2Н). Масс-спектр, т/е: 400 (М+), 367, 364, 287, 251, 159, 152, 149 и 134.
Син- 263 нм,Син- 263 нм,УФ-спектр: ХмаксУФ-спектр: Хмакс2р~Оксихолекальциферол (2p~OHD3).
Син- 263 нм,
Син- 263 нм,
УФ-спектр: Хмакс
УФ-спектр: Хмакс
Синтезирован в 1975 г. японскими исследователями [524]. УФ-спектр (эфир): Х„акс 264 нм; Хмин 228 нм. ЯМР- спектр (CDC13, 6, м. д.): 4,07 м и 4,33 м (2- и 3-Н, 2Н), 5,00 д и 5,27 д (19Z- и 19£-Н, J 2 Гц, 2Н), 6,05 д и 6,45 д (6- и 7-Н, J 11 Гц, 2Н). Масс-спектр, т!е; 400 (М+), 382, 367, 364, 269, 251.
4а-Оксихолекальциферол (4oc-OHD3). Синтезирован в 1974 г. Pelc [707]. УФ- спектр (этанол): Хмакс 265 нм. ЯМР-спектр (СС14, 6, м. д.): 0,90 с (18-СН3, ЗН), 3,26 м (4р-Н, 1Н), 3,80 (За-Н, 1Н), 4,78 д и 5,02 д (19Z- и 19£-Н, 2Н), 6,23 д (6- и 7-Н, J 10 Гц, 2Н). Масс-спектр, т/е: 400 (М+), 382, 287, 152, 134, 117.
ЗР, 4а- Ди-(триметил)-силиловыйэфир— масс-спектр, т/е: 544, 454, 364, 296, 206 и 147.
бнбнИа-Оксихолекальциферол (lla-OHD3). Получен в 1961 г. Velluz и Amiard [910]. Кристаллизуется из гексана в бесцветные сольватированные иглы; [а!д +58° (этанол); УФ-спектр (этанол): Хмакс 264 нм, е 18 500; ИК-спектр приведен в работе [910]. бис-п-Фенилазобензоат—т. пл. 164°, [а]д +79° (бензол).
бн
бн
9,10-Секоандроста - 5, 7,10 (19)-триен - 30, 170-диол. В кристаллическом виде получен Velluz и др. [909] в 1959 г. Т. пл. 110° (бледно-желтые призмы), [а]д +41° (метанол); УФ-спектр: Хмакс 267 нм, е 18 300. бис-3,5-Динитробензоат— т. пл. 155—160° (бесцветные призмы), [а!д —26° ± 2° (бензол). УФ-спектр: ^макс 265 нм, е 18 350.
9,1О-Секоандроста-5,7,10(19)-триен-30-ол (этиокальциферол). Получен Velluz и др. [908] в виде бесцветного масла. Динитробензоат — т. пл. 140°, [а|д -|_49О -^ 2° (бензол); УФ-спектр: ХмаКс 265 нм, е 17 700.
30-Фтор-9,10-секохолеста-5,7,10(19) -триен (30-фтор-О3). Получен в 1974 г. автором и др. [97, 98] в виде масла; [а]д +54° (хлороформ); УФ-спектр (этанол): Хмакс 265 нм, е 17 850.
1It—rc±—Ji11i
3200 3000 2800 1800 160014001200Ю00800 »,cn4
ИК-спектр ЗР-фтор-О3 [97].ИК-спектр ЗР-фтор-О3 [97].5757577577200200400400100100
ИК-спектр ЗР-фтор-О3 [97].
ИК-спектр ЗР-фтор-О3 [97].
57
57
577
577
200
200
400
400
100
100
Масс-спектр 3₽-фтор-О3 [97].
4,4-Диметил-витамин D3. Получен в 1959 г. Oki и Tsuda [688]. Т. пл. 71—73°. 3,5-Динитробензоат — т. пл. 140—143° (ацетон), [а]д 4-105° (этанол).
гяра«с-Витамин D2. Получен в 1955 г. Verloop, Koevoet и Havinga [9111. Т. пл. 99—101° [4761, 104—106° (ацетон) [911], 125—126° (ацетон) [478]; [a]D +223° (бензол) [476], +74,8° [478]; УФ-спектр: ХМакс 272—273 нм, е 24 600 [4781; ИК-спектр приведен в работе [478].
Эфиры [478]:
ацетат —бесцветное масло; УФ-спектр: Хмакс 272 нм, е 20 200;
п-фенилазобензоат — т. пл. 114—117° (ацетон), [а]д —25,5° (хлороформ); УФ- спектр: Хмакс 276—278, 322 нм; в 30 000, 2970.
ШШ: ив: ив1361365050жж100100тото"3%"3%7®7®Масс-спектр 5,6-mpaHC-D3 [425].Масс-спектр 5,6-mpaHC-D3 [425].Дигидротахистерин-2 (ДГТ2). Получен в 1939 г. Werder [934]. Т. пл. 125—127° (90%-ный метанол) [934], 128° [68]; [а]д +97,5° (хлороформ), [а]о +98,5° [68]; УФ- спектр: Хмакс 242,5; 251; 261 нм; в 34 600, 40 060, 25 800.Эфиры [934]: ацетат — т. пл. 108—НО' (метанол), lain +32,8° (хлороформ); пропионат — т. пл. 97—98° (метанол), [а]д +37° (хлороформ); бутират — т. пл. 62—63°.Дигидротахистерин-2 (ДГТ2). Получен в 1939 г. Werder [934]. Т. пл. 125—127° (90%-ный метанол) [934], 128° [68]; [а]д +97,5° (хлороформ), [а]о +98,5° [68]; УФ- спектр: Хмакс 242,5; 251; 261 нм; в 34 600, 40 060, 25 800.Эфиры [934]: ацетат — т. пл. 108—НО' (метанол), lain +32,8° (хлороформ); пропионат — т. пл. 97—98° (метанол), [а]д +37° (хлороформ); бутират — т. пл. 62—63°.Дигидротахистерин-3 (ДГТ3). Получен в 1956 г. [890]. Т. пл. 101—102,5е (водный метанол); УФ-спектр: Хмакс 242,5; 251; 260,5 нм; е 33 800, 39 160, 25 100. Данные ЯМР-спектра приведены в работе [844].4-Фенилазонбензоат — т. пл. 107—108° (ацетон — метанол) [890].Дигидротахистерин-3 (ДГТ3). Получен в 1956 г. [890]. Т. пл. 101—102,5е (водный метанол); УФ-спектр: Хмакс 242,5; 251; 260,5 нм; е 33 800, 39 160, 25 100. Данные ЯМР-спектра приведены в работе [844].4-Фенилазонбензоат — т. пл. 107—108° (ацетон — метанол) [890].КЭТ.КЭТ.5050ЮОЮО200200,„255 273259,„255 273259386386"5)0"5)0к.400к.400транс-Витамин D3, Получен в 1957 г. Inhoffen и др. [483]. Т. пл. 90,5—91,5° (ацетон), [а]д +212° (бензол); УФ-спектр (эфир): Хмакс 273 нм, в 24 300; Хмнн 232 нм. "
Ш
Ш
: ив
: ив
136
136
50
50
ж
ж
100
100
то
то
"3%
"3%
7®
7®
Масс-спектр 5,6-mpaHC-D3 [425].
Масс-спектр 5,6-mpaHC-D3 [425].
Дигидротахистерин-2 (ДГТ2). Получен в 1939 г. Werder [934]. Т. пл. 125—127° (90%-ный метанол) [934], 128° [68]; [а]д +97,5° (хлороформ), [а]о +98,5° [68]; УФ- спектр: Хмакс 242,5; 251; 261 нм; в 34 600, 40 060, 25 800.
Эфиры [934]: ацетат — т. пл. 108—НО' (метанол), lain +32,8° (хлороформ); пропионат — т. пл. 97—98° (метанол), [а]д +37° (хлороформ); бутират — т. пл. 62—63°.
Дигидротахистерин-2 (ДГТ2). Получен в 1939 г. Werder [934]. Т. пл. 125—127° (90%-ный метанол) [934], 128° [68]; [а]д +97,5° (хлороформ), [а]о +98,5° [68]; УФ- спектр: Хмакс 242,5; 251; 261 нм; в 34 600, 40 060, 25 800.
Эфиры [934]: ацетат — т. пл. 108—НО' (метанол), lain +32,8° (хлороформ); пропионат — т. пл. 97—98° (метанол), [а]д +37° (хлороформ); бутират — т. пл. 62—63°.
Дигидротахистерин-3 (ДГТ3). Получен в 1956 г. [890]. Т. пл. 101—102,5е (водный метанол); УФ-спектр: Хмакс 242,5; 251; 260,5 нм; е 33 800, 39 160, 25 100. Данные ЯМР-спектра приведены в работе [844].
4-Фенилазонбензоат — т. пл. 107—108° (ацетон — метанол) [890].
Дигидротахистерин-3 (ДГТ3). Получен в 1956 г. [890]. Т. пл. 101—102,5е (водный метанол); УФ-спектр: Хмакс 242,5; 251; 260,5 нм; е 33 800, 39 160, 25 100. Данные ЯМР-спектра приведены в работе [844].
4-Фенилазонбензоат — т. пл. 107—108° (ацетон — метанол) [890].
КЭТ.
КЭТ.
50
50
ЮО
ЮО
200
200
,„255 273259
,„255 273259
386
386
"5)0
"5)0
к.
400
к.
400
Масс-спектр ДГТ3 [844].
25-Оксидигидротахистерин-3 (25-ОН-ДГТ3). Синтезирован в 1970 г. в лаборатории DeLuca [844, 251, 2521. Данные ЯМР-спектра приведены в работе [8441.
Масс-спектр 25-ОН-ДГТ3 [844].Масс-спектр 25-ОН-ДГТ3 [844].
Масс-спектр 25-ОН-ДГТ3 [844].
Масс-спектр 25-ОН-ДГТ3 [844].
Изотахистерин-2 (изо-Т2). Получен в 1954 г. Inhoffen с сотрудниками при обработке витамина D2 эфиратом BF3 [4611. Маслообразный продукт, [аЬ —71°; УФ- спектр (эфир): XMaKL 279; 289,5; 302 нм; в 34 500, 45 300, 33 600.4-Метил-З,5-динитробензо ат — т. пл. 126—127,5° (иглы, ацетон — метанол), [аЬ +55,6° 14761.Изотахистерин-2 (изо-Т2). Получен в 1954 г. Inhoffen с сотрудниками при обработке витамина D2 эфиратом BF3 [4611. Маслообразный продукт, [аЬ —71°; УФ- спектр (эфир): XMaKL 279; 289,5; 302 нм; в 34 500, 45 300, 33 600.4-Метил-З,5-динитробензо ат — т. пл. 126—127,5° (иглы, ацетон — метанол), [аЬ +55,6° 14761.Изотахистерин-3 (изо-Т3). Получен в 1973 г. Holick, DeLuca и др. [430]. УФ- спектр: ХмаК( 278, 288, 300 нм.Изотахистерин-3 (изо-Т3). Получен в 1973 г. Holick, DeLuca и др. [430]. УФ- спектр: ХмаК( 278, 288, 300 нм.
Изотахистерин-2 (изо-Т2). Получен в 1954 г. Inhoffen с сотрудниками при обработке витамина D2 эфиратом BF3 [4611. Маслообразный продукт, [аЬ —71°; УФ- спектр (эфир): XMaKL 279; 289,5; 302 нм; в 34 500, 45 300, 33 600.
4-Метил-З,5-динитробензо ат — т. пл. 126—127,5° (иглы, ацетон — метанол), [аЬ +55,6° 14761.
Изотахистерин-2 (изо-Т2). Получен в 1954 г. Inhoffen с сотрудниками при обработке витамина D2 эфиратом BF3 [4611. Маслообразный продукт, [аЬ —71°; УФ- спектр (эфир): XMaKL 279; 289,5; 302 нм; в 34 500, 45 300, 33 600.
4-Метил-З,5-динитробензо ат — т. пл. 126—127,5° (иглы, ацетон — метанол), [аЬ +55,6° 14761.
Изотахистерин-3 (изо-Т3). Получен в 1973 г. Holick, DeLuca и др. [430]. УФ- спектр: ХмаК( 278, 288, 300 нм.
Изотахистерин-3 (изо-Т3). Получен в 1973 г. Holick, DeLuca и др. [430]. УФ- спектр: ХмаК( 278, 288, 300 нм.
Масс-спектр изовитамина D3 [430].Масс-спектр изовитамина D3 [430].
Масс-спектр изовитамина D3 [430].
Масс-спектр изовитамина D3 [430].
Дигидровитамин D2 I. Получен в 1932 г. Windaus и др. [9571 при гид-Дигидровитамин D2 I. Получен в 1932 г. Windaus и др. [9571 при гид-рировании витамина D2. Т. пл. 65°, [а]д 4-11,9°; УФ-i поглощения в области 240—300 нм.
Дигидровитамин D2 I. Получен в 1932 г. Windaus и др. [9571 при гид-
Дигидровитамин D2 I. Получен в 1932 г. Windaus и др. [9571 при гид-
Эфиры:
аллофанат — т. пл. 184—186°, [а]о4-14,1°
(хлороформ) [957];
бензоат — т. пл. 73°, [а]д 4*29,2° (эта
нол);
л<-нитробензоат — т. пл. 108° (ацетон),
[«Jo 4*32,1° (хлороформ);
6-хлор-З-нитробензоат — т. пл. 87—88°
(ацетон), [а]о 4*21,9°,
4-хлор-З-нитробензоат—т. пл. 79—81°, 1а]о 4*38,1 (хлороформ) [935, 936].
спектр: нет максимумаспектр: нет максимумаДигидровитамин D2 II. Получен Schubert в 1954 г. [807]. Т. пл. 108' (ацетон), [а]о 4*131,6° (хлороформ) [935, 936].Дигидровитамин D2 II. Получен Schubert в 1954 г. [807]. Т. пл. 108' (ацетон), [а]о 4*131,6° (хлороформ) [935, 936].261 нм; е 36 600, 42 400, 28 300 [935].Эфиры [935]:ацетат — т. пл. 92° (бесцветные кристаллы), [а]д 4-86,1° (хлороформ);2-нитро-3,4-диметоксибензоат — т. пл. 203° (бензол);3,4-динитробензоат — т. пл. 166° (желтые листочки), [а]д 4*134,8° (хлороформ), [а]о 4*136,2° (ацетон);л-нитробензоат—т. пл. 143—144° (аце-261 нм; е 36 600, 42 400, 28 300 [935].Эфиры [935]:ацетат — т. пл. 92° (бесцветные кристаллы), [а]д 4-86,1° (хлороформ);2-нитро-3,4-диметоксибензоат — т. пл. 203° (бензол);3,4-динитробензоат — т. пл. 166° (желтые листочки), [а]д 4*134,8° (хлороформ), [а]о 4*136,2° (ацетон);л-нитробензоат—т. пл. 143—144° (аце-тон), [а]д 4*149,2° (хлороформ);4-хлор-З-нитробензоат — т. пл.тон), [а]д 4*149,2° (хлороформ);4-хлор-З-нитробензоат — т. пл.157°, [а]д 4-146,7°;.и-хлорбензоат — т. 4-156,2° (хлороформ).157°, [а]д 4-146,7°;.и-хлорбензоат — т. 4-156,2° (хлороформ).156—156—пл.пл.131°,131°,[a]o[a]o243, 251,243, 251,УФ-спектр: ХмаксУФ-спектр: ХмаксДигидровитамин D3 I. Получен Windaus и др. в 1939 г. [979]. Аллофанат—т. пл. 165°, [a]g 4*61,3°.
спектр: нет максимума
спектр: нет максимума
Дигидровитамин D2 II. Получен Schubert в 1954 г. [807]. Т. пл. 108' (ацетон), [а]о 4*131,6° (хлороформ) [935, 936].
Дигидровитамин D2 II. Получен Schubert в 1954 г. [807]. Т. пл. 108' (ацетон), [а]о 4*131,6° (хлороформ) [935, 936].
261 нм; е 36 600, 42 400, 28 300 [935].
Эфиры [935]:
ацетат — т. пл. 92° (бесцветные кристаллы), [а]д 4-86,1° (хлороформ);
2-нитро-3,4-диметоксибензоат — т. пл. 203° (бензол);
3,4-динитробензоат — т. пл. 166° (желтые листочки), [а]д 4*134,8° (хлороформ), [а]о 4*136,2° (ацетон);
л-нитробензоат—т. пл. 143—144° (аце-
261 нм; е 36 600, 42 400, 28 300 [935].
Эфиры [935]:
ацетат — т. пл. 92° (бесцветные кристаллы), [а]д 4-86,1° (хлороформ);
2-нитро-3,4-диметоксибензоат — т. пл. 203° (бензол);
3,4-динитробензоат — т. пл. 166° (желтые листочки), [а]д 4*134,8° (хлороформ), [а]о 4*136,2° (ацетон);
л-нитробензоат—т. пл. 143—144° (аце-
тон), [а]д 4*149,2° (хлороформ);
4-хлор-З-нитробензоат — т. пл.
тон), [а]д 4*149,2° (хлороформ);
4-хлор-З-нитробензоат — т. пл.
157°, [а]д 4-146,7°;
.и-хлорбензоат — т. 4-156,2° (хлороформ).
157°, [а]д 4-146,7°;
.и-хлорбензоат — т. 4-156,2° (хлороформ).
156—
156—
пл.
пл.
131°,
131°,
[a]o
[a]o
243, 251,
243, 251,
УФ-спектр: Хмакс
УФ-спектр: Хмакс
Дигидровитамин D2 IV. Получен Schubert [809] в 1956 г. Т. пл. 63° (метанол), [alo 4*19,3° (абсолютный этанол); т. пл. 85—87° (петролейный эфир); т. пл. 97° (90%-ный ацетон), [а]д 4*42° (абсолютный этанол); УФ-спектр: Хмакс 242, 251, 260 нм; е 34 800, 40 200, 25 800 [935, 936, 939].
Эфиры [935, 9361:
ацетат — т. пл. 123—124°, [alo 4*14,4°; УФ-спектр: Хмакс 242—243, 251, 260 нм; е 31 600, 37 200, 24 750;
.и-нитробензоат — т. пл. 154—155°, [ай 4*91°;
динитробензоат — т. пл. 171° (желтые кристаллы), [а]д 4-81,5°;
м-хлорбензоат — т.пл.151—152°,
[alo 4-94,5;
4-хлор-З-нитробензоат—т. пл. 158°, [а]д 4-104,5° (хлороформ).
Дигидровитамин D2 V. Получен Wester- hof и др. [939]. Т.«л. 96—98° (длинные иглы, метанол); УФ-спектр: Хмакс 237,5; 243,5; 252,5 нм; 8243,5 27 000. ИК-спектр см. в работе [939].
Дигидровитамин D2 VI. Получен Wes- terhof и др. [939], маслообразный продукт; УФ-спектр: Хмакс 246 нм; е 1900. ИК-спектр приведен в работе [939].
4-Нитрофенилазобензоат — т. пл. 132— 134° (ацетон).
Структура дигидровитаминов уточнена Н. А. Богославским и др. (Хим.-фармацевт. журн., 1977, 11, № 9).
ПРОВИТАМИНЫ D И ХОЛЕСТАДИЕНЫ
Эргостерин (эргоста-5,7,22-триен-ЗР-ол). Выделен в 1889 г. парижским аптекарем Tanret [861], который установил его константы [862, 863], проверенные позднее Windaus. Т. пл. 165°, [а]д —129° (хлороформ); сн другие данные: т. пл. 168° [9161, 162— нсI 3164° [4421; [а]д —135° (хлороформ),
—94°(эфир), —93° (этанол), —92°(аце- ' тон), —125° (бензол); [а]м6,1 —171° СН3Г3 (хлороформ) [4].
1Кристаллизуется эргостерин из I |Т95%-ного этанола с одной молекулой
воды, в виде листочков из смеси этанол — бензол (4 : 1), бесцветных игл из метанола, ацетона. УФ-спектр (этанол): Хмакс 271, 281 и 293 нм; 8 11 090, 11 500 и 6540 [442]; Хмакс 271,5; 282 и 293,5 нм; е 11 580, 12 180 и 6920 [834].
Эфиры:
ацетат — т. пл. 181°, [а]д —90° (хлороформ);
бензоат — т. пл. 171°, [а]д —88° [68];
4-нитробензоат—т. пл. 182° (спирт), [а]о —49,5° (хлороформ) [916];
З-нитро-4-метилбензоат—т. пл. 191—193° (ацетон), [а]д —47,2° (хлороформ) [9161;
динитробензоат — т. пл. 198—199° (ацетон), [аЬ —40,8° (хлороформ) [9161;
динитро-4-метилбеизоат—т. пл. 224° (ацетон) [900], 213—214° [916];
пальмитат—т. пл. 107—108°, [а]д —51° [9161;
аллофанат—т. пл. 250° [916].
ИК-спектр 3,5-дииитробензоата эргостерина.
в 1935 г.в 1935 г.
в 1935 г.
в 1935 г.
Перекись эргостерина [947]— т. пл. 181,5—183° (метанол, сублимация), [alo —29° (хлороформ);
ацетат — т. пл. 202,5—203,5°, lain —23° (хлороформ).
7-Дегидрохолестерин (холеста-5,7-диен-Зр-ол). Синтезирован Windaus с сотр. [972]. Кристаллизуется из ацетона (длинные иглы), смесей эфир — бензол и толуол — метанол.
Т. пл. 148—150° [442], 148—151° [1441, 142—143,5° [962], 149—149,5° 15281; la© —121° (хлороформ) [9881; УФ-спектр (этанол): лмакс 272, 282, 293; е 11 250, 11900, 6650 [144].
В4»
2D
fill* и I „ .-JL—111
$00 3400 3200 3000 2800 1800 1600 1400 12001000 800»ДГ
ИК-спектр 7-ДГХ.
Эфиры:
ацетат — т. пл. 130—130,5° (пластинки, ацетон), [а]о’5—87° ±2° (бензол) [528]; УФ-спектр (этанол): ХмаКс 271, 282, 293 нм; е 10 350, 10 850, 6140 [1441;
бутират — т. пл. 79° (ацетон), [a]D —70° (хлороформ); УФ-спектр (этанол): Хмакс 272, 282, 294 нм; е 10 200, 10 450, 7400 [922];
ИК-спектр бензоата 7-ДГХ.ИК-спектр бензоата 7-ДГХ.
ИК-спектр бензоата 7-ДГХ.
ИК-спектр бензоата 7-ДГХ.
бензоат—т. пл. 139—140°, прозрачный при 183° [793] (кристаллы, хлороформ — ацетон (1 : 1), абсолютный эфир, этилацетат); [alo —53,5° (хлороформ) [793]; УФ-спектр (хлороформ — этанол): Хмакс 272, 282, 294;
е 13 270, 13 580, 7400 [144];
4-нитробензоат—т. пл. 153—154° (иглы, ацетон), [а]д —49,8° (хлороформ) [442]; УФ-спектр: Хмакс 271, 281; е22 940, 19 600 [144];
5-динитробензоат [144] — т. пл. 210,5—212,5° (ацетон, бензол), [а]д —41,2е (хлороформ); УФ-спектр: Хмакс 252, 260, 271, 282, 293 нм; е 16 320, 15 950, 16 650, 14 940, 8750;
З-нитро-4-метилбензоат [4421 —
т. пл. 174—176° (иглы, ацетон), [аЬ —49,8° (хлороформ);
3,5-динитро-4-метилбензоат [442] — т. пл. 191—192° (оранжевые иглы, ацетон), [alo —37,5° (хлороформ);
изокапроат [667] — т. пл. 101—103°, затвердевает при 108° и снова плавится при 114—118° (ацетон); УФ-спектр (изооктан): Х„акс 271, 282, 294 нм; е 11 400, 11 900, 6800.
7-Дегидрохолестеринхлорид— т. пл. 132° (ацетон), [а]д—100°.
7-Дегидрохолестеринбромид — т. пл. 147—148° (иглы, этилацетат), [а] о —86°. УФ-спектр (циклогексан): Хмакс 275, 285, 287 нм; в 13 000, 13 500, 9000 [153].
Перекись 7-дегидрохолестерина — т. пл. 152° (этанол), [aly +6,55° (хлороформ) [7971. Ацетат — т. пл. 152—155° (этанол), [alo 4-7,7° [344].
22-Дигидроэргостерин. Получен Windaus с сотр. в 1933 г. [960]. Т. пл. 152—153° (иглы, этилацетат — метанол), [alo —109° (хлороформ). Ацетат— т. пл. 157—158° (эфир—спирт, этилацетат — спирт).
7-Дегидро-0-ситостерин синтезирован в 1936 г. [1001]. Т. пл. 145— 145,5° (спирт) [533], [а]д —116° (хлороформ) [1001]. Эфиры: ацетат — т. пл. 151°, [alo —71° (хлороформ); бензоат — т. пл. 149°, [а]д —54° (хлороформ) [916].
7-Дегидростигмастерин синтезирован в 1936 г. [596]. Т. пл. 158,5 — 159,3° [532], 154°; [а]^ —113,1° (бензол) [5961. Эфиры: ацетат — т. пл. 172° [596], 178,3—178,9° [5321; бензоат — т. пл. 180° [9161, 184,5—185,5° [532].
7-Дегидрокампестерин синтезирован в 1942 г. [775]. Т. пл. 164—165° (ацетон — метанол), [alo —109° (хлороформ); УФ-спектр: Хмакс 272, 282 нм, е282 10 600. Бензоат?—т. пл. 156—157°, прозрачный при 164° (иглы); [alo —50,2° (хлороформ).
Холеста-5,7-диен-Зр,25-диол. Синтезирован в 1969 г. [168, 367, 196]. Т. пл. 169—17Г (водный метанол) [168], 191,5—192,5° (тетрагидрофуран — диизопропиловый эфир) [3671, 185—187® (хлористый метилен — метанол) [196]; [alo—116° [3671; УФ-спектр: Х„акс 263, 271, 282, 293 нм; е 8150, 11 500, 11 900, 7000 [3671; ИК-спектр (КВг): 3355, 2940, 1655, 1380, 1065, 1040, 830, 800 см-1 [3671; ЯМР-спектр (CDC13 + CD3OD, б, м. д.) [3671: 0,63 с (18-СН3, ЗН), 0,94 с (19-СН3, ЗН), 0,98 д (21-СН3, J 5 Гц, ЗН), 1,19 с (26- и 27-СН3, 6 Н), 4,59 (3-Н, 1Н), 5,39 д и 5,58 д (6- и 7-Н, J 6 Гц, 2Н).
Эфиры [3671: ацетат —т. пл. 141,5—143,5° (ацетон — диизопропиловый эфир (1:1) — небольшое количество метанола); [alo —71°; УФ-спектр: Хмакс 263, 271, 282, 293 нм; е 8100, 11 400, 12 000, 6900; ИК-спектр (СН2С12): 3600, 2940, 2860, 1730, 1655, 1375, 1240, 1030, 840 и 805 см-1.
Холеста-5,7-диен-1а,Зр,25-триол. Синтезирован в 1972 г. (в виде триацетата) [813]. Триацетат — т. пл. 96—101°, [alo—24° [135].
Холеста-5,7-диен-Зр,24(7?,5),25-триол. Синтезирован в 1973 г. (в виде диацетата) [576].
Диацетат-Зр,24(/?,5) — т. пл. 176—177° (ацетон — петролейный эфир); [а]д —63,6° (хлороформ) [755, 757]; УФ-спектр (этанол): Хмако 272, 282, 293 нм; е282 И 000 [7571; масс-спектр, т/е: 416, 398, 383, 351, 271 [5761.
Холеста-5,7-диен-Зр,25(7?,S),26-триол. Синтезирован в 1973 г. [754]. Т. пл. 170—172° (метанол — диизопропиловый эфир); [а]д —63,8° (метанол); УФ-спектр: Х„акс 272, 282, 293 нм [756].
Диацетат-3р,26 [7561: т. пл. 107—110° (ацетон — петролейный эфир), [alo —60,2°; УФ-спектр: ХмаКс 272, 282, 293 нм; е282 12 000; ИК-спектр: 805 см-1 (А6) и 840 см—1 (А7).
Холеста-5,7-диен-1а,ЗВ-диол. Синтезирован в 1973 г. [342]. Т. пл. 172—173° [342], 155—158s (метанол) [521]; [a]D —80° [342], —45° (хлороформ) [521]; УФ-спектр (этанол): Хмакс 262, 271, 282, 293,5 нм; е 8300, 11 750, 12 880, 7400. Данные ЯМР-спектра приведены в [521].
Диацетат: т. пл. 112—114° (этанол) [342], 118—119° [134], 113—114° [333]; [a]D —19° [342], —31° [134],—30° [333]; УФ-спектр: Хмакс 271, 282, 294 нм; в 11 800, 12 700, 7500 [134].
Холеста-5,7-диен-1а-ол. Синтезирован в 1974 г. [639]. Ацетат: т. пл. 108—109° (иглы, этанол);
УФ-спектр: Хмакс 252, 262, 271, 281, 293 нм; е2700, 6800, 10 300, И 600, 6800;
ЯМР-спектр (CDC13, 6, м. д.): 4,32 и 4,61 (6- и 7-Н, / 6 Гц, 2Н), 5,08 (lp-Н, 1Н), 7,92 с (АсСН3), 9,07 д (21-СН3, J 5 Гц, ЗН), 9,12 д (26- и 27-СН3, J 6 Гц, 6Н).
Масс-спектр, т/е: 428 (0,4), 427 (1,6), 426 (5), 366 (50), 253 (20), 226 (27), 211 (100), 199 (43), 183 (28), 168 (30), 158 (45), 143 (40), 131 (35), 43 (89).
Зр-Фторхолеста-5,7-диен. Синтезирован в 1974 г. [89]. Т. пл. 105— 107° (ацетон), [аГо —149° (хлороформ); УФ-спектр (этанол): Хмакс 271, 282, 293; е 10 700, 11 000, 6420.
ИК-спектр Зр-фторхолеста-5,7-диена.ИК-спектр Зр-фторхолеста-5,7-диена.
ИК-спектр Зр-фторхолеста-5,7-диена.
ИК-спектр Зр-фторхолеста-5,7-диена.
5050- 128 Г I 100- 128 Г I 10017811Д120017811Д1200231 I z/J231 I z/J3838Z_LLZ_LL300300"Г®"Г®
50
50
- 128 Г I 100
- 128 Г I 100
178
11Д1
200
178
11Д1
200
231 I z/J
231 I z/J
38
38
Z_LL
Z_LL
300
300
"Г®
"Г®
ЯМР-спектр (CDC13, 6, м. д.): 0,62 с (18-СН3, ЗН), 0,84 с (19-СН3, ЗН), 0,92 с (21-СН3, ЗН), 0,98 с (26- и 27-СН3, 6Н), 4,25 м и 4,76 м (>CHF, J 30 Гц), 5,43 и 5,59 м (6- и 7-Н, 2Н).
555555Ж
555
555
Масс-спектр ЗР-фторхолеста-5,7-диена.
Холеста-4,6-диен-3р-ол. Получен в 1937 г. Dune и Wang [297]. Т. пл. 126—127° [712], 120° [153], 119—120° (метанол) [831], т. пл. 128—129°;
[alo —38° (хлороформ) [712], [а]у —42° (хлороформ); УФ-спектр (хлороформ — этанол): Хмакс 240 нм, е 24 540.
Эфиры:
ацетат — т. пл. 78—79° (ацетон); [а]ц—71,6° (хлороформ) [712]; УФ- спектр: ZMaKC 239 нм; е 26 300 [712],
22 600 [8311; Хмакс 232, 239, 248 нм; 8 17 800, 20 100, 12 700 [109];
бензоат — т. пл. 128—129° (ацетон) [831], 127—127,5° [793], 124,5— 126,5° [144]; [а]д —81° (хлороформ) [831], [а]ц —90,7° (хлороформ) [144],
lalo —101,8° (хлороформ) [7931; УФ-спектр (хлороформ — этанол): Хмакс 239, 279—280 нм; е 38 200, 1100 [144], е24п 37 500 [40], е239 33 000 [831]; 3,5-динитробензоат — т. пл. 194° [297].
Холеста-8,14-диен-Зр~ол. Получен при кислотной изомеризации 7- дегидрохолестерина [322]. Т. пл. 98—99° [394], 116—117° (иглы, метанол) [322], 119—120° и 125—126° [1061; [а]о —12° (хлороформ) [322]; УФ- спектр (этанол): Хмакс 250 нм, е 18 100 [322].Эфиры: ацетат — т. пл. 99—100° (длинные пластинки, метанол) [322], 100—101° (эфир—метанол) [323]; [a]D — 21° (хлороформ) [3221; УФ-спектр но' (этанол): Хмакс 250 нм, е 18 100 [322];Холеста-8,14-диен-Зр~ол. Получен при кислотной изомеризации 7- дегидрохолестерина [322]. Т. пл. 98—99° [394], 116—117° (иглы, метанол) [322], 119—120° и 125—126° [1061; [а]о —12° (хлороформ) [322]; УФ- спектр (этанол): Хмакс 250 нм, е 18 100 [322].Эфиры: ацетат — т. пл. 99—100° (длинные пластинки, метанол) [322], 100—101° (эфир—метанол) [323]; [a]D — 21° (хлороформ) [3221; УФ-спектр но' (этанол): Хмакс 250 нм, е 18 100 [322];Н3С. снН3С. снснснсн3сн3Хмакс 249 нм, е 19 800 [323]; бензоат (способ получения см. в [40]) —т. пл. 147—148° (ацетон), [а]д — 6,9° [106]; УФ-спектр (хлороформ — этанол): Хмакс 236 НМ, 8 27 100.Хмакс 249 нм, е 19 800 [323]; бензоат (способ получения см. в [40]) —т. пл. 147—148° (ацетон), [а]д — 6,9° [106]; УФ-спектр (хлороформ — этанол): Хмакс 236 НМ, 8 27 100.3600 5400 "3200 5000 280l)i1800 ИК-спектр холеста-8,14-диен-ЗР-ола.3600 5400 "3200 5000 280l)i1800 ИК-спектр холеста-8,14-диен-ЗР-ола.Холеста-5,8(9)-диен-3|3-ол.Т. пл. 147—148° (иглы, хлороформ —Холеста-5,8(9)-диен-3|3-ол.Т. пл. 147—148° (иглы, хлороформ —I1।।।16001400 12001000 600 V,см'*Способ получения описан в работе [874].I1।।।16001400 12001000 600 V,см'*Способ получения описан в работе [874].ацетон), [а]д —54,7° (хлороформ).Эфиры [874]: ацетат—т. пл. 121—122° (иглы, ацетон), [alo —48,3° (хлороформ); бензоат—т. пл. 149—150° (кристаллы, хлороформ — ацетон).ацетон), [а]д —54,7° (хлороформ).Эфиры [874]: ацетат—т. пл. 121—122° (иглы, ацетон), [alo —48,3° (хлороформ); бензоат—т. пл. 149—150° (кристаллы, хлороформ — ацетон).
Холеста-8,14-диен-Зр~ол. Получен при кислотной изомеризации 7- дегидрохолестерина [322]. Т. пл. 98—99° [394], 116—117° (иглы, метанол) [322], 119—120° и 125—126° [1061; [а]о —12° (хлороформ) [322]; УФ- спектр (этанол): Хмакс 250 нм, е 18 100 [322].
Эфиры: ацетат — т. пл. 99—100° (длинные пластинки, метанол) [322], 100—101° (эфир—метанол) [323]; [a]D — 21° (хлороформ) [3221; УФ-спектр но' (этанол): Хмакс 250 нм, е 18 100 [322];
Холеста-8,14-диен-Зр~ол. Получен при кислотной изомеризации 7- дегидрохолестерина [322]. Т. пл. 98—99° [394], 116—117° (иглы, метанол) [322], 119—120° и 125—126° [1061; [а]о —12° (хлороформ) [322]; УФ- спектр (этанол): Хмакс 250 нм, е 18 100 [322].
Эфиры: ацетат — т. пл. 99—100° (длинные пластинки, метанол) [322], 100—101° (эфир—метанол) [323]; [a]D — 21° (хлороформ) [3221; УФ-спектр но' (этанол): Хмакс 250 нм, е 18 100 [322];
Н3С. сн
Н3С. сн
сн
сн
сн3
сн3
Хмакс 249 нм, е 19 800 [323]; бензоат (способ получения см. в [40]) —т. пл. 147—148° (ацетон), [а]д — 6,9° [106]; УФ-спектр (хлороформ — этанол): Хмакс 236 НМ, 8 27 100.
Хмакс 249 нм, е 19 800 [323]; бензоат (способ получения см. в [40]) —т. пл. 147—148° (ацетон), [а]д — 6,9° [106]; УФ-спектр (хлороформ — этанол): Хмакс 236 НМ, 8 27 100.
3600 5400 "3200 5000 280l)i1800 ИК-спектр холеста-8,14-диен-ЗР-ола.
3600 5400 "3200 5000 280l)i1800 ИК-спектр холеста-8,14-диен-ЗР-ола.
Холеста-5,8(9)-диен-3|3-ол.
Т. пл. 147—148° (иглы, хлороформ —
Холеста-5,8(9)-диен-3|3-ол.
Т. пл. 147—148° (иглы, хлороформ —
I1।।।16001400 12001000 600 V,см'*
Способ получения описан в работе [874].
I1।।।16001400 12001000 600 V,см'*
Способ получения описан в работе [874].
ацетон), [а]д —54,7° (хлороформ).
Эфиры [874]: ацетат—т. пл. 121—122° (иглы, ацетон), [alo —48,3° (хлороформ); бензоат—т. пл. 149—150° (кристаллы, хлороформ — ацетон).
ацетон), [а]д —54,7° (хлороформ).
Эфиры [874]: ацетат—т. пл. 121—122° (иглы, ацетон), [alo —48,3° (хлороформ); бензоат—т. пл. 149—150° (кристаллы, хлороформ — ацетон).
ИК-спектр бензоата холеста-5,8 (9)-диеи-3₽-ола.ИК-спектр бензоата холеста-5,8 (9)-диеи-3₽-ола.Холеста-7,9(11)-диен-Зр-ол. Способ получения описан в работах [318,
ИК-спектр бензоата холеста-5,8 (9)-диеи-3₽-ола.
ИК-спектр бензоата холеста-5,8 (9)-диеи-3₽-ола.
114, 9961. Т. пл. 115—117° (ацетон) [114], 107—110° (996, 3191; [а$ +57,3°
(хлороформ) [114], [а]о +39° (диоксан) [319]. УФ-спектр (этанол): Хмакс 235, 243, 251 нм; 8243 16 000 [114, 996].
Эфиры:
ацетат — т. пл. 114—115° (эфир — метанол) [417], 117—119° (бесцветные
иглы, водный метанол, ацетон — метанол) [114, 3191; [а]о+57,5° (хлороформ) [114], [а!о+51° [4171, [а!о + 63±2° (диоксан) [3191; УФ-спектр (этанол): Хмакс 236, 243, 250 нм; е 12 600, 14 200, 9130 [319, 3211;
бензоат — т. пл. 134° [3181, 132,5—133,5° (призмы, ацетон — метанол) [4171, 138,5—139,5°, прозрачный при 152,5° (ацетон) [114], 135—13 7° (ацетон — диоксан — вода) [319]; [а]о +52° [4171, [а]д +52,4°, [а]нй+65,9°
ИК-спектр бензоата холеста-7,9(11)-диеи-ЗР-ола.
ИК-спектр бензоата холеста-7,14-диеи-ЗР-ола.ИК-спектр бензоата холеста-7,14-диеи-ЗР-ола.
ИК-спектр бензоата холеста-7,14-диеи-ЗР-ола.
ИК-спектр бензоата холеста-7,14-диеи-ЗР-ола.
(хлороформ), [а]д +61,5°, [a]546,i +77,1° (диоксан) [1141, [a]o +32° (диоксан) [318, 319]; УФ-спектр (петролейный эфир): Хмакс 228, е 19 950 [417].
Холеста-7,14-диен-Зр-ол. Получают при обработке 7-дегидрохолесте- рина хлористым водородом [797, 322]. Т. пл. 117—118°, [alo—145,5° [797].
Бензоат — т. пл. 151—152° (пластинки, хлороформ — метанол), [а]о —150° (хлороформ); УФ-спектр (этанол): Хмакс 232 нм, е 18 400 [322].
получения см. в работе [443].—57,6° (хлороформ); УФ-спектр:получения см. в работе [443].—57,6° (хлороформ); УФ-спектр:
получения см. в работе [443].
—57,6° (хлороформ); УФ-спектр:
получения см. в работе [443].
—57,6° (хлороформ); УФ-спектр:
Холеста-6,8(14)-диен-ЗР-ол. Способ Т. пл. 117—119° (эфир — метанол), [а]д Хмакс 252 нм; е 21 300.
Эфиры:
ацетат — т. пл. 106—108° (эфир — метанол); [alo'5 —51,3° (хлороформ); УФ-спектр: Хмакс 252 нм, е 21 800;
бензоат — т. пл. 115° (ацетон), [alo—62° (хлороформ); УФ-спектр: Хмакс 233,252 нм; е24 200, 23 600 [443].
Холеста-6,8(9)-диен-ЗР-ол. (изодегидрохолестерин). Получен Windaus 1938 г. [973, 9741. Т. пл. 120—122° (эфир — спирт), 1аЙ —17,9° (хлороформ) [973]; УФ-спектр: Хмакс 275 нм, е 5300 [681.
и другими ви другими вЭфиры [973]:
и другими в
и другими в
ацетат — т. пл. 111—112°, прозрачный при 118—120°;
бензоат — т. пл. 146°, прозрачный при 180°; [ай —2,6° (хлороформ);
п-нитробензоат — т. пл. 165°.
Холеста-4,7-диен-Зр-ол. Получен Windaus и другими в 1939 г. [9781. Т. пл. 115—116° (иглы), [аЙ +10° (хлороформ).
Stokes,
Холеста-5,24-диен-Зр-ол (десмостерин, 24-дегидрохолестерин). Выделен
Fish и другими в 1956 г. [837], синтезирован в 1957 г. [314]. Т. пл. 120,5—121° (метанол) [8371, 117—118° (водный метанол) [314]; [ай —37,9° [314], [ай —40,2° (хлороформ) [837].
Эфиры: ацетат — т. пл. 99—100° (водный этанол), [a]D —38,8°; бензоат— т. пл. 131° (водный ацетон), [а]д—14° [314]; п-йодбензоат— т. пл. 166—^167,5° [8371.
М;
50
62
50
№
250
350
Масс-спектр десмостерина [305].Масс-спектр десмостерина [305].
Масс-спектр десмостерина [305].
Масс-спектр десмостерина [305].
Фукостерин. Выделен Heilbron с сотрудниками в 1934 г. [396] из бурых водорослей. Т. пл. 124° (метанол), [а]д —38,42° (хлороформ).
Ацетат — т. пл. 118— 119° (метиловый спирт — этилацетат), [а]д—438° (хлороформ).
Холеста-2,4,6-триен. Получен в 1938 г. [307], способ получения описан в [804, 89].Т. пл. 72° (иглы, эфир — ацетон), [аЙ —13,8° (хлороформ); УФ-спектр (этанол): Хмакс 306 нм, е 15 100 [8041, 15 700 [681.
Холеста-4,6,8(14)-триен. Способ получения описан в работах [443, 40]. Т. пл. 87—89° (тонкие иглы, ацетон), [а]д +312° (хлороформ) 1443]; [а]д +302 [40]. УФ- спектр: Хмакс 284 нм, е 33 100 [443], 32 800 [40].
Холеста-3,5,7-триен. Получен в 1951 г. [352] при расщеплении эфиров 7-дегидро- холестерина н-амилатом натрия. Т. пл. 67—69° (иглы, ацетон), [а]д —122,4° (хлороформ). УФ-спектр (этанол): Хмакс 302,5; 315; 330 нм; е 12 580, 15 720, 11 120.
ФОТОИЗОМЕРЫ
Превитамин-2(прекаль- циферол-2). Описан в 1949 г. Velluz и др. [895]. Бесцветное масло; [alo +43 ± 1° (бензол) 1898]. УФ- спектр (этанол): Хмакс 260 нм, 8 9140 [834]. Данные ЯМР-спектра приведены в работе [246].
1111111 — ■1
3600 5400 32003000 2800 1800 1600140012001000600 V,см
ИК-спектр превитамина-2.
3,5-Динитробензоат— т. пл. 103—104° (бледно-желтые иглы, лигроин), [аЬ +30° (бензол), +45° (хлороформ) [898].
Превитамин-3 (прекальциферол-3). Описан в 1949 г. Velluz и др. [8971. Бесцветное масло, [alo +40 ± 1° (бензол) [898]. УФ-спектр (этанол): Хмакс 260 нм, е 9250 [311].
3,5-Динитробензоат — т. пл. ПО—111° (бледно-желтые иглы, метил- этилкетон), [ale +38° (бензол), +52° (хлороформ) [8981.
ИК-спектр превитамина-3.ИК-спектр превитамина-3.
ИК-спектр превитамина-3.
ИК-спектр превитамина-3.
25-Оксинрекальциферол-З (9,10-секохолеста-5( 10),6-уис-8-триен-Зр, 25- диол). Получен в 1969 г. [196]. УФ-спектр: Хмакс 256 нм, е 8300. ЯМР-спектр (CDC13, 6, м. д.): 0,71 (18-СН3, ЗН), 0,97 д (21-СН3, ЗН), 1,20 (26- и 27-СН3, 6Н), 1,63 (19-СН3, ЗН), 3,90 м (3-Н, 1Н), 5,54 (9-Н, 1Н), 5,78, 5,89 и 6 10 (6- и 7-Н, 2Н). Масс-спектр, т/е: 400 (М+), 385, 382, 380, 376, 154, 136, 118.
зр-Фторпрекальциферол-3. Получен в 1976 г. [971. Бесцветная смола, 1а]д’5 4-39,1° (хлороформ). УФ-спектр (этанол): Хмакс 261 нм, е 8860.
i1ч$-111111
3400 3200 3000 2800 1800 1600 14001200 1000 ЗООЛОГ
ИК-спектр ЗР-фторпрекальциферола-З.
Люмистерин-2. Получен Windaus с сотрудниками в 1932 г. [957, 9581. Т. пл. 118° (иглы, ацетон — метанол, метанол) [958, 900], 120—12Г [8151;
[аЬ +191 (ацетон) [958, 900]. УФ- спектр (этанол): А,макс 265, 279, 292 нм, е 8000, 8650, 3800 [9581; А,маКс 272,5, 278,5, 294 нм, 8 9400, 8880, 4300 [9001; Хмакс 272 нм, е 9440 [834].
3,5-Динитробензоат — т. пл. 141— 142° (бледно-желтые иглы, ацетон — метанол), [а]р +14° (бензол) [900].
Люмистерин-3. Получен Windaus с сотрудниками в 1938 г. [972]. Т. пл. 87—88° (иглы, ацетон), 63—64° (метанол), [alp +197° (хлороформ) [9721. УФ-спектр: Хмакс 271,5 нм, 8 9250.
Эфиры: ацетат — т. пл. 131—132° (пластинки, ацетон; иглы, метанол), [alp +142° (хлороформ) [9721; 3,5-динитробензоат — т. пл. 131° (иглы, бензол — спирт), [а!д +20° (хлороформ) [972, 9001.
Тахистерин-2. Получен Windaus с сотрудниками в 1932 г. [959]. Бес-
цветное масло, [а]д —70° (бензин). УФ-спектр е 29 550 [8341; Хмакс 281 нм, е 24 600 [472].
Эфиры [8151: 3,5-динитробензоат — т. пл. 129—131°; УФ-спектр (этанол): А,макс280нм, е 30 270; 4-метил-3,5-динитробензоат — т. пл. 155—156°; УФ-спектр (этанол): Хмакс 280 нм, е 29 930.
Аддукт ацетата тахистерина с цитраконовым ангидридом — т. пл. 161—162° (иглы, уксусная кислота) [4591, 164°, [а]™+75® (хлороформ) [9001;
продукт присоединения ацетата тахи- сгерина и диметилового эфира ацетилендикарбоновой кислоты — т. пл. 137° [360].
(этанол); Хмакс 280 нм,
Тахистерин-3. Получен Windaus с сотрудниками в 1938 г. цветное масло, [а]д —11,5° (бензин). УФ-
4-Метил-3,5-динитробензоат —
т.
пл. 137е (ацетон — метанол, эфир — метанол), [а]д +40,4® (хлороформ) [972].
и-тахистерин-2. Получен Inhoffen с сотрудниками в 1955 г. [472]. Желтое масло. УФ-спектр (эфир): А,макс 275—277, 285, 296 нм; 8 28 150, 35 300, 26550.
[972]. Бес-
Пирокальциферол-2 (9а-люмисте- рин-2). Получен в 1931 г. [119]. Т. пл. 92—94° (водный ацетон) [118, 815], 94—95® [654, 1921; Ы!? +495° (абсолютный этанол) [118, 815], +502° (спирт) [119], +512° [192]. УФ-спектр: Хмакс 274, 284,5, 296 нм; в 10 300, 10 850, 6400 [815].
Эфиры: ацетат — т. пл. 81—83е
(эфир — метанол), [а]д +403° (хлороформ) [6541; 3,5-динитробензоат — т. пл. 167,5—169,5° [1181, 170—171° [192]; [al^j +250° (бензол) [118], [сс!^ +195°, laHUi +239° [192].
Пирокальциферол-3. Получен Windaus с сотрудниками в 1938 г. [975]. Маслообразный продукт. Эфиры: ацетат — т. пл. 121° [975]; 3,5-динитробензоат — т. пл. 142°, [а]д +221°; п-нитробензоат — т. пл. 93°.
Изопирокальциферол-2. Получен Busse в 1933 г. [192]. Т. пл. 112— 115° (призмы, эфир—метанол) [192], 112—116° [815]; [а]д +332° (хлороформ) [192]. УФ-спектр: А.макс 274, 284, 295 нм, е 10 380, 10 300, 6400. Апе- тат —т. пл. 113—115° (листочки.
эфир — метанол), [а]д +333° [192].
Изопирокальциферол-2 образует молекулярное соединение (1: 1) с пирокальциферолом (т. пл. 122—124° (иглы, ацетон), [ala +300° [192]) и люмистерином [591].
Изопирокальциферол-3. Описан в 1938 г. Windaus с сотр. [9751. Спирт и ацетат в кристаллическом виде не получены. 3,5-Динитробензоат — т. пл. 170°, [аЬ +318°; ч-нитробензоат — т. пл. 150°.
Фотопирокальциферол-2. Получен Dimroth в 1937 г. при облучении УФ-светом пирокальциферола-2 [2721. Строение установлено в 1959 г. Dau- ben и др. [232]. Т. пл. 104—105°, [alo +52° (хлороформ) [232]. 3,5-Динитробензоат—т. пл. 162° (иглы, ацетон) [272].
Фотоизопирокальциферол-2. Получен Dimroth в 1937 г. при облучении УФ-светом" изопирокальниферо- ла-2 [272]. Строение установлено в 1957 г. Dauben и др. [230]. Т. пл. 76— 80° (спирт) [272], 81—82°; [«L —11,5° (хлороформ) [232].
Супрастерин-2 I. Описан Windaus с сотрудниками в 1930 г. [951]; продукт переоблучения эргостерина. Т. пл. 104° (иглы, ацетон, при —75°), [alo —76° (хлороформ) [951].
Эфиры: аллофанат — т. пл. 225—226°, [а1д—58,4° (хлороформ) 1916]; ацетат — т. пл. 73—74°(иглы, метанол), [а)а—71° (хлороформ) [814]; бензоат— т. пл. 96° (ацетон), [а]д—50° [9511; 3,5-динитробензоат — т. пл. 154°, [ala +32° (хлороформ) [898].
Супрастерин-3 I. Описан Boomsma [175] в 1975 г. Маслообразное ве- шество. УФ-спектр: не имеет максимума поглощения в области 210—350 нм. ИК-спектр (КВг): 3430, 3020, 2940, 2920, 2860, 1620, 1470, 1380, 1280, 1260,
1205,1060,1050,1030и885сма. ЯМР-спектр (CDC13, 6, м. д.): 0,78 с (18-СН3, ЗН), 0,88 д (26- и 27-GH3, J6 Гц, 6Н), 0,94 д (21-СН3, J6 Гц, ЗН), 3,96 м (3-Н, 1Н).
3,5-Ди нитробензоат — т. пл. 139—140°,
[а]д —25° (хлороформ).[а]д —25° (хлороформ).Супрастерин-2 И. Описан Windaus с сотр. [951] в 1939 г. Т. пл. 110° (ацетон, метанол), [ala +62,9° (хлороформ).
[а]д —25° (хлороформ).
[а]д —25° (хлороформ).
Эфиры: аллофанат — т. пл. 224° (иглы),
[alo +80° (хлороформ); оксалат — т. пл. 165° (auei^»), 1-=^ +75,3d (хлороформ) [9511; 3,5-динитробензоат--т- пп. 1б0—181°, [a]D —11° (хлороформ) [898].
Супрастерин-3 II. Описан Boomsma [1751 в 1975 г. Маслообразное вещество. УФ-спектр: не имеет максимума поглощения в области 210—350 нм. ИК-спектр: 3340, 3020, 2940, 2920, 2860, „ с сн 1630, 1550, 1470, 1360, 1340, 1280, 1160, 3 3
1045, 910, 850, 735 и 680 см-1. ЯМР-спектр (CDC13, 6,м.д.): 0,81 с (18-СН3, ЗН), 0,88 д
(26- и 27-СН3, J 6 Гц, 6Н), 0,93 д (21 -СН3, I J1 J 6 Гц, ЗН), 4,04 м (З-Н, 1Н).
3,5-Динитробензоат — т. пл. 128—130е,н~7 \ "Н
[а]д +100° (хлороформ).
Токсистерин А. Выделен Westerhof и .••\/ др. [938] в 1956 г., идентифицирован Во- но omsma [1741. Т. пл. 94,5—96,5е, [а]д—100°НзС‘■.
(хлороформ). УФ-спектр: Хмакс 251 нм;снзГ ' Т
е 15 000 [175]. Данные ИК- и ЯМР-спект-СНз
ров см. в [175].ОН I |
■ Эфиры: 3,5-динитробензоат — т. пл. '. •. /X:
171,5—172° (желтые иглы, ацетон—метанол); 4-фенилазобензоат — т. пл. 125,5— 126,5° (оранжевые иглы, ацетон — метанол) [938].
ХОЛЕСТЕРИН, ЕГО ИЗОМЕРЫ И ПРОИЗВОДНЫЕ
Холестерин. Открыт Шеврелем в 1812 г. [68]. Т. пл. 149еХолестерин. Открыт Шеврелем в 1812 г. [68]. Т. пл. 149е(этанол), [ala —39° (хлороформ).u „
Холестерин. Открыт Шеврелем в 1812 г. [68]. Т. пл. 149е
Холестерин. Открыт Шеврелем в 1812 г. [68]. Т. пл. 149е
Эфиры:1-3
ацетат — т. пл. 116°, [а]д—47°
(хлороформ) [68];СНз|)
бензоат — т. пл. 149—150°, про-
зрачный при 182° (пластинки, хлоро
форм — ацетон), [а]о—17,1° (хлоро
форм) [793];.
3,5-динитробензоат — т. пл. 196—198° [886], 192—195° [681;
формиат — т. пл. 96°, [а]д —52° (хлороформ) [68];
стеарат — т. пл. 82°, [а]д —24° (хлороформ) [68У,
сукцинат — т. пл. 175° [681;
-тозилат— т. пл. 132° (ацетон), [a]D —3,6° [681;
эфиры разветвленных, ненасыщенных и галогензамещенных алифатических карбоновых кислот описаны в [511.
ИК-спектр холестерина.
ИК-спектр 3,5-динитробензоата холестерина.
[а]о 0°; бензоат — т. пл.[а]о 0°; бензоат — т. пл.Холест-7-ен-Зр-ол (латостерин).
[а]о 0°; бензоат — т. пл.
[а]о 0°; бензоат — т. пл.
Получен при гидрировании 7-дегид- рохолестерина [797]. Т. пл. 123—125° (водный ацетон) [319], 125—126°, [alo +5,7° (хлороформ) [321], [а]д
0° [68].
Эфиры:
ацетат — т. пл. 118—119° (иглы, метанол), 157—158°, прозрачный при 176° (метанол); [alo +7°.
1II4 5-1I!1II ■ -
5600 5400 5200 5000 2800 18)0 1600140012001000 бОО^см'*-
ИК-спектр латостерина.
-586
so-|
: У 69I. ।
Щ—IА», LJl
Я150250550
Холест-5-ен-la-ол. Получен в 1974 г. [639]. Т.Холест-5-ен-la-ол. Получен в 1974 г. [639]. Т.пл. 102—103° (95%-ныйпл. 102—103° (95%-ныйМасс-спектр латостерина [305].
Холест-5-ен-la-ол. Получен в 1974 г. [639]. Т.
Холест-5-ен-la-ол. Получен в 1974 г. [639]. Т.
пл. 102—103° (95%-ный
пл. 102—103° (95%-ный
этанол). ЯМР-спектр (CDC13, 6, м. д.): 0,86 д (26- и 27-СНз, J 6 Гц, 6Н), 0,92 д (21-СНз, J 5 Гц, ЗН), 3,74 (lp-H, 1Н), 5,66 (6-Н, 1Н).
Ацетат — т. пл. 69—70° (95%-ный этанол). ИК-спектр: Хмакс 1770 см-|^С=оУ
Холест-5-ен-1а,зр-диол. Получен в 1971 г. [634]. Т. пл. 138—140° (ацетон) [634], 152—155° («-гексан — ацетон) [646], 157—159° (ацетон) [342], 162—163° [134]; [a]D —22° [634],—32° [342], —38° [134], —39° (хло
роформ) [646].
ЯМР-спектр (CDC13, 6, м. д.): 1,01 с (3-Н, 1Н), 3,8м, 3,9м и 5,55м (1-Н, 1Н) [646].
Эфиры: ЗР-ацетат—т. пл. 166— 168° (ацетон), [а]о —41° [634]; диацетат— т. пл. 98—100° (метанол) [634], 98—99° (этанол) [342], [a]D —15° [634].
дибензоат — т. пл. 152,5—153° 155° (ацетон — метанол) [804]; [а1ддибензоат — т. пл. 152,5—153° 155° (ацетон — метанол) [804]; [а1дИК-спектр ЗР-бензоата 7а-окснхолестерина.ИК-спектр ЗР-бензоата 7а-окснхолестерина.
дибензоат — т. пл. 152,5—153° 155° (ацетон — метанол) [804]; [а1д
дибензоат — т. пл. 152,5—153° 155° (ацетон — метанол) [804]; [а1д
ИК-спектр ЗР-бензоата 7а-окснхолестерина.
ИК-спектр ЗР-бензоата 7а-окснхолестерина.
Холест-5-ен-30,4а-Диол. Т. пл. 223° (ацетон) [325], 211—215° [513]; [а]р —25° (хлороформ) [325], —22° [513]. Диацетат — т. пл. 163° (ацетон, метанол), [а]р —18° (хлороформ) [3251.
Холест-5-ен-Зр,4р-диол. Способ получения описан в работе [772]. Т. пл. 176—177°(иглы, ацетон, 85%-ный этанол), [а]р —60° [772, 711 ], [а]^,. —71° (хлороформ) [702], [а1у —65° [513].
Эфиры:
ЗР-ацетат— т. пл. 187—190° (ацетон — хлороформ) [702], 194° [68]; [alo —60° [702], [a]D —65° [68].
4р-ацетат — т. пл. 165° (ацетон), [а]о —89° [68];
Зр,4р-диацетат — т. пл. 168—169°
(уксусная кислота, хлороформ — ацетон) [830, 702], 169—170° [772]; [a]D —93° [702], —96,1° [772];
Зр-бензоат— т. пл. 153—154°, [a]r> —27,8° [830];
ЗР,4Р-дибензоат — т. пл. 151° (этилацетат — метанол); [a]D —54° [830].
Холест-5-ен-Зр,7а-диол (7а-окси- холестерин). Т. пл. 157° (метанол) [989], [а]0 —87,6° (хлороформ) [990].
Эфиры:
диацетат — т. пл. 110° (петролей- ный эфир), [а]д +54° [7781;
Зр-бензоат — т. пл. 168° [68], 165—167° (призмы, ацетон) [794]; [а]д —50° [793];
(иглы, эфир — метанол) [794], 154— —115° (хлороформ') [794].
Холест-5-ен-Зр,7р-диол (7р-оксихолестерин). Т. пл. 178° [968], [a]D + 7° (хлороформ) [990].
Эфиры:
диацетат — т. пл. 124° (ацетон), [a]D —175° (хлороформ) [778];
Зр-бензоат—т. пл. 189—190° (иглы, ацетон) [794], 190—190,5°[793],
стеарат — т. пл. 71—75° (этанол)стеарат — т. пл. 71—75° (этанол)
стеарат — т. пл. 71—75° (этанол)
стеарат — т. пл. 71—75° (этанол)
192,5° (иглы, этанол) [368]; [а]д +12° [794], +13,5° [793], +14° (хлороформ) [68];
дибензоат — т. пл. 170—171° (иглы, ацетон) [793], 172—173° (эфир — метанол) [765, 794]; [а]д +94° (хлороформ) [793];
Холест-5-ен-Зр,25-диол (25-оксихолестерин). Т. пл. 177—179° (метанол) [226], 178—180° (метанол) [136, 699], 179—183° (ацетон) [196], 181,5—182,5°
(метанол) [779]; [а]д —38,6° (хлороформ) [699, 226], [а]д —39,3° [779].
ИК-спектр (хлороформ) [699]: 3620 (ОН), 1050, 1020, 960, 930, 910 см-1.
ЯМР-спектр (CDC13, 6, м. д.) [699]: 0,67 с (18-CHg, ЗН), 1,00 с (19-СН3, ЗН), 1,19 с (26- и 27-СНз, 6Н), 3,48 м
(=СН—О—), 5,33 м (6-Н, 1Н).
Эфиры: Зр-ацетат— т. пл. 142—142,8° (ацетон), [а]д—40,4° [779], —42,1° (хлороформ) [2261; ИК-спектр (хлороформ) [699]: 3620 (ОН), 1725
(С=О), 1265 и 1035 см *; ЯМР-спектр (CDC13, 6, м. д.) [699]: 0,67 с (18-СН3, ЗН), 1,00 с (19-СН3, ЗН), 1,20 с (26- и 27-СН3, 6Н), 2,01 с (СН3СО), 4,55 м (=СН—О—), 5,36 м (6-Н, 1Н); диацетат — т. пл. 119—120° (метанол) [168].
УФ-спектр: Хмакс 235 нм, е 10 960 (эфир — метанол), [а]д —128 ± 9° 9333 [5951; Зр,4р-дибензоат — т. [alo—47,4°; УФ-спектр: Хмакс 232УФ-спектр: Хмакс 235 нм, е 10 960 (эфир — метанол), [а]д —128 ± 9° 9333 [5951; Зр,4р-дибензоат — т. [alo—47,4°; УФ-спектр: Хмакс 232
УФ-спектр: Хмакс 235 нм, е 10 960 (эфир — метанол), [а]д —128 ± 9° 9333 [5951; Зр,4р-дибензоат — т. [alo—47,4°; УФ-спектр: Хмакс 232
УФ-спектр: Хмакс 235 нм, е 10 960 (эфир — метанол), [а]д —128 ± 9° 9333 [5951; Зр,4р-дибензоат — т. [alo—47,4°; УФ-спектр: Хмакс 232
Холест-5-ен-1 а, 3 р, 25-триол (1 а, 25- диоксихолестерин). Т. пл. 161—163° [774], 162—164° (этилацетат) [6651, 171—173°, затвердевает и снова плавится при 178—179° [1351; [а] о—29° [774], —35° [135], [а]д —36,9° [665]. Данные ЯМР-спектра приведены в работах [665, 135].
Холест-5-ен-Зр,4р,7а-триол [595].
Т. пл. 195—197° (ацетон), [a]j —102 ± 2° (хлороформ).
Эфиры:
ЗР-ацетат— т. пл. 174,5—176° (метанол, ацетон, эфир); [alo —106 ± 2° (хлороформ); триацетат — т. пл. 172 — 173,5° (ацетон), [а]д —175° (хлороформ); трибензоат — т. пл. 158,5— 159,5° (эфир — метанол), [а]ц —79,7° (хлороформ).
Холест-5-ен-Зр,4р-диол-7-он. Т. пл. 205—206° (ацетон), [а]д —71,4° (хлороформ); УФ-спектр: Хмакс 238 нм, е 9120 [713].
Эфиры: Зр-ацетат — т. пл. 197— 201° (ацетон), [alo—77,8°(хлороформ); [595]; Зр,4Р-диацетат — т. пл. 215—225° (хлороформ); УФ-спектр: Хмакс 231 нм, е пл. 144— 144,5° (призмы, этанол), нм, е 37 150 [595].
Холест-5-ен-Зр-ол-7-он (7-кетохо- лестерин). Получен в 1935 г. Windaus с сотр. [962]. Т. пл. 157° [68], 173°; [alo —103°; УФ-спектр: Хмакс 238 нм, е 15 500 [799, 987].
ИК-спектр 7-кетохолестерина.
Эфиры: ацетат — т. пл. 164 (метанол) [68], 157—159° [140, 992]; [а]д —ЮЗ ± Г [992], —97° [1401; УФ-спектр (этанол): Хмакс 235 нм,
е 12 400 [234], 12 050 [992]; бензоат — т. пл. 160—161°, прозрачный при 178° (иглы, н-гексан) [633].
Холест-5-ен-З-он. Т. пл. 126—129° (призмы, ацетон) [324, 325]; [а]о —2,51 (хлороформ) [324].
Холест-4-ен-З-он. Т. пл. 81—82° (длинные иглы, ацетон); [а]у +92° (хлороформ) [324].
ЗР-Фторхолест-5-ен. Т. пл. 97— 98° (спирт) [653], 94—95°; [а]о —50° (хлороформ) [178].
Зр-Хлорхолест-5-ен. Т. пл. 95° (призмы, ацетон), [а]о —27,4° [150].
Зр-Бромхолест-5-ен« Т. пл. 98° (ацетон), [а1д —20,8° [150].
3|$-Йодхолест-5-ен. Т. пл. 106,5—107° (иглы, этилацетат), [а]д—11,94° [150].
7а-Бромхолест-5-ен-30-ол (7а-бромхолестерин). Эфиры: ацетат — т. пл. 109—110° (петролейный эфир), [alo —245° (хлороформ) [153]; бензоат — т. пл. 143—144°, разложение (иглы, хлороформ — ацетон; кристаллы, бен-
зС-■зин)> [“^—186° (хлороформ),—156°
снТ , (бензин) 1793,794}; УФ-спектр (эфир):
СНз ^макс 229 нм, е 24 400; тозилат — /xjX J1т. пл. 109—110°, [а$ —202° (петро-
।лейный эфир) [793].
ROВгROВг2020।1 /1_1III।।115200 3000 2800 18001600 14001200 1000 800600400 V, си1ИК-спектр бензоата 7а-бромхолестерина.।1 /1_1III।।115200 3000 2800 18001600 14001200 1000 800600400 V, си1ИК-спектр бензоата 7а-бромхолестерина.
ROВг
ROВг
20
20
।1 /1_1III।।11
5200 3000 2800 18001600 14001200 1000 800600400 V, си1
ИК-спектр бензоата 7а-бромхолестерина.
।1 /1_1III।।11
5200 3000 2800 18001600 14001200 1000 800600400 V, си1
ИК-спектр бензоата 7а-бромхолестерина.
7р-Бромхолест-5-ен-Зр-ол (7р- бромхолестерин). Получен в 1951 г. Schaltegger и др. [794] в виде бензоата. Бензоат— т. пл. 114—115° (петро- лейный эфир), [а]д +20° (бензин) 1794].
5а, 60-Дибромхолестан-Зр-ол (5а, 60-дибромхолестерин). Т. пл. 112— 114°, разложение (этилацетат — метанол); [а]о—44° (хлороформ) [132].
Эфиры: ацетат — т. пл. 112—114° (разложение), [а]д —46° (хлороформ) [132]; бензоат.— т. пл. 137—138° (иглы, хлороформ — ацетон), [а]д —40° [793]. ■
4-Бромхолест-5-ен-Зр-ол-7-он. Способ получения бензоата описан в работе [88]. Т. пл. 193° (бензол — ацетон), [а]д —75,7° (хлороформ). УФ- спектр (гексан): Амакс 230 нм, е 26 600.
Литература
Ахрем А. А., Решетова И. Г., Титов ТО. А. Фторстероиды.— Успехи химии, 1965, 34, № 12, с. 2171—2205.
Ахрем А. А., Титов Ю. А. Полный синтез стероидов. М., «Наука», 1967, с. 232—236.
Бауман В. К. Современная концепция механизма действия и метаболизма витамина D у животных.— Прикл. биохимия и микробиология, 1972, 8, № 2, с. 131 —140; 1976, 12, № 6, с. 805—818.
Березовский В. М. Химия витаминов. М., «Пищ. пром-сть», 1973, с. 97—139.
Богословский Н. А., Шнайдман Л. О., Кузнецова Е. Н. Тонкослойная хроматография витамина D2 на адсорбенте с азотнокислым серебром.— Мед. пром-сть СССР, 1965, № 11, с. 41—43.
Богословский Н. А., Майрановский В. Г., Кузнецова Е. Н. Полярографический способ определения витамина D2 в продуктах облучения эргостерина.— Хим.-фармацевт, журн., 1968, 2, № 5, с. 39—42.
Богословский Н. А., Леши Ш. С. Способ получения ацетата 5,8-эпидиокси-бис-норхо- лен-6-ол-ЗР-аля-22. А. с. №341311, 1974.— РЖХим, 1975, 4О132П.
Богословский Н. А., Леви Ш. С., Евстигнеева Р. П., Самохвалов Г. И. Исследование в ряду витаминов группы D. Синтез метилового эфира ЗР-ацетоксигомохола-5,7-диен- 25-овой кислоты.— Журн. общ. химии, 1975, 45, №4, с. 925—928.
Богословский Н. А., Леви Ш. С., Евстигнеева Р. П., Лазарева Н. П., Петрова Э. Л. Синтез витамина D3 из эргостерина.— Хим.-фармацевт, журн., 1974, 8, №6, с. 44—48.
Богословский Н. А., Сворень В. А., Кустанович И. М., Кузнецова Е. Н. Получение ди- гидротахистерина из дигидровитамина D2-II.— В кн: Химия, биология и технология
: производства витаминов D, их применение в медицине и животноводстве. К., 1972, с. 85—86.
Богословский Н. А., Литвинова Г. Е., Самохвалов Г. И. Способ получения 1,4-циклоаддукта ЗР-ацетокси-23,24-бис-норхол-6-еналя. А. с. № 463662, 1975.—Бюл. изобрет., 1975, № 10, с. 56.
Букин В. Н., Ерофеева Н. Н. Биологический метод определения и результаты испытания рыбьих жиров и других продуктов морского промысла на витамин D.— В кн.: Витаминные ресурсы и их использование. Сб. 1. М., 1951, с. 250—265.
Букин В. Н. Аппарат для облучения при производстве витамина D.— В кн.: Витаминные ресурсы и их использование. Сб. 1. М., 1951, с. 278—282.
Бхакка Н., Уильямс Д. Применение ЯМР в органической химии. М., «Мир», 1966. 243 с.
Вендт В. П. Методы количественного определения жирорастворимых витаминов А, D2, D3 и Е.— В кн.: Витамины. Вып. 1. К., 1953, с. 7—29.
Вендт В. П., Коник М. А., Лопотько Н. В. Способ превращения провитаминов группы D в витамины D. А. с. № 102762, 1956.— Бюл. изобрет., 1956, № 3, с. 10.
Вендт В. П. Реакция Л. А. Чугаева на стерины.— Вопр. мед. химии, 1956, 2, № 3, с. 210—213.
Вендт В. П. О применении новых источников ультрафиолетового излучения для фотохимического превращения 7-дегидрохолестерина в витамин D3.— В кн.: Витамины. Вып. 3. К., 1958, с. 44—49.
Вендт В. П., Дрокова И. Г. Способ получения комплексов белков с биологически активными веществами липоидной природы. А. с. № 104990, 1957.— Бюл. изобрет., 1957, № 1, с. 13.
Вендт В. П., Дрокова И. Г. Искусственные комплексы белков с витаминами A, D2, П3иЕ,иих получение и некоторые свойства.— В кн.: Витамины. Вып. 2. К-, 1956, с. 25—29.
Вендт В. П. Искусственный комплекс витамина D3 с казеином, его свойства и применение в птицеводстве.— В кн.: Витаминные ресурсы и их использование. Сб. 6. М., . 1963, с. 193—196.
Вендт В. П., Курченко Л. К.» Яхимович Р. И. Способ получения 7-дегидрохолестеринбензоата. А. с. № 322326, 1971.— Бюл. изобрет., 1971, № 36, с. 51.
Вендт В. П., Яхимович Р. И., Богуславский В. А., Богословский Н. А. Превращение провитаминов D под влиянием различных источников ультрафиолетового излучения.— В кн.: Химия, биохимия и технология производства витаминов D, их применение в медицине и животноводстве. К-, 1972, с. 80—81.
Вендт В. П., Яхимович Р. И., Богуславский В. А., Ярошенко Я- Ф-> Лопотько Н. В., Кухаренко Н. В. Совершенствование способа получения 7-бромхолестеринбензоата.— Хим.-фармацевт, журн., 1973, 7, № 5, с. 45—47.
Вендт В. П., Лукьянова Е. М., Хохол И. Н. Видеин-3 — новый антирахитический препарат холекальциферола, его свойства и применение для профилактики и лечения рахита у детей. К-, «Наук, думка», 1974. 47 с.
Вендт В. П., Яхимович Р. И., Богуславский В. А. Фотохимическая изомеризация провитаминов D при эритемном облучении.— Материалы 3-го конгр. «Химия в сельском хозяйстве». Братислава, 1975.
Гаркина И. Н., Букин В. Н. Химический метод определения витамина D.— В кн.: Витаминные ресурсы и их использование. Сб. 3. М., 1955, с. 22—52.
Гаркина И. Н. Хроматографический метод разделения провитаминов и витаминов D.— В кн.: Витаминные ресурсы и их использование. Сб. 3, М., 1955, с. 53—73.
Гиллем А., Штерн Е. Электронные спектры поглощения органических соединений. М., Изд-во иностр, лит., 1957. 387 с.
Гируштин Г. Г., Яхимович Р. И. Исследование процесса бромирования эфиров холестерина.— Материалы совещ. по химии и биохимии витаминов D и их применение в медицине и животноводстве. К-, 1968, с. 12.
Говсеева Н. Н., Фурсаева Н. Ф. Исследование биологических свойств одного из продуктов фотоокисления 7-дегидрохолестерина.— В кн.: Химия, биохимия и технология производства витаминов D, их применение в медицине и животноводстве. К-, 1972, с. 25—27.
Говсеева Н. Н., Вендт В. П. Антирахитическая активность люмистерина-3.— Прикл. биохимия и микробиология, 1974, 10, №2, с. 328—329.
Витамины A, D, Bt, В2, РР и С. Отбор проб и методы определения качества витаминных препаратов. ГОСТ 11222—65. 1965, с. 8—16.
Девяткин В. А., Солунина И. А., Кузнецова Л. А. Адсорбционный метод определения эргокальциферола в облученных растворах эргостерина,— Мед. пром-сть СССР, 1962, № 4, с. 30—33.
Девяткин В. А. Методы химического анализа в производстве витаминов. М., «Медицина», 1964, с. 248—258.
Ерофеева Н. И. Биологический метод определения D-витаминной активности («проба на черту»),— В кн.: Витаминные ресурсы и их использование. Сб. 3. М., 1955, с. 74—81.
Ефремов В. В. О потребности человека в витамине D.— Химия, биохимия и технология производства витаминов D, их применение в медицине и животноводстве. К., 1972, с. 3.'-
Климашевский В. М., Яхимович Р. И., Вендт В. П. Биологическая активность ЗР- фтор-9,10-секохолестатриена-5,7,10 (19)—фторированного аналога витамина D3.—' Укр. 6ioxiM. журн., 1974, 46, № 5, с. 627—630.
Кремнев О. А., Сатановский А. Л., Процишин Б. Н., Ярошенко Я- Ф-. Иванов В. Н., Богословский Н. А., Левит Б. А. Устройство для ультрафиолетового облучения жидкостей. А. с. № 411885, 1973.— Бюл. изобрет., 1974, № 3, с. 26.
Курченко Л. К-, Яхимович Р. И. Определение некоторых стеринов — продуктов синтеза витамина D3 — методом тонкослойной хроматографии.— Укр. 6ioxiM. журн., 1974, 46, № 3, с. 398—402.
Леви Ш. С., Богословский Н. А., Евстигнеева Р. П., Самохвалов Г. И. Синтез ацетата холест-7-ен-ЗР,5а-диола из перекиси эргостерина.— Журн. общей химии, 1974, 44, № 11, с. 2596.'
ЛевчукЮ. Н. Инфракрасные спектры стероидов.— Успехи химии, 1968, 37, № 2, с. 324— 352.
ЛевчукЮ. Н., Яхимович Р. И. Характеристические инфракрасные частоты бензоильной группы 3-бензоатстеринов.— Журн. прикл. спектроскопии, 1969, 11, № 5, с. 909—912.
Лопотько Н. В., Остринская Н. Б., Яхимович Р. И. Определение витамина D3 в масляных растворах с помощью тонкослойной хроматографии.— В кн.: Технология производства и химия витаминов и витаминных препаратов. М., 1975, с. 31—35 (Сб. трудов ВНИВИ, № 9, Ч. 2).
Майрановский В. Г., Самохвалов Г. И. Полярографическое восстановление витаминов А и D.— Журн. Всесоюз. хим. о-ва им. Д. И. Менделеева, 1964, 9, № 3, с. 358—359.
<6. Майрановский В. Г., Самохвалов Г. И. Полярографический метод определения витаминов А и D.— Рефераты докл. и сообщ. 9-го Менделеевского съезда. Секция аналит. химии. М., 1965, с. 68.,
Майрановский В. Г., Самохвалов Г. И. Полярография сопряженных систем в диметил- формамиде. I. Витамин D и родственные соединения.— Электрохимия, 1965, 1, № 6, с. 996—1000.
Майрановский В. Г., Богословский Н. А., Самохвалов Г. И. Полярографическое изучение веществ, образующихся при получении витамина D2 из эргостерина.— Мед. пром-сть СССР, 1966, № 2, с. 39—43.
Майрановский В. Г., Самохвалов Г. И. Улучшенный метод полярографического определения кальциферолов в присутствии ретинола.— Журн. аналит. химии, 1966, 21, № 2, с. 210—213.
Майрановский В. Г. Полярография витаминов A, D и незаменимых ненасыщенных жирных кислот.— В ки.: Витамины и витаминные препараты. М., 1973, с. 210—231.
МакитраР.Г.,Циканчук Я- М. Холестериновые эфиры разветвленных, ненасыщенных и галогензамещенных алифатических карбоновых кислот.— РЖХим 11Ж561деп, 1974.
Мачинская И. В., Бархат В. А. Бромирование органических соединений N-бромсук- цинимидом (реакция Воля — Циглера).— В кн.: Реакции и методы исследования органических соединений. Кн. 9. М., 1959, с. 287—381.
Миллер Э. А., Селезнев Л. Г., Аксенович А. В., ДрокЗ. Я., Семенова Г. Н., Белова Н. В., Великосельцева А. Г. Получение эргокальциферола (витамина D2) из его 3,5-диннтробен- зоата.— Хим.-фармацевт, журн., 1974, 8, № 12, с. 34—35.
Милосердова А. Г., Петрова Э. А., Никуличева С. И., Лазарева Н. П., Богословский Н. А., Неугодова Н. П. Сравнительное исследование антирахнтической активности и гиперкаль- цемического эффекта эргокальциферола (витамина D2), холекальциферола (витамина D3) и дигидроэргокальциферола (витамина D4).— В кн.: Научные основы питания здорового и больного человека. Т. 1. Алма-Ата, 1974, с. 241—242.
Милосердова А. Г., Петрова Э. А., Неугодова Н. П., Богословский Н. А. Исследование биологических свойств эфиров эргокальциферола и холекальциферола.— Там же, с. 242—244.
Мищенко В. В., Шостаковская Г. К., Богословский Н. А., Гусаров А. Н., Майрановский В. Г. Спектрофотометрический анализ многокомпонентных смесей 3,5-динитробензоатов в производстве витамина D2.— Хим.-фармацевт, журн., 1976, 10, № 7, с. 136—141. т. с.
Николаев А. С., Зеленщикова А. В., Вендт В. П., Белявская В. В., Егорова Т. М. Устройство для получения препаратов витамина D. А. с. № 164935, 1964.— Бюл. изобрет., 1964, № 17, с. 29.
Петрова Э. А., Уланова Н, А. Химический метод определения витамина D в жирах, содержащих витамины А и D.-— Вопр. питания, 1965, 23, № 6, с. 57—60.
Петрова Э. А. Методы определения витамина D.— Фармация, 1969, 18, № 2, с. 79—82.
Петрова Э. А., Богословский Н. А., Гордеева Н. П. Биологическая активность эфиров эргокальциферола и холекальциферола.— Вопр. питания, 1971, 29, № 6, с. 19—21.
Салва Г., Яворска Р., Девенштейн В., Бури 3... Ведтке Я-. Едрзеюк Я-, Зарноска А. Способ выделения холекальциферола из смеси, полученной при облучении 7-дегидро- холестерина. А. с. № 233661, 1969.— РЖХим, 1969, 22Н421П.
Спиричев В. Б. Витамин D.— В кн.: Витамины. М., 1974, с. 89—124. 494 с.
Сыдыков Ж. С., Сегаль Г. М., Торгов И. В., Кошоев К- К. Синтез 2-дезоксианалогов руб- ростерона.— Изв. АН СССР. Сер. хим., 1975, № 3, с. 624—631.
Татьянин А. Р. Производство витамина D. М., Пищепромиздат, 1943.
Титов Ю. А., Левина И. С. Ультрафиолетовые спектры поглощения стероидных соединений.— В кн.: Реакции и методы исследования органических соединений. Т. 18. М., 1967.
Титова И. А., Майрановский В. Г. Способ получения дигидротахистерииа. А. с. № 424424, 1975.— Бюл. изобрет., 1975, № 35, с. 177.
Физер Л., Физер М. Химия природных соединений фенантренового ряда. М.— Л. Изд-во хим. лнт., 1953, с. 106.
Физер Л., Физер М. Стероиды. М., «Мир», 1964, с. 103—179, 375—376, 525.
Физер Л., Физер М. Реагенты для органического синтеза. Т. 1. М., «Мир», 1970, с. 407— 408.
Физер Л., Физер М. Реагенты для органического синтеза. Т. 6. М., «Мир», 1975, с. 311—312.
Холодова Ю. Д., Яхимович Р. И., Вендт В. П. Реакция Чугаева на стерины.— Вопр. мед. химии, 1976, 22, № 1, с. 122—126.
Чугаев Л. А. О новой цветной реакции холестерина.— Журн. Рус. физ-хим. о-ва, 1900, 32, № 5, с. 363.
Шнайдман Л. О. Производство витаминов. М., Пищепромиздат, 1958, с. 174—215.
Шнайдман Л. О. Производство витаминов. М., Пищ. пром-сть, 1973, с. 297—315/422— 431.
Яблонская Е. В., Сегаль Г. М. Синтез ацетата 7-дегидрохолестерииа.— Химия природ, соединений, 1973, № 6, с. 739—741.
Яблонская Е. В., Сегаль Г. М., Фишер П. Н. Выделение эргостерина из липидов дрожжей через комплекс с мочевиной.— Микробиол. пром-сть, 1973, № 9, с. 8—9.
Яворский Я■ 3., Вендт В. П., Яхимович Р. И. Фотопревращеиие 7-дегидрохолестери- на.— Материалы совещ. по химии и биохимии витаминов D и их применение в медицине и животноводстве. К., 1968, с. 42.
Янотовский М. Ц., Богословский Н. А., Кузнецова Е. //.Исследование стероидов в производстве витамина D2 методом газо-жидкостной хроматографии.— Хим.-фармацевт, журн., 1969, 3, № 1, с. 34—36.
Яхимович Р. И., Гируштин Г. Г., Яворский Я- 3. Пути синтеза провитамина D3.— Материалы совещ. по химии и биохимии витаминов D и их применение в медицине и животноводстве. К-, 1968, с. 42—43.
Яхимович Р. И., Недашковская Н. С. Аллильное бромирование эфиров холестерина 1,3-дибром-5,5-диметилгидантоином.— В кн.: Витамины. Вып. 6. К., 1971, с. 182— 187.
Яхимович Р. И., Курченко Л. К., Евтушенко Н. П. Дегидробромирование 7-бромхоле- стериибеизоата производными пиразолона.— Там же, с. 188—195.
Яхимович Р. И., Недашковская Н. С., Курченко Л. К-, Гируштин Г. Г. Способ получения 7-дегидрохолестерин бензоата. А. с. № 328087, 1972.— Бюл. изобрет., 1972, № 6, с. 63.
Яхимович Р. И., Фурсаева Н. Ф. Исследование химических и биологических свойств продуктов фотоокисления 7-дегндрохолестерииа.— В кн.: Химия, биохимия и технология производства витаминов D, их применение в медицине и животноводстве. К., 1972, с. 27—28.
Яхимович Р. И. Успехи в синтезе витамина D3.— Там же, с. 76—78.
Яхимович Р. И., Курченко Л. К. Дегидробромирование 7-бромхолестериибеизоата двууглекислым натрием.— Там же, с. 78—79.
Яхимович Р. И., Вендт В. П., Богуславский В. А., Лопотько Н. В., Ярошенко Я- Ф., Сирота Е. В., Кухаренко Н. В. Внедрение в производство способа получения 7-дегидро- холестериибеизоата.— Там же, с. 86—88.
Яхимович Р. И., Вендт В. П. Исследование химических и биологических свойств продуктов фотопревращеиия 7-дегидрохолестерина.— Материалы 2-го конгр. «Химия в сельском хозяйстве». Братислава, 1972.
Яхимович Р. И., Котляр Э. С., Курченко Л. К., Богуславский В. А. Аллильное бромирование бензоата холестерина. II. Анализ продуктов реакции.— Хим.-фармацевт, журн., 1973 , 7, № 6, с. 33—36.
Яхимович Р. И., Климашевский В. М. Синтез Зр-фторхолестадиеиа-5,7.— Укр. бюх1м. жури., 1974 , 46, № 1, с. 124—127.
Яхимович Р. И., Курченко Л. К Совершенствование стадий синтеза витамина D3.
Исследование реакции дегидробромироваиия бензоата 7-бромхолест-5-ен-Зр-ола.— Хим.-фармацевт, жури., 1974, 8, № 9, с. 22—24."
Яхимович Р. И., Вендт В. П., Богуславский В. А. Количественное определение витамина D3, 7-дегидрохолестерииа и его фотодериватов с помощью ТСХ.— Прикл. биохимия и микробиология, 1974, 10, № 6, с. 916—920.
Яхимович Р. И., Богуславский В. А., Вендт В. П. Способ получения люмистерина3. А. с. № 466219, 1975.— Бюл. изобрет., 1975, № 13, с. 52.
Яхимович Р. И., Богуславский В. А., Вендт В. П. Способ получения комплекса витамина D3 и холестерина. А. с. № 505188, 1975.— Бюл. изобрет., 1975, № 13, с. 52.
Яхимович Р. И., Вендт В. П., Богуславский В. А. Фотоизомеризация провитаминов D под действием ультрафиолетового излучения различных источников.— Прикл. биохимия и микробиология, 1975, Н, № 2, с. 254—257.
Яхимович Р. И., Климашевский В. М., Вендт В. П. Синтез, химические и биологические свойства фторированного аналога витамина D3.— Материалы 3-го конгр. «Химия в сельском хозяйстве». Братислава, 1975.
Яхимович Р. И., Курченко Л. К., Лопотько Н. В. Бензоатхолестадиен-8,14-ола-Зр — продукт дегидробромироваиия бензоата 7-бромхолестен-5-ола-ЗР-— В кн.: Технология производства и химия витаминов и витаминных препаратов. М., 1975, с. 50—56. (Сб. трудов ВНИВИ, № 9, ч. 1).
Яхимович Р. И., Климашевский В. М., Сегаль Г. М. Синтез и биологическая активность Зр-фторхолестатриеиа-5,7,10 (19).— Хим.-фармацевт, жури., 1976, 10, № 3, с. 58—64.
Яхимович Р. И., Фурсаева Н. Ф., Сегаль Г 44. Синтез фторированного аналога витамина D3.— Биоорган, химия, 1976, 2, № 11, с. 1526—1530.
A process for the crystallization of vitamin D8. Brit. Pat. N 1290576. 1972.— Chern. Abstrs 1970, 73, N 21, 110005.
Aberhart D. J., Chu J. Y. R., Hsu A. С. T. Synthesis of 3-epi-cholecalciferol and 5,6- trans-3-epi-cholecalciferol.— J. Org. Chern., 1976, 41, N 6, p. 1067—1069.
Abillon E., Mermet-Bouvier R. Effect of wavelength on production of previtamin D2.— J. Pharm. Sci., 1973, 62, N 10, p. 1688—1691.■
Adam J., Gosselain P. A., Goldfinger P. Laws of addition and substitution in atomic reactions of halogens.— Nature, 1953, 171, N 4355, p. 704—705.
Adam J., Gosselain P.A., Goldfinger P. The specificity of atomic halogenations. I. The reaction of N-chlorosuccinimide with toluene.— Bull. Soc. chim. belg., 1956, 65, p. 523— 532.
Adams T. H., Norman A. IE. Studies on the mechanism of action of calciferol. I. Basic parameters of vitamin D-mediated calcium transport.— J. Biol. Chem., 1970, 245, N 17, p. 4421—4431.
Adams T. H., Wong R. G., Norman A. W. Studies on the mechanism of action of calciferol. II. Effect of the polyene antibiotic, filipin, on vitamin D-mediated calcium transport.— J. Biol. Chem., 1970, 245, N 17, p. 4432—4442.
Adams W. J., Petrow V., Royer R. Steroids and related compounds. XL Some derivatives of zymosterol.— J. Chem. Soc., 1951, part 1, p. 678—680.
Akhtar M., Gibbons C. J. A convenient synthesis of (9, 19-3H2) cholecalciferol and the mechanism of the precholecalciferol calciferol reaction.— Tetrahedron Lett., 1965, N 9, p. 509—512.■
Akhtar M., Gibbons C. J. A convenient synthesis of (9,19-3H2) cholecalciferol 3,5-dinitro- benzoate and the mechanism of the precholecalciferol-calciferol reaction.— J. Chem. Soc., 1965, N 11, p. 5964—5968.
Alberti C. G., Camerino B., Mamoli L. Ein neues Provitamin D: das A5,7-Norcholesta- dien-3P-ol.— Helv. chim. acta, 1949, 32, N 6, S. 2038—2044.
Alder K., Schumacher M. Anwendungen der Dien-Synthese fiir die Erforschung von Naturstoffen.— Fortschr. Chem. org. Naturst., 1953, 10, S. 1—118.
Amer. M. M., Wahbi A. M., Hassau S. M. Colorimetric determination of vitamin D in oily pharmaceutical preparations.— Analyst, 1975, 100, N 1189, p. 238—242.
IP. Angus . C., Askew F. A., Bourdillon R. B., Bruce H. M., Callow R. K., Fischmann C., Philpot J. St. L., Webster T. A. Crystalline antirachitic substance.— Proc. Rov. Soc. London B, 1931, 108, N 8757, p. 340—359.'
Antonucci R., Bernstein S., Giancola D., Sax K. J. A5,7-Steroids. VI. The preparation of A5,7-steroidal hormones.— J. Org. Chem., 1951, 16, N 7, p. 1126—1133.
Antonucci R., Bernstein S., Giancola D., Sax K. J. A5,7-Steroids. X. Transformation products of A5,7-androstadiene-3P, 17 p-diol.— J. Org. Chem., 1951, 16, N 12, p. 1891—1898.
Arnall P. Separation of quinaldine from other bases.— Brit. Pat. N 736589, 1955.— Chem. Abstrs, 1956, 50, N 19, 14001.
Askew F. A., Bourdillon R. B., Bruce H. M., Jenkins R. G. C., Webster T. A. Distillation of vitamin D.— Proc. Roy. Soc. London B, 1930, 107, p. 76—90.
Askew F. A., Bourdillon R. B., Bruce H. M., Jenkins R. G. C., Webster T. A. Effects of further irradiation products ef ergosterol.— Proc. Roy. Soc London B, 1930, 107, p. 91—100.
Askew F. A., Bruce H. M., Callow R. K., Philpot J. St. L., Webster T. A. Cristalline vitamin D.— Nature, 1931, 128, N 3235, p. 758.
AskewF. A., Bourdillon R. B., BruceH. M., Callow R. K., Philpot J. St. L., Webster T. A. Crystalline vitamin D.— Proc. Roy. Soc. London B, 1932, 109, p. 488—506.
Altai J., Hendeles S. M., Engels J. A., Eik-Nes К. B. Elution of steroids after thin-layer chromatography.— J. Chromatogr., 1967, 27, N 1, p. 167—171.
Avioli L. V., Lee S. W. Detection of nanogram quantities of vitamin D by gas-liquid chromatography.— Anal. Biochem., 1966, 16, N 2, p. 193—199.
Babcock J. C., Campbell J. A. Crystalline 25-hydroxycholecalciferol hydrate and structurally related compounds. Pat. USA N 3833622, 1974.— РЖХим, 1975, 12О298П.
Bacharach A. Z., Smith E. L., Stevenson S. G. Some properties of ergosterol and calciferol.— Analyst, 1933, 58, p. 128—135.
Bakker S. A., Lugtenburg J., Havinga E. Studies on vitamin D and related compounds. XXII. New reactions and products in vitamin D3 photochemistry.— Rec. trav. chim., 1972 91, N 12, p. 1459—1464.
Bamford W. R., Stevens T. S. The decomposition of toluene-p-sulphonylhydrazones by alkali.— J. Chem. Soc., 1952, part 4, p. 4735—4740.
Barlet J.-P. Influence d i la-hydroxycholecalciferol sur la calcemie et la phosphatemie des bovins.— C. r. Acad. sci. D, 1975, 281, N 20, p. 1497—1500.
Baron C.^Comparaisons entre la structure chimique et 1’activite biologique de composes voisins des vitamines D.— Ann. chim. [13], 1956, 1, p. 898—957.
Baron C., Bidallier J. Quelques reactions d’oxydation de la vitamine D3.— Bull. Soc. chim. France, 1959, N 9, p. 1330—1333.
Barr T., Heilbron I. M., Parry E. G-, Spring F. S. Studies in the sterol group. XXVII. The oxidation of cholesteryl hydrogen phthalate with potassium permanganate: 7P-hyd- roxycholesterol and tetrahydroxycholestane.— J. Chern. Soc., 1936, part 2, p. 1437—1440.
Barret A. G. M., Barton D. H. R., Pendlebury M. H., Phillips L., Russell R. A., Wid- dowson D. A., Carlisle С. H., Lindley P. F. Structures of the toxisterols2. X-Ray crystal structure of toxisterol2-A-3,5-dinitrobenzoate.— J. Chern. Soc. Chern. Communs, 1975, N 3, p. 101—102.
Barret A. G. M., Barton D. H. R., Russell R. A., Widdowson D. A. Photo fragmentation i reactions of ergosterol.— J. Chem. Soc. Chem. Communs, 1975, N 3, p. 102—103.
Barton D. H. R., Miller E. Stereochemistry of the cholesterol dibromides.— J. Amer. Chem. Soc., 1950, 72, N 3, p. 1066—1070.
Barton D. H. R., Thomas B. R. Tri terpenoids. XII. The lanosterol analogue of provitamin D3.— J. Chem. Soc., 1953, part 2, p. 1842—1847.
Barton D. H. R., Hesse R. H., Pechet M. M., Rizzardo E. A convenient synthesis of la- hydroxy-vitamin D3.— J. Amer. Chem. Soc., 1973. 95, N 8, p. 2748—2749.
Barton D. H. R., Hesse R. H., Pechet M. M., Rizzardo E. Convenient synthesis of crystalline la, 25-dihydroxyvitamin D3.— J. Chem. Soc. Chem. Communs, 1974, N 6, p. 203— 204.'
Beckwith A. L. J. The oxidation of crystalline cholesterol.— Proc. Chem. Soc., 1958, N 6, p. 194—195.
Bell J. G., Christie A. A. Gas-liquid chromatographic determination of vitamin D in cod-liver, olie.— Analyst, 1973, 98, N 1165, p. 268—273.
Bell P. A., Scott W. P. A synthesis of 25-hydroxycholecalciferol-(26,27-aH).— J. Labelled Compounds, 1973, 9, N 2, p. 339—346.
Bergmann IF., Dusza J. P. Contribution to the study of marine products. XLVI. 24- and 25-dehydrocholesterol.— J. Org. Chem., 1958, 23, N 3, p. 459—461.
Bergstrom S., Wintersteiner 0. Autoxidation of sterols in colloidal aqueous solution. The nature of the products formed from cholesterol.— J. Biol. Chem., 1941, 141, N 2, p. 597—610.
Bergstrom S. Die Isolierung von (—)-P-Methoxyadipinsaure aus den Oxydationsprodukten von Calciferol-methylather.— Helv. chim. acta, 1949, 32, N 1, S. 3—8.
Bergstrom S., Lardon A., Reichstein T. Die Isolierung von (—)-P-Methoxyadipinsaure aus den Oxydationsprodukten von Calciferol-methylather.— Helv. chim. acta, 1949, 32, N5,S. 1617—1620.
Bernstein S., Sax K. J., Subbarow Y. 7-Dehydrocholesteryl chloride and bromide.— J. Org. Chem., 1948, 13, N 6, p. 837—842.
Bernstein S., Binovi L. J., Dorfman L., Sax K. J., Subbarow Y. 7-Dehydrocholesterol.— J. Org. Chem., 1949, 14, N 3, p. 433—446.
Bernstein S., Oleson J. J., Ritter H. B., Sax K. J. Irradiated 7-dehydrocholesteryl halides (III).— J. Amer. Chem. Soc., 1949, 71, N 7, p. 2576—2577.
Bernstein S., Sax K. J. 7-Dehydrocholesteryl esters. Pat. USA N 2498390, 1950.— Chem. Abstrs., 1950, 44, N 12, 5401..
Bernstein S., Sax K- J. A5-7-Steroids. IV. 7-Dehydrocholesteryl methyl ether.— J. Amer. Chem. Soc., 1951, 73, N 2, p. 846—847.
Bernstein S., Sax K. J. A5,7-Steroids. V. 7-Dehydrocholesteryl mercaptan.— J. Org. Chem., 1951, 16, N 5, p. 685—693.
•149. BeStaoa J., Skalicky L., Malkova J., Stepanek Z. Zpusob izolace cholekalciferolu.— А. с. ЧССР, № 152061, 1974.— РЖХим, 1975, 19О238П.
Beynon J. H., Heilbron I. M., Spring F. S. Studies in the sterol group. XXV. An investigation of some reactions of the isomeric ethers of cholesterol.— J. Chem. Soc., 1936, part 2, N 7, p. 907—910.
Bharucha K- R., Martin F. M. Vitamin D3. Fr. Pat. N 1378121, 1964.— Chem. Abstrs, 1965, 62, N 10, 11888.
Bharucha K. R., Martin F. M. Preparation of crystalline vitamin D3 and vitamin D3 bensoate. Fr. Pat. N 1383122, 1964; Pat. USA N 3168535, 1965; Brit. Pat. N 1023146, 1965.— Chem. Abstrs, 1965, 62, N 8, 9213.
Bide A. E., Henbest H. B., Jones E. R. H., Peevers R. IF., Wilkinson P. A. Studies in the sterol group. A new route to the 7-dehydrocholesterol (provitamin D3) and its derivatives.— J. Chem. Soc., 1948, part 2, p. 1783—1788.
Bide A. E., Henbest H. B., Jones E. R. H., Wilkinson P. A. Studies in the sterol group. XL VIII. 7-Substituted cholesterol derivatives and their stereochemistry. 7-Halogeno- derivatives.— J. Chem. Soc., 1948, part 2, p. 1788—1792.
Bills С. E. Antiricketic substances. III. The catalytic formation of an antiricketic cholesterol derivative.— J. Biol. Chem., 1926, 67, p. 753—758.
Bingham K. D., Meakins G. D., Wicha J. Steroids of unnatural configuration. X. A quantitative study of the epoxidation of lumisterol and its esters.— J. Chem. Soc. C, 1969, N 3, p. 510—511.
Bingham K. D., Meakins G. D., Wicha J. Steroids of unnatural configuration. XI. Reactions of lumisteryl acetate with maleic anhydride.— J. Chem. Soc. C, 1969, N 4, p. 671— 673.
Bingham K. D., Cottrell W. R. T., Meakins G. D. Steroids of unnatural configuration. XIII. Reactions lumisterol A7-3-ketones with ethyl formiate and with benzaldehyde.— J. Chem. Soc. C, 1969, N 4, p. 674—675.
5,7-Bisdehydrosterols. Pat. USA N 2615904, 1952,—Chem. Abstrs,'1953, 47, N 13, 6450.
Bladon P. Studies in the steroid group. L XVIII. Epidioxides derived from lumisterol and related compounds.— J. Chem. Soc. C, 1955, N 8, p. 2176—2190.
Bland J., Craney B. Chemical oxygenation of vitamin D3.— Tetrahedron Lett., 1974 N 46, p. 4041—4044.
Bloch K. Uber die Herkunft des Kohlenstoff-Atoms 7 in Cholesterin. Ein Beitrag zur Kenntnis der Biosynthese der Steroide.-—Helv. chim. acta, 1953,36, N 6, S. 1611—1614.
Bloomfield G. F. Rubber, polyisoprenes and allied compounds. VI. The mechanism of halogen substitution reactions and the additive halogenation of rubber and of dihydromyrcene.— J. Chem. Soc., 1944, part 1, p. 114—120.
Blunt J. W., Tanaka Y., De Luca H. F. The biological activity of 25-hydroxycholecalci- ferol, a metabolite of vitamin D3.— Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1968, 61, N 2, p. 717—718.
Blunt J. W., Tanaka Y., DeLuca H. F. The biological activity of 25-hydroxycholecal- ciferol, a metabolite of vitamin D3.— Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1968, 61, N 4, p. 1503— 1506.
Blunt J. W., DeLuca H. F., Schnoes H. K. 25-Hydroxycholecalciferol: a biologically active metabolite of vitamin D3.— J. Chem. Soc. Chem. Communs, 1968, N 14, p. 801.
Blunt J. W., DeLuca H. F., Schnoes H. K. 25-Hydroxycholecalciferol. A biologically active metabolite of vitamin D;.— Biochemistry, 1968, 7, N 10, p. 3317—3322.
Blunt J. W., DeLuca H. F. The synthesis of 25-hydroxycholecalciferol, a biologically active metabolite of vitamin D3.— Biochemistry, 1969, 8, N 2, p. 671—675.
Bolliger H. R., Konig A. Quantitative Bestimmung von Vitamin D in Konzentraten, Arzneimitteln und weiteren Kombinationspraparaten mittels Diinnschicht-Chromatograp- hie.— Z. anal. Chem., 1965, 214, N 1, S. 1—23.
Bolton I. J., Harrison R. G., Lythgoe B., Manwaring R. S. Calciferol and its relatives. XIII. Derivatives of enantiomeric 4-methylcyclohex-3-one-l, trans-2-diols.— J. Chem. Soc. C, 1971, N 18, p. 2944—2949.
Bolton I. J., Harrison R. G., Lythgoe B. Calciferol and its relatives. XIV. Total synthesis of des-AB-cholestane-8P, 9a-diol {lf5-[(IR)-l,5-dimethylhexyl]-7aP-methyl-trans- perhydroindane-4P 5a-diol}.— J. Chem. Soc. C, 1971, N 18, p. 2950—2955.
Bontekoe J. S., Wignail A., Rappoldt M. P., Roborgh J. R. Hydroxylated vitamin D analogues.— Int. J. Vitam. and Nutr. Res., 1970, 40, N 5, S. 589—591. .
Boomsma F., Jacobs H. J. C., Havinga E., van der Gen A. Studies on vitamin D and related compounds. XXIII. The structure of bischolestadienol isomers.— Rec. trav. chim., 1973, 92, N 12, p. 1361—1367.
Boomsma F., Jacobs H. J. C., Havinga E., van der Gen A. Studies on vitamin D and related compounds. XXIV. New irradiation products of previtamin D3. Toxisterols.— Tetrahedron Lett., 1975, N 7, p. 427—430.
Boomsma F. The photochemistry of previtamin D. An investigation of the «overiradia- tion» products. Dis. Leiden, 1975. 112 p.
Bordier Ph., Pechet M. M., Hesse R., Marie P., Rasmussen H. Response of adult patients with osteomalacia to treatment with crystalline la-hydroxy vitamin D3.— N. Engl. J. Med., 1974, 291, N 17, p. 866—871.
Bots 1. P. L. Investigations on sterols. XL Preparation of 13 a-androstene derivatives.— Rec. trav. chim., 1958, 77, N 9, p. 1010—1017.
Boutin N. E., Robert D. U., Gambon A. R. Nouvelle methode de preparation des fluoro- 30-A6-steroides.— Bull. Soc. chim. France, 1974, N 12, p. 2861—2863.
Boyle 1. T., Gray R. W., DeLuca H. F. Regulation by calcium of in vivo synthesis of 1,25- dihydroxycholecalciferol and 21,25-dihydroxycholecalciferol.— Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1971, 68, N 9, p. 2131—2134.
Boyle I. T., Qmdahl J. L., Gray R. W., DeLuca H. F. The biological activity and metabolism of 24,25-dihydroxyvitamin D3.— J. Biol. Chem., 1973, 248, N 12, p. 4174—4180.
Braude E. A., Wheeler О. H. Studies in the vitamin D field. I. Synthesis of trienes containing the tachysterol chromophore.— J. Chem. Soc. C, 1955, N 1, p. 320—328.
Braude E. A., Wheeler О. H. Studies in the vitamin D field. II. The condensation of acetylmethylcyclohexenes with cyclohexanone.— J. Chem. Soc. C, 1955, N 1, p. 329—334.
Bretschneider H., Foldi Z., Galirurvsky F., von Fodor G. Zur Bromierung des Cholesterylbenzoates.— Chem. Ber., № 1941, 74, N 8, S. 1451—1455.
Brockmann H., Chen Y. H. fiber eine Methode zur quantitativen Bestimmung von Vitamin D.— Hoppe-Seyler'sZ. physiol. Chem., 1936, 241, S. 129—133.
Brockmann H. Die Isolierung des antirachitischen Vitamins aus Thunfischleberol.— Hoppe-Seyler’s Z. physiol...Chem., 1936, 241,S. 104—115.
Brockmann H., Busse A. Uber das antirachitische Vitamin aus Bluefin Th une-1 eberol.— Hoppe-Seyler's Z. physiol. Chem., 1937, 249, S. 176—180.
Bruck P. R., Clark R. D., Davidson R. S., Gunther W. H. FL, Littlewood P. S., Lythgoe B. Calciferol and its relatives. VIII. Ring A intermediates for the synthesis of tachysteroL.— J. Chem. Soc. C, 1967, N 23, p. 2529—2533.'
Bunker W. M., Harris R. S., Mosher L. M. Relative efficiency of active wave lengths of ultraviolet in activation of 7-dehydrocholesterol.— J. Amer. Chem. Soc., 1940, 62, N 3, p. 508—511.
Bunker W. M., Harris R. S., Mosher L. M. Studies in the activation in sterols.— J. Amer.
Chem. Soc., 1940, 62, N 7, p. 1760—1762.
Burchard H. Beitrage zur Kenntnis des Cholesterins. Inangural dissertation, Rostock, 1889; Chem. Zbl., 1890, I, S. 25—27.
Baser W. y-Cholestenon and epi-y-Cholestenon.— Helv. chim. acta, 1947, 30, N 5, p. 1379—1391.'
Busse P. Uber Erhitzungsprodukte aus Vitamin D2 und fiber deren Hydroderivate.— Hoppe-Seyler’s Z. physiol. Chem., 1933, 214, S. 211—222.
Calciferol esters. Fr. PatN 1001516, 1952 — Chem. Abstrs, 1957, 51, N 10, 7447.
Callow R. H. The purification of ergosterol.— Biochem. J., 1931, 25, N 1, p. 79—86.
Campbell J. A. Modified glycerol dichlorohydrin reaction for vitamm D3.— Anal. Chem., 1948; 20, N 8, p. 766—771.
Campbell J. A., Squires D. M., Babcock J. C. Synthesis of 25-hydroxycholecalciferol, the biologically effective metabolite of vitamin D3.— Steroids, 1969, 13, N 5, p. 567—577.
Campion T. H., Dilley S. The measurement of nanogram quantites of vitamin D3.— Anal. Lett., 1973, 6, N 2, p. 139—145.
Castells J., Jones E. R. H., Williams R. W. J. The stereochemistry of lumisterol and pyrocalciferol.— Proc. Chem. Soc., 1958, N 1, p. 7—9.
Castells J., Jones E. R. H., Meakins G. D., Williams R. W. J. Steroids of unnatural configuration. I. The stereochemistry of lumisterol and 9a-lumisterol (pyrocalciferol).— J. Chem. Soc., 1959, N 3, p. 1159—1168.
Castells J., Fletcher G. A., Jones E. R. H., Meakins G. D., Swindells R. Steroids of unnatural configuration. II. Reduction products of lumisterol: hexahydro-compounds.— J. Chem. Soc., 1960, N 6, p. 2627—2639.
Castells J., FietcherG. A., Jones E. R. H., MeakinsG. D., Swindells R. Steroids of unnatural configuration. III. Dihydro- and tetrohydro-derivatives of lumisterol.— J. Chem. Soc., 1960, N 7, p. 2785—2792.
Castells J., Jones E. R. H., Meskins G. D., Palmer S., Swindells R. Steroids of unnatural configuration. VII. Reduction products of 9 a-lumisterol (pyrocalciferol).— J. Chem. Soc., 1962, N 8, p. 2907—2916.
Castells J., Meakins G. D., Swindells R. Steroids of unnatural configuration. VIII. Isomerization of lumisterol and its derivatives with acids. A new method for locating double bonds in steroids.— J. Chem. Soc., 1962, N 8, p. 2917—2924.
Castillo L., Tanaka G., DeLuca H. F. The mobilization of bone mineral by 1,25-dihydro- xyvitamin D3 in hypophosphatemic rats.— Endocrinology, 1975 , 97, N 4, p. 995—999.
Chalmers T. M., Davie M. W., Hunter J. O., Szaz K. F., Pelc B., Kodicek E. 1-Alpha- hydroxycholecalciferol as a substitute for the kidney hormone 1,25-dihydroxycholecal- ciferol in chronic renal failure.— Lancet II, 1973, p. 696—699.
Charbo S. A., Gosser L. A. Microdetermination of ergocalciferol (vitamin D2) in pharmaceutical preparations by differential spectroscopy using trifluoroacetic acid in the absence of vitamin A.— J. Pharm. Sci., 1975, 64, N 7, p. 1196—1199.
Chen P. S., Terepka A. R., Remsen N. Column partition chromatography of vitamins A and D on Fluoropak 80.— Anal. Chem., 1963, 35, N 13, p. 2030—2032.
Chen P. S., Terepka A. R., Lane K. Sensitive fluorescence reaction for vitamins D and dihydrotachysterol.— Anal. Biochem., 1964, 8, N 1, p. 34—42.
Chen P. S., Bosmann H. B. Effect of vitamin D2 and D3 in serum calcium and phospharus in rachitic chickens.— J. Nutr., 1964, 83, N 1, p. 133—139.
Chen P. S., Terepka A. R., Lane K., March A. Studies of the stability and extrastability of vitamin D.— Anal. Biochem., 1965, 10, N 3, p. 421—434.
Claude G. R., Peaumont G. L. Recherches sur la photolyse in vitro du cholesterol, identification des produits de la reaction.— C. r. Acad, sci., 1965, 260, N 11, p. 3204—3207.
Claude J. R. Separation et identification de sterols substitues sur les cycles A et В par chromatographie en couches minces et chromatographie en phase gazeuse.— J. Chro- matogr., 1966, 23, N 2, p. 267—273.
Cottrell W. R. T., Meakins G. D., Pamplin M. J. Steroids of unnatural configuration. XII. Hydroxylation of 5 P-lumist-2-ene.— J. Chem. Soc. C, 1969, N 4, p. 673—674.
Cousins R. J., DeLuca H. F., Suda T., Chen T., Tanaka Y. Metabolism and subcellular location of 25-hydroxycholecalciferol in intestinal mucosa.— Biochemistry, 1970, 9, N 6 p. 1453—1459.
Cousins R. J., DeLuca H. F., Gray R. W. Metabolism of 25-hydroxycholecalciferol in target and nontarget tissues.— Biochemistry, 1970, 9, N 19, p. 3649—3652.
Cox R. H., Spencer E. Y. The estimation of some 17-alkyl substituted steroids with the zinc chloride-acetyl chloride (Tshugaev) reagent and a postulated reaction mechanism.— Can. J. Chem., 1951, 29, N 1, p. 217—222.
Crabbe P., Mislow K. Stereoisomerism in biergostatrienol.— J. Chem. Soc. Chem. Communs, 1968, N 12, p. 657—658.
Cragg G. M. L., Meakins G. D. Steroids of unnatural configuration. IX. Oxidation of 9a-lumisterol (pyrocalciferol) and 9 P-ergosterol (isopyrocalciferol) with perbenzoic acid.— J. Chem. Soc., 1965, N 3, p. 2054—2063.
Crowfoot D., Dunitz J- Structure of calciferol.— Nature, 1948, 162, N 4120, p. 608—609.
Crowfoot Hodgkin D., Sayre D. A crystallographic examination of the structure of lumis- terol.— J. Chem. Soc.. 1952, N 12, p. 4561—4566.
Crowfoot Hodgkin D., Webster M., Dunitz J. Structure of calciferol.— Chem. and Ind 1957, N 32, p. 1148—1149.
Crowfoot Hodgkin D., Rimmer B., Dunitz J., Trueblood K. N. The crystal structure of a calciferol derivative.— J. Chem. Soc., 1963, N 10, p. 4945—4956.
Crump D. R., Williams D. H., Pelc B. (22S)-Hydroxyvitamin D4.— J. Chem. Soc. Perkin Trans. Part I, 1973, N 22, p. 2731—2733.
Dasqupta S. K., Crump D. R., Gut M. New preparation of desmosterol.— J. Org. Chem. 1974, 39, N 12, p. 1658—1662.
Dauben H. J., McCoy L. L. N-Bromosuccinimide. II. Allylic bromination, a general survey of reaction variables.— J. Amer. Chem. Soc., 1959, 81, № 18, p. 4863—4873.
Dauben №. G., Brandlow H. L. The preparation of cholesterol from A6-norcholestene-3 Bol-25-one.— J. Amer. Chem. Soc., 1950, 72, № 9, p. 4248—4250.
Dauben №. G., Eastham J. F., Micheli R. A. A new method for the preparation of 7-de- hydrocholesterol.— J. Amer. Chem. Soc., 1951, 73, N 9, p. 4496.
Dauben W. G., Eastham J. F., Michell R. A., Takemura К- H., Mandell L., Chemerda J. M. The preparation of A5,7-steroidal dienes.— J. Amer. Chem. Soc., 1953, 75, N 13, p. 3255 3258.
Dauben №. G., Dickel D. F., Jeger 0., Prelog V. Untersuchugen uber asymmetrische Synthesen. III. Uber die Anwendung der asymmetrischen Synthese zur Konfigurations- bestimmung bei Triterpenen und Steroiden.— Helv. chim. acta, 1953, 36, N 1, S. 325— 335..
Dauben W. G., Fonken G. J. The structure of photoisopyrocalciferol.— J. Amer. Chem. Soc., 1957, 79, N 11, p. 2971—2972.
Dauben W. G., Bell I., Hutton T. W., Laws G. F., Rheiner A., Urscheler H. Structure of suprasterol-II.— J. Amer. Chem. Soc., 1958, 80, N 15, p. 4116—4117.
Dauben W. G., Fonken G. J. The structure of photoisopyrocalciferol and photopyrocalciferol.— J. Amer. Chem. Soc., 1959, 81, N 15, p. 4060—4068.
Dauben №. G., Baumann P. Photochemical transformations. IX. Total structure of suprasterol II.— Tetrahedron Lett., 1961, N 16, p. 565—572.
Dauben №. G., Lorber M., Fullerton D. S. Allylic oxidation of olefins with chromium trioxide-pyridine complex.— J. Org. Chem., 1969, 34, N 11, p. 3587—3592.
Davidson R. S., Littlewood P. S., MedcalfeT., Waddington-Feather S. M., WHUamsD. H., Lythgoe B. Synthesis of tachysterol3.— Tetrahedron Lett., 1963, p. 1413—1419.
Davidson R. S., Gimther W. H. H., Waddington-Feather S. M., Lythgoe B. Calciferol and its relatives. VI. A degradation of 7-oxocholesteryl acetate to some des-AB-cholestane derivatives.— J. Chem. Soc., 1964, N 12, p. 4907—4914.
Davidson R. S., Waddington-Feather S. M., Williams D. H., Lythgoe B. Calciferol and its relatives. IX. The synthesis of tachysterol3.— J. Chem. Soc., 1967, N 23, p. 2534— 2536.
Davis R. B., McMahon J. M., Kalnitsky G. Separation of D vitamins from other sterols by paper chromatography and the quantitative determination of 7-dehydrocholesterol.— J. Amer. Chem. Soc., 1952, 74, N 18, p. 4483—4484.
Dawson T. M., Dixon J., Lythgoe B., Siddiqui I. A. (S)-3-Ethynyl-4-methylcyclohex-3- -en-l-ol.— J. Chem. Soc. Chem. Communs, 1970, N 16, p. 992.
Dawson T. M., Littlewood Р. S., Lythgoe В., Medcalfe T., Moon M. W., Tomkins P. M. Calciferol and its relatives. X. Ring-contraction routes to some 8-methyl-trans-perhyd- roindanones.— J. Chern. Soc. C, 1971, N 7, p. 1292—1300.
Dawson T. M., Dixon J., Littlewood P. S., Lythgoe B. Calciferol and its relatives. XII (S)-3-Ethynyl-4-methylcyclohex-3-en-l-ol.— J. Chern. Soc. C, 1971, N 12, p. 2352—2355.
Dawson T. M., Dixon J., Littlewood P. S., Lythgoe B., SaksenaA. K. Calciferol and its relatives. XVI. Total synthesis of precalciferol3.— J. Chern. Soc. C, 1971, N 18, p. 2960— 2966.
7-Dehydrocholesterol and its antirachitic derivatives. Dutch. Pat N 64036, 1949.— Chern. Abstrs, 1950, 44, N 4, 1548.
7-Dehydrosterols and derivatives or products of their irradiation. Dtch. Pat. N 61340, 1948.— Chem. Abstrs, 1948, 42, N 20, 7798.
7-Dehydrosterol and derivatives or products of their radiation. Brit. Pat. N 639714, 1950.— Chem. Abstrs, 1950, 44, N 18, 8383.
Delaroff V., Rathle P., Legrand M. Etude de la resonance magnetique nucleaire du precalciferol, du tachysterol et du calciferol.— Bull. Soc. chim. France, 1963, N 8—9, p. 1739—1741.
DeLuca H. F. Mechanism of action and metabolic fate of vitamin D.— Vitamins and Hormones, 1967, 25, p. 315—367.
DeLuca H. F., Blunt J. W. 25-Hydroxy compounds of the vitamin D series. Ger. Offen. N 1933375, 1969,— Chem. Abstrs, 1970, 72, N 24, 125058.
DeLuca H. F. 25-Hydroxycholecalciferol, the probable metabolically active form of vitamin D.— Amer. J. Clin. Nutr., 1969, 22, N 4, p. 412—424.
DeLuca H. F. 25-Hydroxyergocalciferol. Pat. USA N 3585221, 1971.— РЖХим, 1972, 7Н419П.
DeLuca H. F.. Suda T. 25-Hydroxytachysterol3, 25-hydroxydihydrotachysterol3 and methods for preparing same. Pat. USA N 3607888, 1971,— РЖХим, 1972, 16Н311П.
DeLuca H. F., Suda T. Photochemically preparing 25-hydroxytachysterol3. Pat. USA N 3702810, 1972,—Chem. Abstrs, 1973, 78, N 11, 72458.
DeLuca H. F., Schnoe H. K-. Holick M. F. Antirachitic 1,25-dihydroxycholecalciferol. Ger. Offen. N 2209352, 1972.— Chem. Abstrs, 1972, 77, N 22, 143809.
DeLuca H. F. The kidney as an endocrine organ involved in calcium homeostasis.— Kidney Int, 1973, 4, N 1, S. 80—88.
DeLuca H. F, 24, 25-Dihydroxycholecalciferol. Pat. USA N 3715374, 1973.— РЖХим, 1973, 24Н432П.
DeLuca H. F. 25,26-Dihydroxycholecalciferol. Pat. USA N 3739001. 1973.— РЖХим, 1974 , 7Н345П.
DeLuca H. F., Schnoes H. K., Holick M. F., Semmler E. J. la-hydroxycholecalciferol. Pat. USA N 3741996, 1973.— РЖХим, 1974, 9Н292П.
DeLuca H. F.. Holick M. F., Garabedian M. 5,6-Trans-25-hydroxycholecalciferol. Pat USA N 3743661, 1973.— РЖХим, 1974, 11Н313П.
DeLuca H. F., Blunt J. W. Processes for preparing 25-hydroxycholecalciferol. Pat. USA N 3772361, 1973,— РЖХим, 1974, 19Н473П.
DeLuca H. F. Vitamin D: the vitamin and the hormone.— Fed. Proc., 1974, 33, N 11, p. 2211—2219.
DeLuca H. F., JonesG., Schnoes H. K. 1,25-Dihydroxyergocalciferol. Pat. USA N 3880894, 1975,— РЖХим, 1976. 6О199П.
DeLuca H. F., Schnoes H. K., Lam H.-Y. 3-Deoxyl-l a-hydrox^cholecalciferol. Pat. USA N 3906014, 1975.— РЖХим, 1976, 14О234П.
DeLuca H. F., Schnoes H. K., Lam H.-Y. la-Hydroxyergocalciferol and processes for preparing same. Pat. USA N 3907843, 1975. РЖХим, 1976, 14О234П.
De Kock R J., Minnaard N. G., Havinga E. Studies on vitamin D and related compounds. XIII. Investigations on sterols. XVI. The photochemical reactions of 1,3-cyclohexadiene and a-phellanrene.— Rec. trav. chim., 1960, 79, N 8, p. 922—934.
De Kock R. J., van der Kuip G., Verloop A., Havinga E. Studies on vitamin D and related compounds. XV. Irradiations at low temperatures.— Rec. trav. chim., 1961, 80, N 1, p. 20—25.
Deutsches Arzeibuch, 1968, 7 Aufg, p. 434—435.
De Vries H., Backer H. J. Synthese de provitammes D a chaines laterales variees.— Rec. trav. chim., 1952, 71, N 7, p. 719—732.
Dihydrotachysterol3. Dutch. Pat. N 87297, 1958.— Chem. Abstrs, 1959, 53, N 9, 8204.
Dihydrotachysterols. Ger. Pat. N 1108215, 1959.— Chem. Abstrs, 1962, 56, N 1, 531.
Dimroth K. Uber das Lumisterin.— Chem. Ber., 1935, 68, N 3, S. 539—542.
Dimroth K. Uber das Lumisterin.— Chem. Ber., 1936, 69, N 5, S. 1123—1129.
Dimroth K. Uber den Bestrahlungsvorgang bei Verbindungen des Ergosterintypus.— Chem. Ber., 1937, 70B, N 7, S. 1631—1636.
Dimroth К., Trautmann G. Uber das Ergostatrien und das 7-Dehydrocholesten.— Chem. Ber., 1936, 69, N 4, S. 669—675.
Dimroth K., Poland J. Uber die Ultraviolettbestrahlung des A5,7-Androstadiendiols-3 Pi 17 p.— Chem. Ber., 1939, 72B, N 1, S. 187—190.
Dimroth K. Synthetische Versuche zur Darstellung der antirachitischen Vitamine. I. Synthese a, P-ungesattigter Alkohole und Aldehyde mil semicyclischer Doppelbindung.— Chem. Ber., 1938. 71B, N 6, S. 1333—1345.
Dimroth K. Synthetische Versuche zur Darstellung der antirachitischen Vitamine. II. Kondensation von Cyclohexyliden-acetaldehyd mit Cyclohexanon.— Chem. Ber., 1938. 71B, N 6, S. 1346—1350.
Dimroth K., Jonsson H. Synthetische Versuche zur Darstellung der antirachitischen Vitamine. III.— Chem. Ber., 1938, 71B, N 12, S. 2658—2662.
Dimroth K-> Jonsson H. Synthetische Versuche zur Darstellung der antirachitischen Vitamine. IV. Die sterische Verkniipfung der Ringe C und D bei den Steroiden.— Chem. Ber., 1941, 74B, N 4, S. 520—523.
Dimroth K., Dietcel E., Stockstrom S. Synthetische Versuche zur Darstellung der antirachitischen Vitamine. V.— Ann., 1941, 549, N 3, S. 256—278.
Dimroth K., Stock.trот E. Synthetische Versuche zur Darstellung der antirachitischen Vitamine. VI,— Chem. Ber., 1942, 75B, N 2, S. 180—197.
Dimroth K., Stockstrom E. Synthetische Versuche zur Darstellung der antirachitischen Vitamine. VII. Vorversuche zur Einfiihrung der Hydroxylgruppe in den Ring A.— Chem. Ber.. 1942, 75B, N 4, S. 326—331’
Dimroth K., Stockstrom E. Synthetische Versuche zur Darstellung der antirachitischen Vitamine. VIII. Modellsubstanzen mit einer Hydroxylgruppe in Ring A.— Chem. Ber... 1942, 75B, N 5, S. 510—521.
Dimroth K., Stockstrom E. Synthetische Versuche zur Darstellung der antirachitischen Vitamine. IX. Eine Partialsynthese des Vitamins D2.— Naturwissenschaften, 1942, 30, N 14—15, S. 227—228.
Dimroth K., Stockstrom E. Synthetische Versuche zur Darstellung der antirachitischen Vitamine. X. Ein neuer Weg zum Aufbau des ungesattigten Systems.—Chem. Ber., 1942, 75B, N 5, S. 582—586.
Dimroth K-, Stockstrom E. Synthetische Versuche zur Darstellung der antirachitischen Vitamine. XL Eine Partialsynthese des Vitamins D2 und seiner 3-epi-Verbindung.— Chem. Ber., 1942, 75B, N 10, S. 1263—1270.
Dimroth K., Stockstrom E. Photochemische reactionen organischer Verbindungen. I. Die Konstitution des Toxisterins, des ersten Bestranlungsproduktes der antirachitischen Vitamine.—Chem. Ber., 1943, 76B, N 1, S. 68—75.
Dimroth K. Uber die Synthese von modellen ungesattigter Steroide vom Typ des Ergosterins.— Angew. Chem., 1947, 59, N 7—8, S. 215—218.
Ditullio N. W., Jacobs C. S., Holmes W. L. Thin-layer chromatography and identification of free sterols.— J. Chromatogr., 1965, 20, N 2, p. 354—357.
Dixon J., Littlewood P. S., Lythgoe B., Saksena A. K. Total synthesis of precalciferol3.— J. Chem. Soc. Chem. Communs, 1970, N 16, p. 993—994..
Dixon J., Lythgoe B., Siddiqui I. A., Tideswell J. Calciferol and its relatives. XI. Improved routes to (S)-3-hydroxymethyl-4-methylcyclohex-3-en-l-ol.— J. Chem. Soc. C, 1971, N 7, p. 1301—1305.
Djerassi C. Bromination with N-bromsuccinimide and related compounds.— Chem. Revs., 1948, 43, N 2, p. 271—317.
Djerassi C., Rosenkranz G., Romo J., Kaufmann S., Pataki J. Steroids. VII. Contribution to the bromination of A4-3-ketosteroids and a new partial synthesis of the natural estrogens.— J. Amer. Chem. Soc., 1950, 72, N 10 p. 4534—4540.
Doboszynska B., Burakowska E. Application of thin-layer chromatography for the quantitative determination of 7-dehydrocholesterol.— Bull. Acad. pol. sci. Ser. sci. biol., 1971,. 19, N 9, p. 553—561.
Dollwet H. H. A., Norman A. W. Chromatographic separation of vitamins D2 and D3 and related compounds.— Anal. Biochem., 1968, 25, N 1—3, p. 297—306.
Doree C., Orange L. The action of bromine on cholesteryl benzoate.— J. Chem. Soc., 1916, 109, p. 46—55.
Dorfman L. Ultraviolet absorption of sterols.— Chem. Revs., 1953, 53, p. 47—144.
Dane E., Wang Y. Die Einfiihrung von Doppelbindungen in Gallensauren und Sterine.
Darstellung von Cholestadienol.— Hoppe-Seyler’s Z. physiol. Chem., 1937, 248, S. 1—111.
Eck J. C., Thomas В. H. The chemical activation of sterols. V. A study of the relationship between chemical activation and configuration of various sterols and derivatives.— J. Biol. Chem., 1939,128, N 1, p. 257—265.
Eck J. C., Thomas В. H. The chemical activation of sterols. VI. A study of various reagents in chemical activation and in sterol color reactions.— J. Biol. Chern., 1939, 128, N 1, p. 267—278.
Ecsery Z., Hercsel 7. Hydrolysis of vitamin D2 and D3 esters and crystalline vitamin D3. Hung. Pat. N 145318, 1959.— Chern. Abstrs, 1963, 58, N 8, 8021.
Ecsery Z., Hercsel I. Esters.'Hung. Pat. N 147770, 1960:—Chern. Abstrs, 1963, 58, N 8, 8022.
Ecsery Z., Hercsel I. Kiserletek 7-brom-koleszterileszterek dehidrohalogenezesere fosz- forossav-esztrekkel cs gyiiriis szerkezetii 1,3,2-dioxafoszfolanokkal.-— Magy. kem. foly- 6irat, 1962, 68, N 11, p. 496—497.
Edelstein S. Vitamin D binding proteins.— Vitamins and Hormones, 1975, 32, p. 407— 428.
EdlundD. 0., Anfinsen J. R. Gas-liquid chromatographic procedure for the determination of vitamin D2 in multiple-vitamin tablets and raw materials.— J. Assoc. Offic. Anal. Chern., 1970, 53, N 2, p. 287—293.
Ener M. A., Frantz I. D. Chemical synthesis of A7,24-(3 a-3H) cholestadien-3 p-ol and its conversion to cholesterol in the rat.— J. Biol. Chern., 1973, 248, N 19, p. 6697—6700.
Erdody P., Murray T. K. Improved method for determination of vitamin D2 and D3 in pharmaceuticals by gas chromatography.— J. Assoc. Offic. Anal. Chern., 1970, 53, N 1, p. 189—190.
Erkhardt H.-J. Versuche zur Darstellung von 7-Dehydrocholesterin fiber ein 7-amino- cholesterin.— Chern. Ber., 1938, 71B, N 3, p. 461—470.
Evans J. R. The reaction of vitamin D (calciferol) with tetracyanoethylene. The basis of possible chemical method to estimate vitamin D.— Clin. chim. acta, 1972, 38, p. 85— 89.
Evans J. R. The gas chromatography of calciferol, dihydrotachysterol and cholesterol.— Clin. chim. acta, 1972, 42, p. 167—174.
Ewing D. T., Powell M. J., Brown R. A., Emmett A. D. Determining vitamins D2 by two physical chemical methods.— Anal. Chern., 1948, 20, N 4, p. 317—320.
Ewing D. T., Schlabach T. D., Powell M. J., Vaitkus J. IV., Bird 0. D. Spectrophotometric determination of vitamins D in presence of vitamin A.— Anal. Chern., 1954, 26, N 9, p. 1406—1409.
Eyley S. C., Williams D. H. Synthesis of 24 §, 25-di-hydroxyprovitamin D3.— J. Chem- Soc. Perkin Trans. Part I, 1976, N 7, p. 727—731.
Eyley S. C., Williams D. H. Synthesis of 25-hydroxyprovitamin D3 and 25 g, 26-di- hydroxyprovitamin D3.— J. Chern. Soc. Perkin Trans. Part I, 1976, N 7, p. 731—735.
Fagerlund U. H. M., Idler D. R. Marine sterols. IV. 24-Dehydrocholesterol: isolation from a barnacle and synthesis by the Wittig reaction.— J. Amer. Chern. Soc., 1957, 79, N 24, p. 6473—6475.
Fernholz E. Uber ein giftiges Nebenprodukt bei der Hydrierung des Vitamins D2.— Ann., 1932, 499, S. 198—200.
Fieser L. F. Naphtoquinone antimalarials. XVII. Chromic anhydride oxidation.— J. Amer. Chem. Soc., 1948, 70, N 10, p. 3237—3244.•
Fieser L. E., Fieser M., Chakravarti R. N. «a»-Spinasterol.—J. Amer. Chem. Soc., 1949, 71, N 6, p. 2226—2230.
Fieser L. F., Herz J. E., Huang W.-/. 11-Ketolithocholic acid and 11-Ketocholestanol from the A7,9^''-dienes.— J. Amer. Chem. Soc., 1951, 73, N 5, p. 2397.
Fieser L. F., Herz J. E. Synthesis of 11-ketosteroids. II. 11-Ketocholestanol.—J. Amer. Chem. Soc., 1953, 75, N 1, p. 121—124..
Fieser L. F. Cholesterol and companions. II. Exhaustive dichromate oxidation.— J. Amer. Chem. Soc., 1953, 75, N 18, p. 4386—4394.
Fieser L. F. Cholesterol and companions. III. Cholestanol, lathosterol and ketone 104.— J. Amer. Chem. Soc., 1953, 75, № 18, p. 4395—4403.
Fieser L. F., Ourisson G. Cholesterol and companions. IV. Oxidation of A7-stenols with selenium dioxide.— J. Amer. Chem. Soc., 1953, 75, N 18, p. 4404—4414.
Fieser L. F., Nakanishi K., Huang W. A8,I4-Cholestadiene-3 P-yl-7-one acetate.— J. Amer. Chem. Soc., 1953, 75, N 19, p. 4719—4722.
Fieser L. F. Cholesterol and companions. VII. Steroid dibromides.— J. Amer. Chem. Soc., 1953, 75, N 21, p. 5421—5422.
Fieser L. F., Stevenson R. Cholesterol and companions. IX. Oxidation of A6-cholestene-3- one with lead tetraacetate.— J. Amer. Chem. Soc., 1954, 76, N 7, p. 1728—1733.
Fisher A. L., Parfitt A. M., Leoyd H. M. Gas-liguid chromatography of vitamin D as trimethylsilyl derivatives.— J. Chromatogr., 1972, 65, N 3, p. 493—499.
Flanagan P. J., Thomson J. B. Rotational isomerism in bisergostatrienol.— Tetrahedron Lett., 1965, N 22, p. 1671 — 1673.
Ford M. C., Waters W. A. Properties and reactions of free alkyl radicals in solution. III. Some reactions with organic halogen compounds.— J. Chern. Soc., 1952, part 2, p. 2240—2245.
Fraser D. R., Kodicek E. Vitamin D esters : their isolation and identification in rat tissues.— Biochem. J., 1965, 96, N 3, 59P—60P.
Fraser D. R., Kodicek E. The synthesis of vitamin D esters in the rat.— Biochem. J., 1966, 100, N 3, 67 P.
Fraser D. R. Vitamin D esters: nonspecific storage form of vitamin D in the rat.— In: Bibi. «Nutr. et dieta», 1969, N 13, p. 17—19,— Chern. Abstrs, 1970, 72, N 9, 40308.
Fraser D. R., Kodicek E. Unique biosynthesis by kidney of a biologically active vitamin D metabolite.— Nature, 1970, 228, N 5273, p. 764—766.
Freeman D., Acher A., Mazur Y. Synthesis of 1 a-hydroxy-provitamin D3.— Tetrahedron Lett., 1975, N 4, p. 261—264.
Friedlander E. J., Norman A. W. Studies on the metabolism of calciferol. XII. Production in vitro of 1, 24, 25-(OH)3-vitamin D3 and a search for its occurrence in vivo.— Arch. Biochem. and Biophys., 1975, 170, N 2, p. 731—738.
Frolic C. A., DeLuca H. F. 1, 25-Dihydroxycholecalciferol. The metabolite vitamin D responsible for increased intestinal calcium transport.— Arch. Biochem. and Biophys., 1971, 147, N 1, p. 143—147.
Frolic C. A., DeLuca H. F. Metabolism of 1,25-dihydroxycholecalciferol in the rat.— J. Clin. Invest., 1972, 51, N 11, p. 2900—2906.
Frolic C. A., DeLuca H. F. The stimulation of 1,25-dihydroxycholecalciferol metabolism in vitamin D-deficient rats by 1,25-dihydroxycholecalciferol treatment.— J. Clin. Invest., 1973, 52, N 3, p. 543—548.
Frosch J. V., Harrison I. T., Lythgoe B., Saksena A. K. Calciferol and its relatives. XVII. Ring A components for synthetic work on vitamin D3 and on model compounds.— J. Chern. Soc. Perkin Trans. Part I, 1974, N 17, p. 2005—2009.
Fujita A., Tokuhisa S., Michinaka K- Determination of vitamin D by thin-layer chromatography. I. Thin-layer chromatography of vitamin D and related compounds.— Vitamin, 1969, 40, N 3, p. 121—128.
Fukushima M., Suzuki Y., Tohira Y., Matsunaga I., Ochi K-, Nagano H., Nishii Y., Suda T. Metabolism of 1 a-hydroxyvitamin D3 to la, 25-dihydroxyvitamin D3 in perfused rat liver.— Biochem. and Biophys. Res. Communs, 1975, 66, N 2, p. 632—638.
Fukushima M., Suzuki Y., Tohira Y., Nishii Y., Suzuki M., Sasaki S., Suda T. 25-Hyd- roxylation of la-hydroxyvitamin D3 in vivo and in perfused rat liver.— FEBS Lett., 1976, 65, N 2, p. 211—215.
Furst A., Labler L., Meier W., Pfoertner К- H. Synthese von la-Hydroxycholecal- ciferol.— Helv. chim. acta, 1973, 56, N 5, S. 1708—1710.
Furst W. Oxydationsprodukte des Ergosterins. I. Chromatographische Trennung der Oxydationsprodukte. Isolierung neuer Bestrahlungsprodukte des Ergosterins bei EinfluP von Sauerstoff.— Arch. Pharm., 1965, 29 8, N 11, S. 795—804.
Furst W. Oxydationsprodukte des 7-Dehydrocholesterins. I. Herstellung von Oxydations- produkten des 7-Dehydrocholesterins und ihr diinnschichtchromatographisches Verhal- ten.— Arch. Pharm., 1967, 300, N 2, S. 141—143.•
Furst W. Oxydationsprodukte des Ergosterins. III. Abbau des Ergosterins bei der Lage- rung von Trockenhefe.— Arch. Pharm., 1967, 300, N 2, S. 144—148.■
Furst W. Oxydationsprodukte des Lumisterins.— Pharmazie, 1968, 23, N 1, S. 37—38.
Galante L., Colston K. W., MacAuley S. J., MacIntyre J. Effect of calcitonin’on vitamin D metabolism.— Nature, 1972, 238, N 5362, p. 271—273.
Garabedian M., Hotick M. F., DeLuca H. F., Boyle I. T. Control of 25-hydroxycholecal- ciferol metabolism by parathyroid glands. — Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1972 69, N 7, p. 1673—1676.
Gell R. J., Littlewood P. S., Marples B. A., Lythgoe B. Calciferol and its relatives. VIL An alternative route from cholesterol to des-AB-cholestane derivatives.— J. Chern. Soc., 1964, N 12, p. 4914—4920.
Gharbo S., Gosser L. A. A stable and sensitive colorimetric method for the determination of ergocalciferol (vitamin D2) by using trifluoroacetic acid.— Analyst, 1974, 99, N 1177, p. 222—224.-
blotter E., Weissenberg M., Lavie D. Studies on 1,4-dioxo-steroids.— Tetrahedron, 1970, 26, N 15, p. 3857—3871.
Gould D. H., Schaaf К- H., Ruigh W. L. The cleavage of cholesteryl and 7-dehydrocho- lesteryl ethers.— J. Amer. Chern. Soc., 1951, 73, N 3, p. 1263—1267.
Grab W. Die Auswertung der antirachitischen Wirksamkeit neuer Sterinderivate im Ver- such an Ratten und Kiiken.— Hoppe-Seyler’s Z. physiol. Chern., 1936, 243, S. 63—89.
Gray R., Boyle I., DeLuca H. F. Vitamin D metabolism: the role of kidney tissue.— Science, 1971, 172, N 3989, p. 1232—1234.
Gray R., DeLuca H. F. Metabolism of 25-hydroxycholecalciferol and its inhibition by actinomycin D and cycloheximide.— Arch. Biochem. and Biophys., 1971, 145, N 1, p. 276—282.
Green J. Studies on the analysis of vitamins D. I. The reaction of vitamins D and related substances with iodine trichloride.— Biochem. J., 1951, 49, N 1, p. 36—45.
Green J. Studies on the analysis of vitamins D. II. The analytical purification of vitamin D by differential solubility precipitation reactions and chromatography.— Biochem. J., 1951, 49, N 1, p. 45—54.
Green J. Studies on the analysis ot vitamins D. III. Experiments on the separation of vitamin D from vitamin A and other substances by condensation techniques and selective irradiation.— Biochem. J., 1951, 49, N 1, p. 54—58.
Green J. Studies on the analysis of vitamins D. IV. Studies on the irradiation of ergosterol and 7-dehydrocholesterol and the analysis of the products for calciferol, vitamin D3 and component sterols.— Biochem. J., 1951, 49, N 2, p. 232—243.
Grundmann W. Beitrag zur Konstitutionsermittlung des Tachysterins.— Hoppe-Seyler’s Z. physiol. Chern., 1938, 252, S. 151—154...
Guiteras A., Nakamiya Z., Inhoffen H. H. Uber die Einwirkung einiger Oxydationsmittel auf Derivate des Ergosterins.— Ann., 1932, 494, S. 116—126.
Hercsel J., Ecsery Z., Muller E. 7-Dehydrocholesterol, its esters and vitamin D3. Hung. Pat. N 148480, 1961.— Chern. Abstrs., 1963, 58, N 8, 8021.'
Hercsel J., Ecsery Z., Muller M. 7-dehydrocholesterol esters.— Austrian. Pat. N 235473, 1964,— Chern. Abstrs, 1965, 63, N 7, 8460.
Hafez M. M. Bichoiestatriene.— Nature, 1950, 165, N 4193, p. 401—402.
Hallick R. B., DeLuca H. F. 25-Hydroxydihydrotachysterol3. Biosynthesis in vivo and in vitro.— J. Biol. Chern., 1971, 246, N 18, p. 5733—5738.'
Hallick R. B., DeLuca H. F. Metabolites of dihydrotachysterol3 in target tissues.— J. Biol. Chern., 1972, 247, N 1, p. 91—97.
Halkes S. J., Van Vliet N. P. Investigations on sterols. XXXV Synthesis of 25-hydroxycholecalciferol.— Rec. trav. chim., 1969, 88, N 9, p. 1080—1083.
7-Halogensterol esters. Brit. Pat. N 639726, 1950.— Chern. Abstrs, 1950, 44, N 21, 9990.
Hanewald К- H., Rappoidt M. P., Roborgh J. R. The antirachitic activity of previtamin D3.— Rec. trav. chim., 1961, 80, N 9, p. 1003—1014.
Hanewald К. H., Mulder F. G., Keuhing K- J. Analysis of fat soluble vitamins. IX. Thin- layer chromatographic assay of vitamin D in high-potency preparation.— J. Pharm. Sci., 1968, 57, N 8, p. 1308—1312.
Handley G. J. The manufacture of 7-dehydrocholesterol and vitamin D3.— Austral. J. Pharm. Sci., 1959, 40, p. 1079—1080, 1083—1085; Chern. Abstrs, 1960, 54, Nil, 11385.
Harris R. 8., Bunker J. IF. M., Mosher L. M. Quantitative measurement of the ultraviolet activation of sterols. I. Ergosterol.— J. Amer. Chern. Soc., 1938, 60, N 11, p. 2579— 2580.
Harrison I. T., Lythgoe B., Trippett S. Calciferol and its relatives. I. The synthesis of a model conjugated semicyclic triene.— J. Chern. Soc., 1955, N 11, p. 4016—4020.
Har-ison I. T., Lythgoe B. Partial synthesis of calciferol and of epicalciferol.— Proc. Chern. Soc., 1957, N 9, p. 261.'
Harrison I. T., Lythgoe B. Calciferol and its relatives. III. Partial synthesis of calciferol and of epicalciferol.— J. Chem. Soc., 1958, N 2, p. 837—843.
Harrison I. T., Lythgoe B. Calciferol and its relatives. IV. A nonphotochemical synthesis of a model cis-triene.— J. Chem. Soc., 1958, N 2, p. 843—848.
Harrison I. T., Hurst R. A. A., Lythgoe B., Williams D. H. Calciferol and its relatives. V. Epicalciferol.— J. Chem. Soc., 1960, N 12, p. 5176—5179.
Harrison R. G., Lythgoe B., Wright P. W. Total synthesis of la-hydroxyvitamin D3.— Tetrahedron Lett., 1973, N 37, p. 3649—3652.'
Harrison R. G., Lythgoe B., Wright P. W. Calciferol and its relatives. XVIII. Total synthesis of la-hydroxy vitamin D3.— J. Chem. Soc. Perkin Trans. Part I, 1974, N 23, p. 2654— 2657.’
Hasbrouck R. B., Spielman M. A., Hamlin К- E. Preparation of 7-bromocholesterol esters. Pat. USA N 2727906, 1955.— Chem. Abstrs, 1956, 50, N 15, 10804.
Haslewood G. A. D. Derivatives of cis-3-hydroxy-A6-cholenic acid.— J. Chem. Soc., 1938, part 1, p. 224—228.
Haslewood G. A. D. The action of light on substances related to ergosterol.— Biochem. J., 1939, 33, N 4, p. 454—456.
Haussler M. R., Norman A. W. The subcellular distribution of physiological doses of vitamin D3.— Arch. Biochem. and Biophys., 1967, 118, N 1, p. 145—153.
Haussler M. R., Myrtle J. F., Norman A. W. The association of a metabolite of vitamin
D3 with intestinal mucosa chromatin in vivo.— J. Biol. Chern., 1963, 243, N 15, p. 4055— 4064.
Haussler M. R., Boyce D. W., Littledike E. T., Rasmussen H. A rapidly acting metabolite of vitamin D3.— Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1971, 68, N 1, p. 177—181.
Haussler M. R., Zerwekh J. E., Hesse R. H., Rizzardo E., Pechet M. M. Biological activity of la-hydroxycholecalciferol, a synthetic analog of the hormonal form of vitamin D3 — Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1973, 70, N 8, p. 2248—2252.
Havinga E., Bots J. P. L. Studies on vitamin D and related compounds. I. The synthesis of vitamin D3-3C14.— Rec. trav. chim., 1954, 73, N 5, p. 393—400.
Havinga E., Koevoet A. L., Verloop A. Studies on vitamin D and related compounds. IV. The pattern of the photochemical conversion of the provitamins D.— Rec. trav. chim., 1955, 74, N 10. p. 1230—1242.
Havinga E., Verloop A., Koevoet A. L. Studies on vitamin D and related compounds. V. Corroboration of the scheme proposed for the protochemical conversion of the provitamins D, in particular with regard to the place of the previtamins D.— Rec. trav. chim. 1956, 75, N 4, p. 371—377.
Havinga E., de Kock R. J., Rappoldt M. P. The photochemical interconversions of provitamin D, lumisterol, previtamin D and tachysterol.— Tetrahedron, 1960, 11, N 4, p. 276—284.
Havinga E., Schlatmann J. L. M. A. Remarks on the specificities of the photochemical and thermal transformations in the vitamin D field.—Tetrahedron, 1961, 16, N 2, p. 146—152.
HavingaE. Uber einige photochemische Reactionen.— Chimia, 1962, 16, N 5, p. 145—151.
Havinga E. Vitamin D; Example and challenge.— Experientia, 1973, 29, p. 1181— 1193.
Heath-Brown B., Heilbron I. M., Jones E. R. H. Studies in the sterol group. XL1I. The constitution of zymosterol.— J. Chern. Soc., 1940, part 2, p. 1482—1489.
Heftmann E., Shui-Tze Ko, Bennett R. D. Response of steroids to sulfuric acid in thin- layer chromatography.— J. Chromatorg., 1966, 21, N 3, p. 490—494.
Heilbron I. M., Phipers R. F., Wright H. R. The chemistry of the algae. I. The algal sterol fucosterol.— J. Chem. Soc., 1934, part 2, p. 1572—1576.
Heilbron I. M., Samant К. M., Spring F. S. Ring structure of calciferol.— Nature, 1935, 135, N 3426, p. 1072.
Heilbron I. M., Spring F. S., Stewart P. A. Studies in the sterol group. XXL Lumisterol.— J. Chem. Soc., 1935, part 2, p. 1221—1223.
Heilbroi I. M., Jones R. N., Samant К- M., Spring F. S. Studies in the sterol group. XXIV. The constitution of calciferol.— J. Chem. Soc., 1936, part 2, p. 905—907.
Helen L. H., Norman A. W., Taylor A. N., Hartenbower D. L., Coburn J. W. Biological activity of 24,25-dihydroxycholecalciferol of chicks and rats.— J. Nutr., 1976, 106, N 6, p. 724—735.
Henbest H. B., Jones E. R. H., Bide E. A., Peevers R. W., Wilkinson P. A. A new route to 7-dehydrocholesterol, provitamin D3.— Nature, 1946, 158, N 4005, p. 169.
Henbest H. B., Jones E. R. H. Etherification accompanying girard treatment for the separation of ketonic substances.— Nature, 1946, 158, N 4026, p. 950.
Henbest H. B., Jones E. R. H. Studies in the sterol group. XLIX. 7-substituted sterol derivatives and their stereochemistry. Part 2. Esters of the epimeric 7-hydroxy- cholesterols.— J. Chem. Soc., 1948, part 2, p. 1792—1797.
Henbest H. B., Jones E. R. H. Studies in the sterol group. L. 7-Substituted cholesterol derivatives and their stereochemistry. (Part 3). 7-Alkoxycholesterol derivatives.— J. Chem. Soc., 1948, part 2, p. 1798—1803.
Henderson R. G., Ledingham J. G. G., Oliver D. 0., Small D. G., Russell R. G. G., Smith R., Walton R. J., Preston C., Warner G. T., Norman A. W. Effects of la, 25-dihydroxycho- lecalciferol on calcium absorption, muscle wearness and bone disease in chronic renal failure.— Lancet 1, 1974, N 7854, p. 379—384.
Henry H. L., Norman A. W. Studies on calciferol metabolism. IX. Renal 25-hydroxy- vitamin D3-l-hydroxylase. Involvement of cytochrome P-450 and other properties.— J. Biol. Chem., 1974, 249, N 23, p. 7529—7535.
Henry H. L., Norman A. W. Studies on the mechanism of action of calciferol. VIL Localization of 1,25-dihydroxyvitamin D3 in chick parathyroid glands.— Biochem. and Biophys. Res. Communs, 1975, 62, N 4, p. 781—-788.
Henry H. L., Norman A. W. Studies on calciferol metabolism. Regulation of 25-hydro- ■ xyvitamin D3-l-hydroxylase in isolated renal mitochondria.— Arch. Biochem. and Biophys., 1976, 172, N 2, p. 582—589.
Hercsel I., Ecsery Z., Laurencsik Z., SiXmegi J., Komlos F. 7-Dehydrocholesterol esters, 7-dehydrocholesterol and vitamin D3. Hung. Pat. N 151690, 1963,— Chem. Abstrs, 1965, 62, N 7, 7846.
Herstellung von Vitamin D durch Bestrahlung von Ergosterin. Engl. Pat. N 385626, 1932,—Chem. ZbL, 1932, II, p. 570.
Hess A. F., Weinstock M. Antirachitic properties imparted to inert fluids and to green vegetables by ultra-violet irradiation.— J. Biol. Chem., 1924, 62, N 2, p. 301—313.
Hess A. F., Weinstock M. A further report on imparting antirachitic properties to inert substances by ultraviolet irradiation.— J. Biol. Chem., 1925, 63, N 2, p. 297—304.
Hess A. F., Weinstock M., Helman F. D. The antirachitic value of irradiated phytosterol and cholesterol.— J. Biol. Chem., 1925, 63, N 2, p. 305—308.
Hesse R. H., Rizzardo E., Barton D. H. R. la, 3p-Dihydroxy steroid-5-enes method of preparing same and their use for preparing la-hydroxy-25-hydrogen vitamin D compounds. Pat. USA N 3901928, 1975.— РЖХим, 1976, 11О211П.
Heubner W., Holtz F. Uber die biologische Inaktivitat des Ergosterinperoxyds.— Klin. Wochenschr., 1929, 8, S. 456—457.
Heusler K-, Wettstein A. Uber Steroide. 110. Herstellung von 7,9 (11)-Dienen der Andro- stan-Reihe.— Helv. chim. acta, 1952, 35, N 1, S. 284—294.,
Heusser H., Heusler K-, Eichenberger K., Honegger С. C., Joger 0. Uber Steroide und Sexual hormone. Ein neuer Weg zur Synthese von 11-Ketosteroiden. II. Versuche in der Androstan- und der Cholestan-Reihe.— Helv. chim. acta, 1952, 35, N 1, S. 295—307.
Heymann H., Fieser L. F. Die Konfiguration der 7-Oxyderivate des Cholesterins und des Cholestenols.— Helv. chim. acta, 1952, 35, N 2, S. 631—638.
Hibberd K- A., Norman A. W. Comparative biological effects of vitamins D2 and D3 and dihydrotachysterol2 and dihy'drotachysterol3 in the chick.— Biochem. Pharmacol., 1969, 18, N 10, p. 2347—2355.
Higaki M., Yakahashi M., Suzuki 1., Sahashi Y. Metabolic activities of vitamin D in animals. HI. Biogenesis of vitamin D sulfate in animal tissues.— J. Vitaminol., 1965, 11, N 4, p. 261—265.
Hoffman R. M., Daniels F. The formation of vitamin D by cathode rays.— J. Biol. Chem., 1936, 115, N 1, p. 119—130.
Holick M. F., DeLuca H. F. A new chromatographic system for vitamin D3 and its metabolites: resolution of a new vitamin D3 metabolite.— J. Lipid Res., 1971, 12, N 4, p. 460—465.
Holick M. F., Schnoes H. K-, DeLuca H. F. Identification of 1,25-dihydroxycholecal- ciferol, a form of vitamin D3 metaboliccally active in the intestine.— Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1971, 68, N 4, p. 803—804.
Holick M. F., Schnoes H. K-, DeLuca H. F., Suda T., Cousins R. J. Isolation and identification of 1,25-dihydroxycholecalciferol. A metabolite of vitamin D active in intestine.— Biochemistry, 1971, 10, N 14, p. 2799—2804.
Holick M. F., Garabedian M., DeLuca H. F. 5,6-Trans isomers of cholecalciferol and 25-hydroxycholecalciferol. Substitutes for 1,25-dihydroxycholecalciferol in anephric animals.— Biochemistry, 1972, 11, N 14, p. 2715—2719.
Holick M. F., Schnoes H. K-, DeLuca H. F., Gray R. W., Boyle I. T., Suda T. Isolation and identification of 24,25-dihydroxycholecalciferol, metabolite of vitamin D3 made in the kidney.— Biochemistry, 1972, 11, N 23, p. 4251—4255.
Holick M. F., Garabedian M., DeLuca H. F. 1,25-Dihydroxycholecalciferol: metabolite of vitamin D3 active on bone in anephric rats.— Science, 1972, 176, N 4039, p. 1146— 1147.•
Holick M. F., Garabedian M., DeLuca H. F. 5,6-Trans-25-hydroxycholecalciferol: vitamin D analog effective on intestine of anephric rats.— Science, 1972, 176, N 4040, p. 1247—1248.
Holick M. F , Semmler E. I., Schnoes H. K., DeLuca H. F. la-Hydroxy derivative of vitamin D3: a highly potent analog of la, 25-dihydroxytitamin D3.— Science, 1973, 180, N 4082, p. 190—191.
Holick M. F., DeLuca H. F., Kasten P. Л4., Korycka M. B. Isotachysterol3 and 25-hyd- roxyisotachysterol3: analogs of 1,25-dihydroxyvitamin D3.— Science, 1973, 180, N 4089, p. 964—966.
Holick M. F., Kleiner-Bossaller A., Schnoes H. K-, Kasten P. M., Boyle I. T., DeLuca H. F. 1,24,25-Trihydrohy vitamin D3, a metabolite of vitamin D3 effective on intestine—J. Biol. Chem., 1973, 248, N 19, p. 6691—6696.
Holick M. F., DeLuca H. F. 1,25-Dihydroxyvitamin D3: hormonal nature and some analogs.— Endocrinology, 1973, p. 507—511.
Holick M. F., Kasten-Schraufrogel P., Tavela T., DeLuca H. F. Biological activity of la-hydroxyvitamin D3 in the rat.— Arch. Biochem. and Biophys., 1975, 166, N 1, p. 63—66.
Holick M. F., Baxter L. A., Schraufrogel P. K-, Tavela T. E., DeLuca H. F. Metabolism and biological activity of 24,25-DHVD3 in the chick.— J. Biol. Chem., 1976, 251, N 2, p. 397—402.
Holick M. F., Tavela T. E., Holick S. A., Schnoes H. K., DeLuca H. F., Gallagher В. M. Synthesis of la-hydroxy (6-3H) vitamin D3 and its metabolism to la 25-dihydroxy (6 3H) vitamin D3 in the rat.— J. Biol. Chern., 1976, 251, N 4, p. 1020—1024.
Holick S. A., Holick M. F., Tavela T. E., Schnoes H. K-, DeLuca H. F. Metabolism of la-hydroxyvitamin D3 in the chick.— J. Biol. Chern., 1976, 251, N 4, p. 1025— 1028.
Horiuchi N., Suda T., Sasaki S., Ogata E., Ezawa L, Sano Y., Shimazawa E. The regulatory role of calcium in 25-hydroxycholecalciferol metabolism in chick,kidney in vitro.— .Arch. Biochem. and Biophys., 1975, 171, N 2, p. 540—548."
Horner L., Winkelmann E. H. N-Bromsuccinimid, Eigenschaften und Reaktionsweisen. Studien zum Ablauf der Substitution.— Angew. Chern.. 1959, 71, N 11, p. 349—365.
Horsting M., DeLuca H. F. In vitro production of 25-hydroxycholecalciferol.— Biochem. and Biophys. Res. Communs, 1969, 36, N 2, p. 251—256.
Houben-Weyl. Methoden der organischen Chemie. Bd. 5/4. Stuttgart, 1960, S. 219—233.
Huber W., Barlow 0. W. Chemical and biological stability of crystalline vitamins D2 and D3 and their derivatives.— J. Biol. Chern., 1943, 149, p. 125—137.
Huber W., Ewing G. W., Kriger J. The absorption spectra of the vitamins and provitamins D.— J. Amer. Chern. Soc., 1945, 67, N 4, p. 609—617.
Hunziker F., Milliner F. X., Reuteler K- G., Schaltegger H. Zur Dehydrobromierung ■ von 7-Brom-cholesteryl-benzoat: Abnorme Produkte.— Helv. chim. acta, 1955, 38, N 5, S. 1316—1328.
Hunziker F., Milliner F. X. Dehydrohalogehierung mit Trialkylphosphiten: neue Methode ■ zur Herstellung von 7-Dehydro-cholesterin.— Helv. chim. acta, 1958, 41, N 1, S. 70—73.
Ikan R., Markus A., Bergmann E. D. A new synthesis of 7-dehydrosterols.— 1st. J. Chern., 1970, 8, N 5, p. 819—822.
Ikekawa N., Morisaki M., Ohtaka H., Chiyoda Y. Reaction of fucostero 24,28-epoxide with boron trifluoride etherate.— Chern. Communs, 1971, N 22, p. 1498.
Ikekawa N., Morisaki M., Rubio-Lightbourn J., Seki M. Cholest-5-ene-3P, 25, 26-triol and its esters. Japan Kokai 74 109368, 1974.— Chern. Abstrs, 1975, 82, N 25, 171304.
Ikekawa N., Morisaki M., Rubio-Lightbourn J., Seki M. 3P, 24, 25-and 3P 25, 26-Tri- hydroxy-5-cholestene 3P-acetates. Ger. Offen. N 2409971, 1974.— Chern. Abstrs, 1975, 82, N 1, 4480.
Ikekawa N., Morisaki M., Rubio-Lightbourn J. Preparation of 25-hydroxycholesterol and ester thereof. Pat. USA N 3868396, 1975,— РЖХим, 1976, 1О235П.
Ikekawa N., Morisaki M., Bannai K. la-Hydroxycholesterol.— Japan Kokai 75 64263, ' 1975,—Chern. Abstrs, 1975, 83, N 13, 114758.
Ikekawa N., Morisaki M., Rubio F. la, 25-Dihydroxycholesterol. Japan Kokai 75 64264, 1975,— Chern. Abstrs, 1975, 83, N 13, 114759.
Ikekawa N., Morisaki M-, Bannai K. Introduction of a hydroxyl group into la-position of steroids. Japan Kokai 75 69059, 1975.— Chern. Abstrs, 1975, 83, N 13, 114757.
Ikekawa N., Morisaki M., Koizumi N., Sawamura M., Tanaka Y., DeLuca H. F. Synthesis of active forms of vitamin D. VII. Synthesis and biological activity of 24^-and ■ 24c2-hydroxyvitamin D3.— Biochem. and Biophys. Res. Communs, 1975, 62, N 2, p. 485—491.•
Ikekawa N., Morisaki M., Koizumi N., Kato Y., Takeshita T. Synthesis of active forms of vitamin D. VIII. Synthesis of (24R)- and (24S)-la, 24,25-trihydroxyvitamin. D3.— Chern, and Pharm. Bull., 1975, 23, N 3, p. 695—697.
Ikekawa N., Koizumi N. Separation of vitamin D3 metabolites and their analogues by high-pressure liquid chromatography.— J. Chromatorg., 1976, 119, N 2, p. 227—233.
Improvements in or relating to methods of producing an isomerization product of vitamin D or an ester thereof. Brit. Pat. N 790448. 1958.— Chern. Abstrs, 1960 , 54, N 10, 9995.
Improvements in or relating to a method of producing tachysterols and derivatives thereof. Brit. Pat. N 790956, 1958.—Chern. Abstrs, 1960, 54, N 11, 11085.
Improvements in or relating to calciferols. Brit. Pat. N 841741, 1960.— Chern. Abstrs, 1961, 55, N 12, 114-68.
Incremona J. H., Martin J, C. N-Bromosuccinimide. Mechanisms of allylic bromination and related reactions.— J. Amer. Chern. Soc., 1970, 92, N 3, p. 627—634.
Inhoffen H. H., Hauptmann H. Uber die Autoxydation der Bestrahlungsprodukte des Ergosterins.— Hoppe-Seyler’sZ. physiol. Chern., 1932, 207, S. 259—266.
Inhoffen H. H., Bruckner K-, Griindel R. Studien in der Vitamin D-Reihe. I. Umlage- - ■ rung des Vitamins D2 zu einem iso-Tachysterin und Partialsynthese eines iso-Vitamins • D2.— Chern. Ber., 1954, 87, N 1, S. 1—13.
Inhoffen H. H., Weissermel K. Studien in der Vitamin D-Reihe. II. Partialsynthese des ■ iso-Tachysterin-methylathers.— Chern. Ber., 1954, 87, N 2, S. 187—193.
Inhoffen H. H., Kramer H. Studien in der Vitamin D-Reihe. III. Aufbau eines Hydrin- dan-Derivats durch Diensynthese.— Chern. Ber., 1954, 87, N 4, S. 488—496.
Inhoffen H. H., Prinz Е. Studien in der Vitamin D-Reihe. IV. Synthese der 3-Methyl- -3-earboxycyclohexanon-(l)-propionsaure-(2P) sowie ihre Uberluhrung in das 8-Methyl- hydrindandion-(1.4).— Chem. Ber., 1954, 87, N 5, S. 684—689.
inhoffen H. H., Bruckner K-, Griindel G., Quinkert G. Studien in der Vitamin D-Reihe. V. Weitere Untersuchungen an 9,10-seco-Ergostatetraenen zugleich ein Beitrag zur Kon- stitution der Vitamin D-Isomeren.— Chem. Ber., 1954, 87, N 10, S. 1407—1417.
inhoffen H. H., Quinkert G. Studien in der Vitamin D-Reihe. VI. Modellsynthesen zur Fra- ge der cis-trans-Isomerie beim Tachysterin.— Chem. Ber., 1954,87, N 10, S. 1418—1425.
inhofeen H. H., Kath J. Studen in der vitamin D-Reihe. VII. Darstellung neuer Deka- linsysteme und deren Verwendung zu Modellsynthesen von 9,10-seco-D-Homo-steroid- Verbindungen.— Chem. Ber., 1954, 87, N 10, S. 1589—1599.
inhoffen H. H., Kath J., Bruckner K- Partialsynthese einer «trans»-Vitamin D2-Verbindung mit Hilfe der Reaktion von Wittig.— Angew. Chem., 1955, 67, N 9/10, S. 276.
Inhoffen H. H., Weissermel K-, Quinkert G. Studien in der Vitamin D-Reihe. IX. Ring A-Bausteine lur Synthesen des Tachysterins und seiner Analoga.— Chem. Ber., 1955, 88, N 8, S. 1313—1321.
inhoffen H. H., Weissermel K-, Quinkert G., Irmscher K. Studien in der Vitamin D-Reihe. X. Partijlsynthesen von Tachysterin-Analoga.— Chem. Ber., 1955, 88, N 8. S. 1321— 1330.
Inhoffen H. H., Bruckner K-, Domagk G. F., Erdmann H.-M. Studien in der Vitamin D-Reihe. XI. Synthese eines Vitamin D-Modell-triens.— Chem. Ber., 1955, 88, N 9, S. 1415—1423.•
inhoffen H. H., Bruckner K-, Irmscher K-, Quinkert G. Studien in der Vitamin D-Reihe. XII. Die Konstitution des Tachysterins, zugleich Darstellung des u-Tachysterins, eines neuen9, 10-seco-Steroid-triens.— Chem. Ber., 1955, 88, N 9, S. 1424—1431.
Inhoffen H. H., Bruckner K., Hess H.-J. Studien in der Vitamin D-Reihe. XIII. Bildung einer strukturisomeren Vitamin D-Verbindung.— Chem. Ber., 1955, 88, N 12, S. 1850— 1853.
Inhoffen H. H., Weissermel K-, Quinkert G., Bartling D. Studien in der Vitamin D-Reihe. XIV. Ein neuer Weg zu Ring A-Bausteinen Itir die Synthese von 9,10-seco-Steroiden.— Chem. Ber., 1956, 89, N 4, S. 853—861.
inhoffen H. H., Irmscher K. Studien in der Vitamin D-Reihe. XV. Neue Aufbaumethode tor 9,10-seco-Steroide mit dem Triensystem des Tachysterins.— Chem. Ber., 1956 , 89, N 8, S. 1833—1837.
inhoffen H. H., Quinkert G., Hess H.-J., Erdmann H.-M. Studien in der Vitamin D-Reihe. XVI. Die chemische Isomerisierungs-Reine des Vitamins D2.— Chem. Ber., 1956, 89, N 10, S. 2273—2284.
inhoffen H. H. Zur photo-isomerisierung der Provi-tamine D.— Naturwissenschaften, 1956, 43, N 17, S. 396—397.
inhoffen H. H., Kath J., Sticherling W., Bruckner K- Studien in der Vitamin D-Reihe. XVIII. Partialsynthese des 5,6-trans-Vitamin D2.— Ann., 1956, 603, S. 25—36.
inhoffen H. H., Quinkert G., Hess H.-J., Hirschfeld H. Partialsynthese des Vitamins D2.— Naturwissenschalten, 1957, 44, N 1, S. 11.
Inhoffen H. H., Quinkert G., Schutz S., KampeD., Domagk G. F. Studien in der Vitamin D-Reihe. XXL Hydrindau-Verbindungen aus Vitamin D3.— Chem. Ber., 1957, 90, N 5, S. 664—673.'■
Inhoffen H. H. Neuere Ergebnisse aus der Vitamin D-Chemie.— Angew. Chem., 1957, 69, N 7, S. 236.
Inhoffen H. H., Quinkert G., Schutz S. Studien in der Vitamin D-Reihe. XXIII. Aufbau des trans-Hyrindan-ketons aus Vitamin D3 zum vinylogen Aldehyd.— Chem. Ber., 1957, 90, N 7, S. 1283—1286.’
inhoffen H. H., Quinkert G., Hess H.-J., Hirschfeld H. Studien in der Vitamin D-Reihe. XXIV. Photo-isomerisierung der trans-Vitamine D2 and D3 zu den Vitaminen D2 und D3.— Chem. Ber., 1957. 90, N 11, S. 2544—2553.
inhoffen H. H., Quinkert G., Schutz S., Friedrich G., Tober E. Studien in def Vitamin D-Reihe. XXV. Abbau der Vitamine D2 und D3 zum 8-Methyl-trans-hydrinda- nol-(4)-on-(l).— Chem. Ber., 1958, 91, N 4, S. 781—791.
Inhoffen H. H., irmscher K., Hirschfeld H., Stache U., Kreutzer A. Studien in der Vitamin D-Reihe. XXVI. Partialsynthese der Vitamine D2 und D3.— Chem. Ber., 1958, 91, N 11, S. 2309—2324.'
Inhoffen H. H., Schutz S., Rossberg P., Berges 0., Nordsiek К.-H., Plenio H., Horoldt E. Studien in der Vitamin D-Reihe. XXVII. Synthese des (+) und (—)-8-Methyl-trans- -hydrindanol-(4)-ons-(l).— Chem. Ber., 1958, 91, N 12, S. 2626—2635.
Inhoffen H. H., Schaefer H. Studien in der Vitamin D-Reihe. XXVIII. Photo-isomerisierung des Tachysterins2 zu dem Pracalciierol2.—Chem. Ber., 1959 , 92, N 5, S. 1126— 1129.
Inhoffen H. H., Irmscher К., Hirschfeld Н., Stache U., Kreutzer A. Partial synthesis of vitamins D2 and D3.— J. Chem. Soc., 1959, N 1, p. 385—386.
Inhoffen H. H., Irmscher K. Fortschritte der Chemie der Vitamine D und ihrer Abkomm- linge.— Fortschr. Chem. org. Naturst., 1959, 17, S. 70—123.
Inhoffen H. H., Burkhardt H., Quinker. G. Studien in der Vitamin D-Reihe. XXIX. Aufbau der Seitenkette des Vitamins D3. Zugleich Beendigung der Totalsynthese des Vitamins D3.— Chem. Ber., 1959, 92, N 7, S. 1564—1572.
Inhoffen H. H., Irmscher K., Friedrich G., Kampe D., Berges 0. Studien in der Vitamin D-Reihe. XXX. Gegenseitige Umwandlung der vier gesattigten und ungesattigten C]3-Seitenketten-Aldehyde.— Chem. Ber., 1959, 92, N8, S. 1772—1788.
Inhoffen H. H. Aus der Chemie der antirachitischen Vitamine.— Angew. Chem., 1960, 72, N 23, S. 875—881
Irmscher K- Isomerisierung des Dihydrovitamins D2-II zum Dihydrotachysterin2.— Na- turwissenschaften, 1960, 47, N 18, S. 425—426.
Ishikawa M., Kaneko C., Sasaki S., Suda T., Yamada S., Eguchi Y., Sugimoto A. Steroid derivative. Yapan Kokai 75 84555, 1975.— Chem. Abstrs, 1975, 83, N 25, 206483.
Ishikawa M., Kaneko C., Sasaki S., Suda T., Yamada S., Eguchi Y., Sugimoto A. Cho- lestatrienol. Yapan Kokai 75 84560, 1975,- Chem. Abstrs, 1975, 83, N 21, 179 412.
Ishikawa M., Kaneko C., Sasaki S., Suda T., Yamada S., Sugimoto A. 2a-Hydroxy- cholecalciferol. Yapan Kokai 75 100043, 1975.-— Chem. Abstrs, 1976, 84, N 9, 59863.
Ishikawa M., Kaneko C., Sasaki S., Suda T., Yamada S., Sugimoto A. 20-Hydroxycho- lecalciferol. Yapan Kokai 75 100044, 1975.— Chem. Abstrs, 1976, 84, N 17, 122153.
Isolation of cholecalciferol. Neth. Appl. N 6516485, 1966.— Chem. Abstrs, 1967, 67, N 15, 73784.
isomerization product of vitamin D or its ester. Fr. Pat. N 1179953, 1959.— Chem. Abstrs, 1960, 54, N 10, 9995.
Ito S., Oya T. Bromination with N,N-dibromobenzenesulfonamide.— Bull. Chem. Soc. Yapan, 1967, 40, N 2, p. 418—419.
IUPAC Nomenclature of organic chemistry, July 1957. Definitive rules for the nomenclature of amino acids, sterols, vitamins and carotenoids.— J. Amer. Chem. Soc., 1960, 82, N 21, p. 5575—5584.
IUPAC—IUB commission biochemical nomenclature.— J. Biol. Chem., 1966, 241, N 13, p. 2987—2994.
Iwasaki T. Uber die Konstitution der Urzo-desoxycholsaure.— Hoppe-Seyler’s Z. physiol. Chem., 1936, 244, S. 181 — 193.
Jacobelli J. A., Narwid T. A., Uskokovic M.. R. Synthesis of la-hydroxylated cholesterol derivatives. Pat USA N 3887545, 1975.— РЖХим, 1976, 7О247П.
Jacobs H. J. C., Havinga E. Studies on vitamin D and related compounds XIX. Optical rotatory dispersion of some 9, 10, 13-stereoisomeric steroid 5,7-dienes.— Rec. trav. chim., 1965, 84, N 7, p. 932—941.
Jaworska R., Salwa H. Cholecalciferol from cholecalciferol—cholesterol complex. Pol. Pat. N 48332. 1964,— Chem. Abstrs, 1965, 62, N 13, 16350.
Jaworska R., Bury Z., Salwa H., Kotor M. Cholesta-5,7-dien-30-ol. Pol. Pat. N 50166, 1966.— Chem. Abstrs, 1966, 65, N 13, 20197.'
Jaworska R., Bury Z., Salwa H., Malinowska M., Skwarek A. Cholesta-5,7-dien-3P-ol benzoate. Pol. Pat. N 54785, 1968.— Chem. Abstrs, 1969, 70, N 9, 38004.
Jaworska R., Kocor M. Steroidy. XIII. Przemiana benzoesanu 7-bromcholesterylu na zelu krzeminkowym.— Acta pol. pharm., 1970, 27, N 4, s. 331—339.
Jaworska R., Kocor M. Steroidy. Synteza 30-hydroksy-4,6-dienow steroidowych.— Rocz. chem., 1970, 44, N 7-8, s. 1409—1415.
Jaworska R., Kocor M. Sposob wytwarzania pochodnych 3P-hydroksy-4,6-dien6w stery- dowych. Pol. Pat. N 61514, 1972— РЖХим, 1973, 4Н466П.
Jaworska R., Kocor M.. Sposob wytwarzania pochodnych 3P-hydroksy-4,6-dien6w ste- rydowych. Pol. Pat. N 61530, 1971.— РЖХим, 1973, 4Н467П.
Jaworski K., Malunowicz I. Preparation of isomeric cholest-5-ene-3,4-diols.— Bull. Acad, pol. sci. Ser. sci. chim. 1973, 21, N 11, p. 801—807.
Johnson R. L., Okamura IV. H., Norman A. IV. Studies on mode of action of calciferol- X. 24-Nor-25-hydroxyvitamin D3 an analog of 25-hydroxyvitamin D3, having «antivitamin» activity.— Biochem. and Biophys. Res. Communs. 1975, 67, N 2, p. 797-802
Jones E. R. H., Peevers R. IV. 7-Dehydrosterols. Brit. Pat. N 574432, 1946.— Chem. Abstrs, 1948, 42, N 20, 7797.
Jones E. R. H., Bide A. E., Nicholls R. J. Preparation of esters of 7-halogenocholesterol. Pat. USA N 2531688, 1950—Chem. Abstrs, 1951, 45, N 7, 2988.
Jones G., Baxter L. A., DeLuca H. F., Schnoes H. K. Biological activity of 1,25-dihyd- roxyvitamin D2 in the chick.— Biochemistry, 1976 15, N 3. p. 713—716.
Jones G., Schnoes H. K., DeLuca H. F. An in vitro study of vitamin D3 hydroxylases in the chick.— J. Biol. Chem., 1976, 251, N 1, p. 24—28.■
Kaminski 1.4., Bodor N. 3-Bromo-4,4-dimethyl-2-oxazolidinone. Preparation and investigation of a new brominating agent.— Tetrahedron, 1976, 32, N 10, p. 1097—1099.
Kaneko C., Yamada S., Sugimoto Л., Ishikawa M., Sasaki S., Suda T. la-Hydroxylation of cholesterol and the related 3-hydroxysteroids.— Tetrahedron Lett., 1973, N 26, p. 2339—2342.
Kaneko C., Yamada S., Sugimoto A., Eguchi Y., Ishikawa M., Suda T., Suzuki M., Kakuta S., Sasaki S. Synthesis and biologycal activity of la-hydroxyvitamin D3.—Steroids, 1974, 23, N 1, p. 75—92.
Kaneko C., Sugimoto A., Eguchi Y., Yamada S., Ishikawa N., Sasaki S., Suda T. A new synthetic method of la-hydroxy-7-dehydrocholesterol.— Tetrahedron, 1974, 30, N 16, p. 2701—2705.
Kaneko C., Yamada S., Sugimoto A., Ishikawa M., Suda T., Suzuki M., Sasaki S. Synthesis and biological activity of 2a-hydroxyvitamin D3.— J. Chem. Soc. Perkin Trans. Part I, 1975, N 12, p. 1104—1107
Kaneko C., Yamada S., Sugimoto A., Ishikawa M. Synthesis of 20-hydroxychclecalci- ferol.— Chem. and Pharm. Bull., 1975, 23, N 7, p. 1616—1619.
Kaneko C. Synthetic studies of la-hydroxyvitamin D3 and its related compounds — in search of new synthetic analogues of the active metabolite of vitamin D3: la, 25-(OH)3D3.— J. Synth. Org. Chem. Japan, 1975, 33, N 2, p. 75—94
Katscher E. 7-Halogenosterols and 7-dehydrosterols esters. Brit. Pat. N 683129, 1952.— Chem. Abstrs, 1953, 47, N 22, 1243.
Katsutoshi M. Physicochemical determination of vitamin D. II. Alumina liquid chromatography.— Vitamins (Kyoto), 1956, 11, N 2, p. 202—205.
Keverling Buisman J. A., Stevens W., van de Vliet J. Investigation on sterols. I. New synthesis of 7-dehydrocholesterol (provitamin D).— Rec. trav. chim., 1947. 66, N 1, p. 83—92.
Keverling Buisman J. A. 7-Hydroxysterols and esters. Pat. USA N 2520234, 1950.— Chem. Abstrs, 1951, 45, N 2, 676.
Keverling Buisman J. A. 7-Halosterols esters. Pat. USA N 2585998, 1952.— Chem. Abstrs, 1952, 46, N 17, 8154
Keverling Buisman J. A., Hanewald К. H., Mulder F. J., Roborgh J. R., Keuning K- J. Analysis of fat-soluble vitamins. X. Evaluation of the effect of isomerization on chemical and biological assay If vitamin D.— J. Pharm. Sci., 1968, 57, N 8, p. 1326—1329.
Kircher H. IV., Rosenstein F. U. 7-Dehydrostigmasterol. a-spinasterol and schottenol.— J. Org. Chem., 1973., 38, N 12, p. 2259—2260.
Kircher H. IV. Improved synthesis of 7-dehydrositosterol.— Lipids, 1974, 9, N 8, p. 623— 624.
Kircher H. IV., Rosenstein F. U. Reaction of ergosteryl acetate with maleic anhydride and preparation of 5,7-ergostadien-3P-ol.— Lipids, 1975, 10, N 9, p. 517—523.
Klein H. C., Kapp R. Sterol dehydrohalogenation. Pat. USA N 2776304, 1957.— Chem. Abstrs, 1957, 51, N 10, 7447..
Klein H. C., Kapp R. Sterol dehydrohalogenation process. Pat.-USA N 2864829. 1958.— Chem. Abstrs, 1959, 53, N 8, 7245.
Klein H. C., Kapp R. Process for the recovery of 7-dehydrosterols. Pat. USA N 3032562, 1962.— Chem. Abstrs, 1962, 57, N 8, 9930.
Klein H. С., Кар, R. 7-Dehydrosterols. Pat. USA N 3037996, 1962.— Chem. Abstrs, 1962, 57, N 10, 12599.
Kleiner-Bossaller A., DeLuca H. F. Formation of 1,24,25-trihydroxyvitamin D3 irom 1,25-dihydroxyvitamin D3.— Biochim. et biophys. acta, 1974, 338, N 2. p. 489—495.
Knudson A., Benford F Quantitative studies of the effectiveness of ultraviolet radiation of various wavelengths in rickets.— J. Biol. Chem., 1938, 124, N 1, p. 287—299.
Knutson J. C., DeLuca H. F. 25-Hydroxyvitamin D3-24-hydroxylase. Subcellular location and properties.— Biochemistry, 1974, 13, N 7, p. 1543—1548.
Ko Arima. 7-Dehydrocholesterol. Japan. Pat. N 8937, 1955.— Chem. Abstrs, 1958, 52, N 2, 1296.
Kobayashi T. Studies on the chemical isomerization of vitamin D. I. Chemical isomerization of vitamin D2 to isotachysterol by acetyl chloride.— Vitamins, 1964, 30, N 3, p. 219—222.
Kobayashi T. Studies on the chemical isomerization of vitamin D. II. Identification of vitamin D2 and its related compounds by gas chromatographic separation.— J. Vitaminol., 1967, 13, N 4, p. 255—257.
Kobayashi T. Studies on the chemical isomerization of vitamin D. III. Identification of vitamin D2 and its related compounds by alumina column chromatographic separation.— J. Vitaminol., 1967, 13, N 4, p. 258—264.
Kobayashi 7V, Studies on the chemical isomerization of vitamin D. IV. Identification of vitamin D and its related compounds by thin layer chromatography.— J. Vitaminol 1967, 13, N 4, p. 265—267.
Kobayashi T. Studies on the chemical isomerization of vitamin D. V. Chemical isomerization course of vitamin D3 to isotachysterol by acetyl chloride.— J. Vitaminol., 1967, 13, N 4, p. 268—273.
Kobayashi T. Studies on the chemical isomerization of vitamin D. VI. Chemical isomerization of vitamin D2 by boron trifluoride or antimony trichloride.— Vitamins, 1967, 35, N 5, p. 362—365.
Kobayashi T. Studies on the chemical isomerization of vitamin D. VII. Chemical isomerization of vitamin D2 by iodine.— Vitamins, 1967, 35, N 5, p. 366—369.
Kobayashi T. Studies on the chemical isomerization of vitamin D. VIII. Synthesis of bisteroid by the reaction of vitamin D with antimony trichloride containing acetyl chloride.— Vitamins, 1967, 35, N 5, p. 370—374.
Kobayashi T. Studies on the chemical isomerization of vitamin D. IX. On the chemical structure of bisteroid. — Vitamins, 1967, 36, N 6, p. 564—566.
Kobayashi T. Studies on the chemical isomerization of vitamin D.— Vitamins, 1968, 38, N 1, p. 1—9.
Kobayashi T. Studies on the chemical isomerization of vitamin D. X. Reaction products of vitamin D3 with Nield reagent, bisteroids A and B.— J. Vitaminol.. 1969, 15, N 2, p. 126—130.
Kobayashi T., Yasumura M. Studies on the ultraviolet irradiation of provitamin D and its related compounds. I. Quantitative thin-layer chromatography of vitamin D2 in ul- travilet irradiated solution of ergosterol.— Vitamins, 1971, 44, N 3, p. 133—139.
Kobayashi T., Yasumura M. Studies on the ultraviolet irradiation of provitamin D and its related compounds. II. Determination of potential vitamin D2 in ultraviolet irradiated products of ergosterol by gas-liquid chromatography.— J. Vitaminol.. 1972, 18, N 2, p. 78—83.
Kobayashi T. Chemistry of vitamin D and its related compounds. I. Thermal and photochemical isomerization of vitamin D and its related compounds.— Vitamins, 1973, 47, N 5, p. 187—200.
Kobayashi T. Chemistry of vitamin D and its related compounds. II. Total synthesis of vitamin D3 and synthesis of vitamin D3 active metabolites.— Vitamins, 1973, 47, N 8, p. 381—390.
Kobayashi T., Adachi A. Studies on the isomerization of vitamin D and related comunds with acidic reagents. I. A simple method for the determination of vitamin D2 isomers in mixtures.— J. Nutr. Sci. Vitaminol., 1973, 19, p. 303—310.
Kobayashi T., Adachi A. Studies on the isomerization of vitamin D and related com- ■ pounds with acidic reagents. IL Mechanism of the isomerization of vitamin D2 and its isomers with boron trifluoride.— J. Nutr. Sci. Vitaminol., 1973, 19, p. 311—319.
Kobayashi T., Yasumura M. Formation of vitamin D by sunlight irradiation of provitamin D. 1. Procedure for irradiating an ergosterol solution by sunlight and determining vitamin D2 in the irradiated so.ution.— Vitamins, 1975, 49, N 8, p. 353—359.
Kodicek E., Ashby D. R. Paper chromatography of vitamin D and other sterols.— Biochem.
■J., 1954, 57, N 2, p. XII—XIII.'
Kodicek E., Ashby D. R. The estimation of vitamin D by paper chromatography.— Biochem. J., 1954, 57, N 2, p. XIII.
Kodicek E. The biosynthesis of 14C-labelled ergocalciferol.— Biochem. J., 1955, 60, N 3, p. XXV.■
Kodicek E., Lawson D. E. M., Wilson P. W. Biological activity of a polar metabolite of vitamin D3.— Nature, 1970, 228, N 5273, p. 763—764.
Kodicek E. The story of vitamin D from vitamin to hormone.— Lancet I, 1974, N 7853 p. 325—329.
Koevoet A. L., Verloop A., Havinga E. Studies on vitamin D and related compounds II. Preliminary communication on the interconversion and the possible cis-trans isomerism of previtamin D and tachysterol.— Rec. trav. chim., 1955, 74, N 6, p. 788—792.
Koevoet A. L., Verloop A., Keverling Buisman J. A. Method of producing an isomerization product of vitamin D or an ester thereof. Pat. USA N 2840575, 1958.— Chem. Abstrs, 1958, 52, N 22, 20262
Koevoet A. L., Verloop A. Tachysterol and dihydrotachysterol. Pat. USA N 2862934, 1958— Chem. Abstrs, 1960, 54, N 9, 8905.
Koizumi N., Morisaki M., Ikekawa N., Suzuki A., Takeshita T. Absolute configurations of 24-hydroxycholesterol and related compounds.— Tetrahedron Lett., 1975, N 26, p. 2203—2206.
Kolek T., Matunowicz J. Products of oxidation of A5-steroids with tertiary butyl chromate.— Bull. Acad. pol. sci. Ser. sci. chim., 1972, 20, N 11—12, p. 1009—1013.
Коп S. К., Daniels F., Steenbock H. The quantitative study of the photochemical activation of sterols in the cure of rickets.— J. Amer. Chem. Soc., 1928, 50, N 9, p. 2573— 2581.
Kritchevsky D., Kirk M. R. Paper chromatography of steroids.— J. Amer. Chem. Soc., 1952, 74, N 18, p. 4484—4486.
Krol G. J., Mannan C. A., Gemmill F. Q., Hicks G. F., Kho В. T. High-efficiency liquid chromatographic separation of vitamin D from precalciferol.— J. Chromatogr., 1972, 74, N 1, p. 43—49.
Kuhn R., Moller E. Katalytische Mikro-Hydrierung organischer Verbindungen.— An- gew. Chem., 1934, 47, N 10, S. 145—149.
Kumar R., DeLuca H. F. Side chain oxydation of 25-hydroxy (26,27-14C) vitamin D3 and 1,25-dihydroxy (26, 27-14C) vitamin D3 in vivo by chickens.— Biochem. and Biophys. Res. Communs, 1976, 69, N 1, p. 197—201.
Lam H. Y., Schnoes H. K., DeLuca H. F., Chen T. C. 24,25-Dihydroxyvitamin D3. Synthesis and biological activity.— Biochemistry, 1973, 12, N 24, p. 4851—4855.
Lam H. Y., Schnoes H. K., DeLuca H. F. la-hydroxyvitamin D2: a potent synthetic analog of vitamin D2.— Science, 1974, 186, N 4168, p. 1038—1040.
Lam H. Y., Onisko B. L., Schnoes H. K., DeLuca H. F. Synthesis and biological activity of 3-deoxy-la-hydroxyvitamin D3.— Biochem. and Biophys. Res. Communs, 1974, 59, N 3, p. 845—849.
Lam H. Y., Schnoes H. K., DeLuca H. F. Synthesis and biological activity of 25^,26-di- hydroxycholecalciferol.— Steroids, 1975, 25, N 2, p. 247—256.
Lam H. Y., Schnoes H. K., DeLuca H. F., Reeve L., Stern P. H. Structural analogs of la,25-dihydroxycholecalciferol. Preparation and biological assay of la-hydroxypregna- calciferol.— Steroids, 1975, 26, N 4, p. 422—436.
Lardon A., Reichstein T. Synthese der optisch aktiven P-Methoxy-adipinsaure.— Helv. chim. acta, 1949, 32, N 5, S. 1613—1617.
Lardon A., Reichstein T. Die Konfiguration der optisch aktiven P-Methoxy-adipinsauren und des calciferols.— Helv. chim. acta, 1949, 32, N 6, S. 2003—2009.
Lawson D. E. M., Wilson P. W., Kodicek E. New vitamin D metabolite localized in intestinal cell nuclei.— Nature, 1969, 222, N 5189, p. 171—172.
Lawson D. E. M., Wilson P. W., Kodicek E. Metabolism of vitamin D. A new cholecal- ciferol metabolite, involving loss of hydrogen at C-l, in chick intestinal nuclei.— Biochem. J., 1969, 115, N 2, p. 269—277.■
Lawson D. E. M., Fraser D. R., Kodicek E., Morris H. R., Wiliams D. H. Identification of 1,25-dihydroxycholecalciferol, a new kidney hormone controlling calcium metabolism.— Nature, 1971, 230, N 5291, p. 228—230.
Lawson D. E. M., Peic B., Beil P. A., Wilson P. W., Kodicek E. Sy nthesis of (1,2-8H2) cholecalciferol and metabolism of (4-14C, 1,2-3H2) and (4-14C, l-8H)-cholecalciferol in rachitic.rats and chicks— Biochem. J. 1971, 121, N 4, p. 673—682.
Lawson D. E. M., Bell P. A. Metabolism of dihydrotachysterol and 5,6-trans-D3 in the chick and the rat.— Biochem. J., 1974, 142, N 1, p. 37—46.
Lawson D. E. M., Emtage J. S. Molecular action of vitamin D in the chick intestine.— Vitamins and Hormones, 1975, 32, p. 277—298.,
Le Boulch N., Raoul Y., Ourisson G. Epoxydations dans la’serie des seco-steroides. II. Configuration des epoxydes d’ergocalciferol.— Bull. Soc. chim. France, 1967, N 7, p. 2413—2415.
Legrand M., Mathieu J. Etude cinetique de I’isomerisation precalciferol <=; calciferol.— C. r. Acad..sci„ 1957, 245, N 26, p. 2502—2504.
Lettre H. Uber Additionsverbindungen und Mischkrystalle in der Sterin-Reihe.— Ann., 1932, 495, S. 41—60.
Lettre H. Zur Kenntnis der Bestrahlungsprodukte des Ergosterins.— Ann., 1934, 511, S. 280—291.
93. Lettre H., Muller M. Einige Umsetzungen am Cholestantriol.— Chem. Ber., 1937, 70, N 9, S. 1947—1952.
Liebermann C. Uber das Oxychinoterpen.— Chem. Ber., 1885, 18, N 1, S. 1803—' 1809.
Lieberman S., Fukushima D. K. A5-Cholestene-3P. 4p, 7a-triol and the inhibition of the oxidation of hydroxyl groups by vicinal substituents.— J. Amer. Chem. Soc., 1950. 72, N 11, p. 5211—5218.
Linsert 0. Uber das 7-Dehydrostigmasterin.— Hoppe-Seyler’s Z. physiol. Chem., 1936, 241, S. 125—128.
Linsert 0. Irradiation product from vitamin D. Pat. USA N 2030377, 1936.— Chem. Abstrs, 1936, 30, 2326.
Linsert 0. Vitamin D2 double compounds. Pat. USA N 2257176, 1941.— Chem. Abstrs, 1942, 36, N 1, 224.
Linsert 0. Vitamin D3 double compounds. Pat. USA N 2264320, 1941.— Chem. Abstrs, 1942, 36, N 6, 1739.■
Littlewood P. S., Lythgoe B., Saksena A. K. Calciferol and its relateds. XV. The preparation of des-AB-cholest-8-ene-8-carbaldehyde {ip-[(IR)-l,5-dimethylhexyl]-3aa,6,7,7aP-te- trahydro-7a|3-methylindane-4-carbaldehyde} and 9a-chloro-des-AB-cholestan-8-one. {5a- chloro- ip-[(IR)-l,5-dimethylhexyl]-7ap-methyl-trans-perhydroindan-4-one}.— J. Chem. Soc.C, 1971, N 18, p. 2955—2959.
Loken B., Gut M. 6-Methyl-A5.7-sterols and methods of prepare same. Pat. USA N 3468875, 1969.— РЖХим, 1970, 21Н477П.
Louw D. F., Strating J., Backer H. J. A®-Steroids and provitamins D with branched side chains. I. Synthesis of A5-ketosteroids.— Rec. trav. chim., 1954, 73, N 8, p. 649—654.
Louw D. F., Strating J., Backer H. J. A5-Steroids and provitamins D with branched side chains. II. The reduction of A®-ketosteroids via their mercaptals.— Rec. trav. chim.. 1954, 73, N 8, p. 655—661.
Louw D. F., Strating J., Backer Ft. J. AASteroids and provitamins D with branched side chains. III. Preparation and reduction of some AS-steroids-w-amides.— Rec. trav. chim., 1954 , 73, N 8. p. 667—676.
Louw D. F., Strating J., Backer H. J. A6-Steroids and provitamins D with branched side-chains. IV. The conversion of some A5-steroids into provitamins D.— Rec. trav. chim., 1955, 74, N 11, p. 1540—1554.
Lowenbein A. 5,6-Unsaturated-7-halosteroids and 5,6-unsaturated-7-dehydrosteroids. Pat. USA N 2476424, 1949,— Chem. Abstrs, 1950, 44, N 1, 175.-
Lugtenburg J., Havinga E. Studies on vitamin D and related compounds. XX. The conformation of tachysterol, N. О. E. and 220 MHz N. M. R.— Tetrahedron Lett., 1969, N 28, p. 2391—2394.
Lund J., DeLuca H. F. Biologically active metabolite of vitamin D3 from bone, liver and blood serum.— J. Lipid Res., 1966, 7, N 6, p. 739—744.
Lund J., DeLuca H. F., Horsting M. Formation of vitamin D esters in vivo.— Arch. Biochem. and Biophys., 1967, 120, N 3, p. 513—517.
Luthra P. N., Tajal J. N. Colorimetric estimation of vitamin D.— J. Pharm. and Pharmacol., 1957, 9, p. 784.
Lyness IF. /., Quackenbush F. W. New color reaction for vitamin D.— Anal. Chem., 1955, 27, N 12, p. 1978—1980.
Lythgoe B., Trippett S., Watkins J.C. Calciferol and its relatives. II. An alternative synthesis of trans-l-2'-cyclohexylidene-ethylidene-2-methylenecyclohexane.— J. Chem. Soc., 1956, N 11, p. 4060—4065.
Lythgoe B. Some recent advances in the chemistry of the D-vitamins.— Proc. Soc. Chem., 1959, p. 1927—1935.
Lythgoe B., Moran T. A., Nambudiry M. E. N., Ruston S., Tideswell J., Wright P. W. Allylic phosphine oxides as precursors of dienes of defined geometry: synthesis of 3-deo- xyvitamin D2.— Tetrahedron Lett., 1975, N 44, p. 3863—3866.
Maisin J., Mund W., Pourbaix K., Castille A. Influence de Temination du radium sur la transformation de I’ergosterol en vitamine D.— C. r. Soc. biol., 1930, 103, N 7, p. 534—536.•'
Marbet R. Crystallization of vitamin D3. Ger. Offen. N 2004280, 1970.— Chem. Abstrs, 1970, 73, N 21, 110005.
Marner R. E., Rohrmann E. Sterols. LXXV. Cholesterol derivatives.— J. Amer. Chem. Soc., 1939, 61, N 11, p. 3022—3024.
Marshall C. W., Ray R. E., Laos 1., Riegel B. 7-Keto steroids. II. Steroidal 30-hydroxy- A6-7-ones and A3,5-7-ones.— J. Amer. Chem. Soc., 1957 , 79, N 23, p. 6308—6313.
Matthews E. W., Byfield P. G., Colston K. W., Evans I. M., Galante L. S., Macintyre I. Separation of hydroxylated derivatives of vitamin D3 by high speed liquid chromatography.— FEBS Lett., 1974, 48, N 1, p. 122—125.
Matthews J. S., Pereda A. L., Aguilera A. Steroids. CCXV. The quantitative analysis of steroids by thin-layer chromatography.— J. Chromatogr., 1962, 9, N 3, p. 331—338.
Mawer E. B., Backhouse J., Hughes S., Taylor С. M. Metabolism of 1,25-dihydroxy (26, 27-3H) cholecalciferol in man and in the rat after oral and intravenous dosage.— Biochem. Soc. Trans., 1975, 3, N 6, p. 886—888.
Mayor P. A., Meakins G. D. Steroids of unnatural configuration. IV. Oxidation of lumi- sterol and lumisteryl acetate with perbenzoic acid.— J. Chem. Soc.,4 960, N 7, p. 2792— 2800.'
Mayor P. A., Meakins G. D. Steroids of unnatural configuration. V. Preparation of lumis- tanol A from an oxidation product of lumisteryl acetate.— J. Chem. Soc., 1960, N 7, p. 2800—2802.
Mazza F. P., Migliardi G. Dehydrogenation of cholesterol to 7-dehydrocholesterol.— Quad, nutr., 1941, 8, p. 85—96;— Chem. Abstrs, 1943, 37, N 13, 3762.
Mazur J., Rotman A. 25-Hydroxycholesta-4,6-dien-3-one. Ger. Offen. N 2415676, 1974.— Chem. Abstrs, 1975, 82, N 1, 4481.
McGrath В. P., Tedder J. M. Mechanism of allylic bromination by N-bromsuccinimide.— Proc. Chem. Soc., 1961, p. 80—81.
Meakins G. D., Pemberton M. W. Steroids of unnatural configuration. VI. Oxidation and reduction of epilumisterol.— J. Chem. Soc., 1961, N 10, p. 4676—4678.
Merck E. Dihydrotachysterols. Ger. Pat. N 1108215, 1959. —Chem. Abstrs, 1962, 56, N 1, 531.
Mermet-Bouvier R., Naudet G. Sur la production des toxisterols dans la photoisomerisation de I’ergosterol.— Bull. Soc. chim. France, 1970, N 6, p. 2367-—2370.
Mermet-Bouvier R. Analysis of the photochemical isomers of ergosterol by column chromatography.— Anal. Chem., 1973, 45, N 3, p. 584—586.
Mermet-Bouvier R., Abillon E. Ergosterol photoisomerization reaction scheme.—J. Pharm, ■ Sci., 1973, 62, N 6, p. 891—894.
Meuly IF. C. Conversion of 7-esterified steroids such as 7-hydroxycholesterol dibenzoate into the corresponding 7-dehydroproduct. Pat. USA N 2341733, 1944.— Chem. Abstrs, 1944, 38, N 16, 4386.
Meuly IF. C. Oxidation of 3-hydroxy-A6-sterols to the 7-oxoderivatives. Pat. USA N 2505646, 1950.— Chem. Abstrs, 1950 , 44, N 15, 6894.
Mihailovii M. Lj., Lorenc Li., Popov N., Kalvoda J. Synthese, Struktur und Reaktionen von Secosteroiden mit einem mittleren Ring. V. Photochemische Cyclisation von cis- und trans-3P-Acetoxy-5-oxo-Ai <10) -5,10-secocholesten.— Helv. chim. acta, 1971, 54, N 7, p. 2281—2287.
Milas N. A., Hcggie R. The production of an antirachitic provitamin from cholesterol.— J. Amer. Chem. Soc., 1938, 60, N 4, p. 984—985.
Milas N. A., Alderson IF. L. Studie. in the synthesis of the antirachitic vitamins. I. The synthesis of 3-(2'-methylenecyclohexylidene-l')-propene-l.— J. Amer. Chem. Soc., 1939, 61, N 9, p. 2534—2537
Milas N. A., Milone C. R. Studies in the synthesis of the antirachitic vitamins. II. A5- Androstenol-3 and its partial dehydrogenation with benzoquinone.— J. Amer. Chem. Soc., 1946, 68, N 5, p. 738—740.
Milas N. A., Li-Chin Chiang. Studies in the synthesis of the antirachitic vitamins. III. The synthesis of l-cyclohexylidene-2-(5'-methoxy-2-'methylenecyclohexylidene-l')- ethane.— J. Amer. Chem. Soc., 1955, 77, N 15, p. 4180—4181.
Mitra M. N., Norman A. IF., Okamura IF. H. Studies on vitamin D and its analogs. I. Synthesis of la-hydroxycholest-5-ene.— J. Org. Chem., 1974, 39, N 19, p. 2931— 2933.
Moffett R. B., Weisblat D. I. A20 (21)-Steroid enol acetates.— J. Amer. Chem. Soc., 1952, 74, N 9, p. 2183—2185.
Moore R., de Vries T. The activation of ergosterol with radium emanation.— J. Amer. Chem. Soc., 1931, 53, N 7, p. 2676—2681.
Moreau J. P., Aberhart D. J., Caspi E. Synthesis of 5a-cholesta-7,24-dien-3P-ol and cholesta-5, 7, 24-trien-30-ol.— J. Org. Chem., 1974, 39, N 14, p. 2018—2023.
Moriarty R. M., Paaren H., Gilmore J. Synthesis of C (19)-acetoxy precalciferol3 and its conversion into the vitamin D3 analogue.— J. Chem. Soc. Chem. . ommuns, 1974, N 22, p. 927.
Morii H., Lund J., Neville P. F., DeLuca H. F. Biological activity of a vitamin D metabolite.— Arch. Biochem. and Biophys., 1967, 120, N 3, p. 508—512.
Morisaki M., Rubio-Lightbourn J., Ikekawa N. Synthesis of active forms of vitamin D. I. A facile synthesis of 25-hydroxycholesterol.— Chem. and Pharm. Bull., 1973, 21, N 2, p. 457—458.■
Morisaki M., Bannai K., Ikekawa N. Synthesis of active forms of vitamin D. II. Synthesis of la-hydroxycholesterol.—Chem. and Pharm. Bull., 1973, 21, N 8, p. 1853—1854.
Morisaki M., Rubio-Lightbourn J., Ikekawa N., Takeshita T. Synthesis of active forms of vitamin D. V. A practical route to la, 25-dihydroxycholesterol.— Chem. and Pharm. ■ Bull., 1973, 21, N 11, p. 2568—2570.
Morisaki M., Koizumi N., Ikekawa N., Takeshima T., Ishimoto S. Synthesis of active forms of vitamin D. IX. Synthesis of la, 24-dihydroxycholecalciferol.— J. Chem. Soc. Perkin Trans. Part I, 1975, N 14, p. 1421—1424.
Morisaki M., Saika A., Bannai K-, Sawamura M., Rubio-Lightbourn J., Ikekawa N. Synthesis of active forms of vitamin D. X. Synthesis of la-hydroxy vitamin D3.— Chem. and Pharm. Bull., 1975, 23, N 12, p. 3272—3278.
Moriuchi S., Shimura F., Nashimoto K., Hosoya N., Kobayashi T. Biological activity of 1-hydroxyvitamin D3.— Vitamins, 1975, 49, N 5—6, p. 225—232.
Morris IF. IF., Wilkie J. B., Jones S. IF., Friedman L. Differentiation of vitamins D2 and D3 by infrared spectrophotometry.— Anal. Chem., 1962, 34, N 3, p. 381—384.
Morton R. A., Heilbron I. M., Kamm E. D. The absorption spectrum of ergosterol in relation to the photosynthetic formation of vitamin D.— J. Chem. Soc., 1927, part 2, p. 2000—2005.
Mousseron-Canet M., Chavis C., Guida A. Steroides fluores: synthese de fluorocetones en series cholestenique et androstenique.— Bull. Soc. chim. France, 1971, N 2, p. 627— 631.
Muller M. Zur Kenntnis des Vitamin D und seiner thermischen und photochemischen Umwandlungsprodukte.— Hoppe-Seyler’s Z. physiol. Chem., 1935, 233, S. 223—234.
Muller N. Verfahren zur Herstellung von la-Hydroxycholesterinen. Ger. Offen. N 2400189, 1975,— РЖХим, 1976, 6О208П.'
Muller P. B. Zur kolorimetrischen Bestimmung von Vitamin A, Vitamin D und P-Carotin unter besonderer Berficksichtigung des Vitamin D.— Helv. chim. acta, 1947, 30, N 5, S. 1172—1190.
Murray T. K., Day К- C., Kodicek E. The differentiation and assay of vitamins D2 and Ds by gas-liquid chromatography.—Biochem. J., 1965, 96, N 2, 29P—ЗОР.
Murray T. K., Day К- C., Kodicek E. The differentiation and assay of vitamins D2 and Ds by gas-liquid chromatography.— Biochem. J., 1966, 98, N 1, p. 293—296.
Murray T. K., Erdody P., Panalaks T. Determination of vitamin D2 and D3 in pharmaceuticals by gas-liquid chromatography.— J. Assoc. Offic. Anal. Chem., 1968 51, N 4, p. 839—842.
Myrtle J. F., Haussler M. R., Norman A. IF. Evidence for the biologically active form ofcholecalciferol in the intestine.— J. Biol. Chem., 1970, 245, N 5, p. 1190—1196.
Myrtle J. F., Norman A. IF. Vitamin D: a cholecalciferol metabolite highly active in promoting intestinal calcium transport.— Science, 1971, 171, N 3966, p. 79—82.
Nair P. P., Bucana C., de Leon S., Turner D. A. Gas chromatographic studies of vitamins D2 and D3.— Anal. Chem., 1965, 37, N 6, p. 631—636.
Nair P. P., de Leon S. Stereochemical studies on the microquantitative detection of vitamin D by gas-liquid chromatography.— Arch. Biochem. and Biophys., 1968, 128, N 2, p. 663—672.
Narwid T. A., Cooney К- E., Uskokovic M. R. Vitamin D3 metabolites. II. Further synthesis of 25-hydroxycholesterol.— Helv. chim. acta, 1974, 57, N 3, 771—781.
Narwid T. A., Blount J. F., Jacobelli J. A., UskokoviS M. R. Vitamin D, metabolites. III. Synthesis and X-ray analysis of la,25-dihydroxycholesterol.— Helv. chim. acta, 1974, 57, N 3, p. 781—789,
Narwid T. A., Uskokovic M. R. Synthesis of 25-hydroxycholesterol and derivatives thereof. Pat. USA N 3856780, 1974,—РЖХим, 1975, 18О241П.
Nes IF. R., Kostic R. B., Mosettig E. The anthrasteroid rearrangement. IV. The preparation of several new anthrasteroids and some observations on the dehydrobromination of 7-bromo-A5-steroids.— J. Amer. Chem. Soc., 1956, 78, N 2, p. 436—440.
Neville P. F., DeLuca H. F. The synthesis of (l,2-sH)-vitamin D3 and the tissue localization of a 0,25ц g (10Ш) dose per rat.— Biochemistry, 1966, 5, N 7, p. 2201—2207.
Nield С. H., Russell IF. C., Zimmerli A. The spectrophotometric determination of vitamins D2 and D3.— J. Biol. Chem., 1940, 136, N 1, p. 73—79.'
Njim T., Charles G. Procede de preparation du desmosterol. Fr. Pat. N 2149796, 1973.— РЖХим, 1974, 7Н347П.
Norman A. IF., DeLuca H. F. The prepatation of Hs-vitamin D2 and D3 and their localization in the rat.— Biochemistry, 1963, 2, N 5, p. 1160—1168.
Norman A. IF., DeLuca H. F. Chromatographic separation of mixtures of vitamin D2, ergosterol and tachysterol2.— Anal. Chem., 1963, 35, N 9, p. 1247—1250.
Norman A. IF., Lund J., DeLuca H. F. Biologically active forms of vitamin D? in kidney and intestine.—Arch. Biochem. and Biophys., 1964, 108, N 1, p. 12—21.
Norman A. IF., Myrtle J. F., Midgett R. J., Nowicki H. G., Williams V., Popjak G. 1,25-Dihydroxycholecalciferol : identification of the proposed active form of vitamin D3 in the intestine.— Science, 1971, 173, N 3991, p. 51—54.
Norman A. W., Midgett R. J., Myrtle J. F., Nowicki H. G. Studies on calciferol metabolism. I. Production of vitamin D metabolite 4B from 25-OH-cholecalciferol by kidney homogenates.— Biochem. and Biophys. Res. Communs, 1971, 42, N 6, p. 1082—1087.
Norman A. IF., Wong R. G. Biological activity of the vitamin D metabolite 1,25-dihyd- ■ roxycholecalciferol in chickens and rats.— J. Nutr., 1972, 102, N 12, p. 1709—1718.
Norman A. IF. The chemistry and function of vitamin D and metabolites.— Endocrinology, 1973, p. 501—506.
Norman A. W., ProcsalD. A., Okamura W. FL, Wing R. M. Structure-function studies of the interaction of the hormonally active form of vitamin D3 la, 25-dihydroxyvitamin D3 with the intestine.— J. Steroid Biochem., 1975, 6, N 3-4, p. 461—467.
Norman A. W., Mitra M. N., Okamura W. H., Wing R. M. Vitamin D: 3-deoxy-la-hyd- roxyvitamin D3, biologically active analog of la, 25-dihydroxyvitamin D3.— Science, 1975, 188, N 4192, p. 1013—1015.
Norman A. W. The hormone-like action of l,25-(OH)2-cholecalciferol (a metabolite of the fat-soluble vitamin D) in the intestine.— Vitamins and Hormones, 1975, 32, p. 325— 384.
Obermuller K. Beitrage zur Kenntniss des Cholesterins.— Hoppe-Seyler’s Z. physiol. Chem., 1891, 15, N 1, S. 37—48.
Ohtaka H., Morisaki M., Ikekawa N. Reaction of 24,28-epoxides of sterol side chain with boron trifluoride etherate.— J. Org. Chem., 1973, 38, N 9, p. 1688—1691.
Okamura W. FL, Mitra M. N., Wing R. M., Norman A. W. Chemical synthesis and biological activity of 3-deoxy-la-hydroxyvitamin D3, an analog of la, 25-(OH)2D3, the active form of vitamin D3.— Biochem. and Biophys. Res. Communs, 1974, 60, N 1, p. 179—185.
Okamura W. FL, Mitra M. M., Norman A. W., Pirio M. R., Sine S. M., Wing R. M. Synthesis and structural studies of vitamin D analogs.— Fed. Proc., 1974, 33, N 5, p. 1574.
Okamura W. H., Norman A. W., Wing R. M. Vitamin D: concerning the relationship between molecular topology and biological function.— Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1974, 71, N 10, p. 4194—4197.
Okamura W. H., Mitra M. N., Procsal D. A., Norman A. M. Studies on vitamin D and its analogs. VIII. 3-Deoxy-la, 25-dihydroxyvitamin D3, a potent new analog of la, 25- dihydroxyvitamin D3.— Biochem. and Biophys. Res. Communs, 1975, 65, N 1, p. 24—30.
Okamura W- FL, Pirio M. R. Studies on vitamin D (calciferol) and its analogs. IX. la- Hydroxy-3-epivitamin D3: its synthesis and conformational analysis.— Tetrahedron Lett., 1975, N 49, p. 4317—4320.
Oki E., Tsuda K- 4,4-Dimethylvitamin D3. Japan. Pat. N 21727, 1959.— Chem. Abstrs, 1962, 57, N 11, 13852.
Olson E. B., DeLuca H. F. 25-Hydroxycholecalciferol: direct effect on calcium transport.—■ Science, 1969, 165, N 3891, p. 405—407.
Omdahl J. L., DeLuca H. F. Strontium induced rickets: metabolic basis.— Science, 1971, 174, N 4012, p. 949—951.
Omdahl J., Holick M., Suda T., Tanaka Y., DeLuca H. F. Biological activity of 1,25- dihydroxycholecalciferol.— Biochemistry, 1971, 10, N 15, p. 2935—2940.
Omdahl J L., DeLuca H. F. Regulation of vitamin D metabolism and function.— Physiol Revs. 1973, 53, N 2, p. 327—372.
Oppenauer R. V., Oberrauch H. A new oxidant: tertiary butyl chromate.— An. Asoc. quim. argent., 1949, 37, p. 246—262; Chem. Abstrs, 1950, 44, N 9, 3871.
Orazi 0. 0., Meseri J. Halogenation with l,3-dibromo-5,5-dimethylhydantoin.— An. Asoc quim. argent., 1950, 38, N 187, p. 5—11.— Chem. Abstrs, 1951, 45, N 2, 561.
Ottke R C., Bergmann W. Preparation of bicholestatriene from cholesterylacetate.— Nature. 1950, 166, N 4232, p. 997—998.
Parekh С K., Wasserman R. H. Preparation of sH-vitamin D3, using column and thin- layer chromatography.— J. Chromatogr., 1965, 17, N 2, p. 261—266.
697 Parfitt A. M. 1,25-Dihydroxycholecalciferol and la-hydroxychol"ecalciferol in hypoparathyroidism.— Lancet II, 1974, N 7876, p. 360..
Partridge J. J., Uskokooic M. R. Synthesis of 25-hydroxycholesterol. Pat. USA N 3822254, 1974,— РЖХим, 1975, 10О258П.
Partridge J. J., Faber S., Uskokooic M. R. Vitamin D3 metabolites. I. Synthesis of 25- hydroxycholesterol.— Helv. chim. acta, 1974, 57, N 3, p. 764—771.
Peacock M., Gallagher J. C., Nordin В. E. C. Action of la-hydroxy vitamin D3 on calcium absorption and bone resorption in man.— Lancet I, 1974, N 7854, p. 385—389.
Peacock M., Taylor G. A., Redel J The action of two metabolites of vitamin D3: 25, 26- dihydroxycholecalciferol (25, 26-(OH)2D3) and 24, 25-dihydroxycholecalciferol (24, 25- (OH),D3) on bone resorption.— FEBS Lett., 1976, 62, N 3, p. 248—250.
Pelc В Reakce 3p-acetoxy-5a,6P-dibromocholestanu se slouceninami stribra.— Chem. listy, 1957, 51, N 5, s. 946—951
Pelc B., Kodicek E. la-Hydroxycholesterol.— J. Chem. Soc. C, 1970, N 11, p. 1624—1626.
Pelc B., Kodicek E. A simple preparation of la, 2a-epoxy-3-oxo-A4-steroids. — J. Chem. Soc. C, 1971, N 8, p. 1568.
Pelc B., Kodicek E. Synthesis of (l-3H)ergosterol and (1-8H) ergocalciferol.— J. Chem. Soc. C, 1971, N 19, p. 3415—3418.
Pelc B., Kodicek E. Synthesis of (4-14C)ergosterol and (4-44Q ergocalciferol.— J. Chem. Soc. Perkin Trans. Part I, 1972, N 23, p. 2980—2981.
Pelc B. 4a-Hydroxycholecalciferol and an attempted synthesis of its 4P-hydroxyepimer.— J. Chem. Soc. Perkin Trans. Part I, 1974, N 12, p. 1436—1438.
Рёпаи Н., Hagemann G. Etude de la purification et du dosage de la vitamine D2 dans les preparation pharmaceutiques et de quelques esters de calciferol.— Helv. chim. acta, 1946, 29, N 5, p. 1366—1371.
Рёпаи H., Hagemann G. Calciferol esters. Pat. USA N 2484526, 1949.— Chem. Abstrs, 1950, 44, N 4, 1548.
Pesez M. Reactions colorees en serie steroide. II. Calciferol et precalciferol.— Bull. Soc. chim. France, 1949, N 7-8, p. 507—508.
Petrow V. A. Steroids and related compounds. I. Isomeric cholestenediols.— J. Chem. Soc., 1937, part 2, p. 1077—1081.
Petro® V. A. The preparation of A4,6-cholestadien-3P-ol.— J. Chem. Soc., 1940, part 1, p. 66—67.
Petro® V. A., Starling W. IF. Attempted preparation of a hydroxylated provitamin D.— J. Chem. Soc., 1946, part 2, p. 749—751.
Pfordte K. Untersuchugen fiber die Photoisomerisierung des Ergosterins durch UV- Licht.— Hoppe-Seyler’s Z. physiol. Chem., 1958, 312, p. 193—201.
Pfordte K- Lumicalciferol, neues Photoisomeres des Vitamins D.— Pharm. Zentralh., 1967, 106, N 6, S. 370—381.
Pfoertner K., Weber J. P. Photochemie in der Vitamin D-reihe. I. Kinetik und Quanten- ausbeuten der Ergosterinbestrahlung bei X = 253,7 nm.— Helv. chim. acta, 1972, 55, N 3, S. 921—937.
Pfoertner K. Photochemie in der Vitamin D-reihe. II. Die Wellenlamgenabhangigkeit der Photoisomerisation des Pracalciferols.— Helv. chim. acta, 1972, 55, N 3, S. 937— 947.
Pickholz S., Roberts E. Process for the production of 7-halogenosterols. Pat. USA N 2568025, 1951.— Chem. Abstrs, 1952, 46, N 11, 5096.
Pickholz S., Roberts E. 7-Dehydrosterols. Brit. Pat. N 656115, 1951.— Chem. Abstrs, 1952,46, N 17,8154.
Pinelli A., Witzke F., Nair P. P. Separation of vitamin D from cholesterol by thin-layer chromatography.— J. Chromatogr., 1969, 42, N 2, p. 271—274.
Plattner P. A., Heusser H. Uber Steroide und Sexualhormone. 97. Uber Beziehungen zwischen Konstitution und optischer Drehung in der Cholsaure-Reihe.— Helv. chim. acta, 1944, 27, N 3, p. 748—757.
Ponchon G., Fellers F. X. Thin-layer chromatography of vitamin D and related sterols.— J. Chromatogr., 1968, 35, N 1, p. 53—65.
Ponchon G., DeLuca H. F. Metabolites of vitamin D3 and their biologic activity.— J. Nutr., 1969. 99, N 2, p. 157—167.•
Prelog V. Untersuchungen fiber asymmetrische Synthesen. I. Uber den sterischen Ver- lauf der Reaktion von a-Ketosaure-estern optisch aktiver Alkohole mit Grignard’schen Verbindungen.— Helv. chim. acta, 1953, 36, N 1, S. 308—319...
Prelog V., Meier H. L. Untersuchungen fiber asymmetrische Synthesen. II. Uber den sterischen Verlauf der Umsetzung von Phenylglyoxylsaure-estern des Menthols, Neomenthols, Borneols und Isoborneols mit Methylmagnesiumjodid.— Helv. chim. acta, 1953, 36, N 1,S. 320—325..
Procsal D A., Okamura W. H., Norman A. W. Structural requirements for the interaction of la, 25-(OH)2 vitamin D3 with its chick intestinal receptor system.— J. Biok Chem., 1975, 250, N 21, p. 8382—8388.
Raisz L. G., Trummel C. L., Holick M. F., DeLuca H. F. 1,25-Dihydroxycholecalciferok a potent stimulator of bone resorption in tissue culture.— Science, 1972, 175, N 4023, p. 768—769.
Raoul Y., Chopin J., Meunier P., Guerillot-Vinet A. Formation de la vitamine D3 a par- tir du cholesterol en milieu ionisant sans irradiation. Signification biologique possible.— C. r. Acad, sci., 1949, 229, N 3, p. 259—260.
Raoul Y., Chopin J., Meunier P., Le Boulch N., Guerillot-Vinet A. Preparation d’un bi-cholestadiene a partir de la reaction de Salkowski sur le cholesterol et activation anti- rachitique de ce corps.— C. r. Acad, sci., 1951,232, N 11, p. 1154—1156.
Raoul Y., Chopin J., Meunier P., Le Boulch N., Guerillot-Vinet A. Isolement dun nouveau produit antirachitique obtenu a partir du cholesterol sans irradiation. Analogies entre le traitement mixte photo-chimique et chimique d’un bicholestadiene et Г activation chimique du cholesterol.— Bull. Soc. chim. biok, 1951, 33, N 9, p. 1223—1227.
Raoul Y., Le Boulch N., Chopin J., Meunier P., Guerillot-Vinet A. Preparation du corps antirachitique derivant du 2-4, 2'-4'-bicholestadiene.— C. r. Acad, sci., 1952, 234, N 25, p. 2493—2495.
Raoul Y., Le Boulch N., Chopin J., Meunier P., Guerillot-Vinet A. Nouvelle chaine d’activation antirachitique du cholesterol; sa generalite.— C. r. Acad, sci., 1952, 235, N 22, p. 1439—1441.
Raoul Y., Le Boulch N., Chopin J., Meunier P., Guerillot-Vinet A. Presence dans les buries de foies de poissons d’un nouveau compose antirachitique et de son precurseur.— C. r. Acad, sci., 1952, 235, N 25, p. 1704—1706.■■
Raoul Y., Le Boulch N., Chopin J., Meunier P., Guerillot-Vinet A. Donnees nouvelles sur les substances antirachitiques naturelles; leur presence dans 'es vegetaux.— C. r. Acad, sci., 1953, 237, N 6, p. 439—440.
Raoul V., Le Boulch N., Chopin J., Baron C., Guy J., Meunier P., Guerillot-Vinet A. Relations entre les formes nouvelles et anciennes de la vitamine D3.— C. r. Acad, sci., 1954, 238, N 7, p. 846—847.■
Raoul Y., Le Boulch N., Baron C., Guerillot-Vinet A. Purification de la substance antirachitique obtenue a partir du cholesterol sans irradiation.— C. r. Acad, sci., 1954, 239, N 19, p. 1250—1252.
Raoul Y., Le Boulch N., Baron C., Chopin J., Guerillot-Vinet A. Isolement du compose antirachitique forme au cours de faction de la floridine sur le cholesterol.— Bull. Soc. chim. biol., 1954, 36, N 9, p. 1265—1271.
Raoul Y., Baron C., Le Boulch N. Diols d’hydratation des vitamines D2 et D3.— Bull. Soc. chim. France, 1955, 22, N 7, p. 948—952.
Raoul Y., Le Boulch N., Guerillot-Vinet A., Dulov R., Baron C. Structure steroide a noyau В ouvert et oxygene du produit antirachitique obtenu par action d’une argile ac- tivee sur Ie cholesterol.— C. r. Acad, sci., 1955, 241, N 24, p. 1882—1884.
Raoul Y., Boulch N., Baron C., Bazier R., Guerillot-Vinet A. Formes enoliques et cal- ciques de la «cetone 250» d’activite anti-rachitique superieure a celle du calciferol3.— C. r. Acad., Sci., 1956, 242, N 25, p. 3004—3007.
Raoul Y., Le Boulch N., Baron C., Bazier R., Guerillot-Vinet A. Isolement et caracteri- sation du nouveau facteur antirachitique («cetone 250») d’une huile de foie de thon a cote des esters de calciferol 3.— Bull. Soc. chim. biol., 1956, 38, N 3, p. 495—503.
Raoul Y., Le Boulch N., Baron C., Bazier R., Guerillot-Vinet A. Isolement et caracteri- sation du nouveau facteur antirachitique («cetone 250») dans les vegetaux.— Bull. Soc. chim. biol., 1956, 38, N 5-6, p. 885—895.
Raoul Y., Marnay C., Le Boulch N., Prelot M., Guerillot-Vinet A., Bazier R., Baron C. Isolement d’une antivitamine D des parties aeriennes des vegetaux.—C. r. Acad. Sci., 1957, 244, N 7, p. 954—957.
Raoul Y., Le Boulch N. Preparation de la «cetone 250» a partir de la vitamine D des foies de thon.— Bull. Soc. chim. biol. 1963, 45, N 1, p. 145—155.
Rappoldt M. P., Westerhof P., Hanewald R. H., Reverting Buisman J. A. Investigations on sterols. X. The conversion of ergosterol and pre-ergocalciferol by V. A. light of 254 mu.— Rec. trav. chim., 1958, 77, N 3, p. 241—248.
Rappoldt M. P., Reverting Buisman J. A., Havinga E. Studies on vitamin D and related compounds. VIII. The photoisomerization of provitamin D and its irradiation products.— Rec. trav. chim., 1958, 77, N 4, p. 327—330.
Rappoldt M. P., Havinga E. Studies on vitamin D and related compounds. XI. Investigations on sterols. XIII. The photoisomerisation of ergosterol.— Rec. trav. chim., 1960, 79, N 5, p. 369—381.
Rappoldt M. P. Studies on vitamin D and related compounds. XII. Investigations on sterols. XIV. The photoisomerization of lumisterol2.— Rec."trav. chim., 1960, 79, N 5, p. 392—400.
Rappoldt M. P. Studies on vitamin D and related compounds. XIV. Investigations on sterols. XVII. The photoisomerization of pre-ergocalciferol and tachysterol2.— Rec. trav. chim., 1960, 79, N 9, p. 1012—1021.
Rappoldt M. P. Werkwijze voor de bereiding van kristallijne sterolvrije vitamine D3. Гол. пат. N 102019, 1962,— РЖХим, 1964, 7Н215П.
Rappoldt M. P. Crystalline vitamin D3. Ger. Pat. N 1156406, 1963.—Chem. Abstrs, 1964, 60, N 3, 3072.
Rasmussen H., Wong M., Bikie D., Goodman D. Hormonal control of the renal conversion of 25-hydroxycholecalciferol to the 1,25-dihydroxycholecalciferol.— J. Clin. Invest., 1972, 51, N 9, p. 2502—2504.
Redel J., Gauthier B. Contribution a la synthese du dihydro-7-cholesterol.— Bull. Soc. chim. France, 1948, N 5-6, p. 607—611.
Redel J., Bell P., Deibarre F., Rodicek E. Synthese du dehydroxy-25, 26 cholecalciferol, metabolite de la vitamine D3.— C. r. Acad. sci. D, 1973, 276, N 21, p.*2907—2909.
Redel J., Bell P., Deibarre F., Rodicek E. Synthese du dihydroxy-24, 25 cholecalciferol, metabolite polaire de la vitamine D3. — C. r. Acad. sci. D, 1974, 278, N 4, p. 529— 531.
Redel J., Bell P. A., Bazely N., Calando Y., Deibarre F., Rodicek E. The synthesis and biological activity of 25,26-dihydroxycholecalciferol a polar metabolite of vitamin D3.— Steroids, 1974, 24, N 4, p. 463—476.
Redel J., Bazely N., Calando Y., Delbarre F., Bell P. A., Kodicek E. The synthesis of 24,25-dihydroxycholecalciforol, a metabolite of vitamin D3.— J. Steroid Biochem., 1975,
N 2, p. 117—119.
Reerink E. H., tian Wijk A. The photochemical reactions of ergosterol.— Proceedings, 1929, 32, p. 845—848.
Reerink E. H., van Wijk A. The vitamin D problem. I. The photochemical reactions of ergosterol.— Biochem. J., 1929, 23, N 6, p. 1294—1307.
Reerink E. H., van Wijk A. The vitamin D problem. II. Optical rotation of vitamin D.— Biochem. J., 1931, 25, N 4, p. 1001 — 1010.
Reichel S., Deppe M. Uber die Konstitution des Dihydrovitamins D2.— Hoppe-Seyler’s Z. physiol. Chem., 1936, 239, S. 143—146.
Ringold H. J., Rosenkranz G., Djerassi C. Steroidal sapogenins. XX. Synthesis and reactions of the epimeric A6-22-isospirosten-3p, 7-diols.— J. Amer. Chem. Soc., 1952, 74, N 13, p. 3318—3320.
Rojanasath.it S., Haddad J. G. Hepatic accumulation of vitamin D3 and 25-hydroxyvi- tamin D3.— Biochimte. biophys. acta, 1976, 421, N 1, p. 12—21.'
Rosenberg H. R. 7-dehydrosterol compounds. Pat. USA N 2209934, 1940.— Chem. Abstrs, 1941, 35, N 1, 138.
Rosenberg H. R., Tinker J. M. Sterol compounds. Pat. USA N 2215727, 1940.— Chem. Abstrs, 1941, 35, N 1, 758.
Rosenberg H. R. Chemistry and physiology, of the vitamins. New York, Intersci. Publ. Inc., 1945, p. 339—432. 674 p.
Rosenberg H. R Preparation of provitamins. Pat. USA N 2369918, 1945.— Chem. Abstrs, 1945, 39. N 16, 3538.
Rosenheim O., Webster T. A. LXX1. The anti-rachitic properties of irradiated sterols.— Biochem. J., 1926, 20, N 3, p. 537—544.
Rosenheim O., \X «faster T A. The photochemical production of vitamin D from ergosterol.— Lancet 11, 1927, N 12, p. 622—625.
Rosenheim O., Webster T. A. The parent substance of vitamin D.— Biochem, J., 1927, 21, N 1—3, p. 389—397.
Rosenheim O. A specific colour reaction for ergosterol.— Biochem. J., 1929, 23, N 1, : p. 47—53.
Rosenheim O., Starling W. W. The action of selenium dioxide on sterols and bile acids. III. Cholesterol.— J. Chem. Soc., 1937, part 1, p. 377—384.
Rotman A., Masur Y. C25 hydroxylation of cholesterol derivatives.— J. Chem. Soc. Chem. Communs, 1974. N 1, p. 15.
Rubio-Lightbourn J., Morisaki M., Ikekawa N. Synthesis of active forms of vitamin D. III. Synthesis of la, 25-dihydroxycholesterol.— Chem. and Pharm. Bull., 1973, 21, N 8, p. 1854—1856.
Ruigh №. L. 7-Dehvdrocampesterol, a new provitamin D.—J. Amer. Chem. Soc., 1942, 64, N 8, p. 1900—1902.
Ruigh W. L., Gould D. H. 7-Dehydrosterol. Pat. USA N 2546787, 1951.— Chem. Abstrs, 1951, 45, N 17, 7607.1
Ruzicka L., Fischer W. H. Sexualhormone. XXVI. Zur Kenntnis der Oxydation von Cho- lesterin-acetat-dibromid mit Chromtrioxyd.— Helv. chim. acta, 1937, 20, N 5, S. 1291 — 1297.
Ruzicka H., Prelog V., Tagmann E. Steroide und Sexualhormone. Uber die Epimerisie- rung der beiden 7-Oxy-cholesterin-diacetate am Kohlenstoffatom. 7.— Helv. chim. acta, 1944, 27, N 5, S. 1149—1153.
Ryer A. I., Gebert W. H., Murrill N. Al. The preparation of cholesterol from 25-ketonor- cholesterol.— J. Amer. Chem. Soc., 1950, 72, N 9, p. 4247—4248.
Sah P. P. T. Quinones as reagents for the dehydrogenation of cholesteryl acetate to provitamin D.— Rec. trav. chim., 1940, 59, p. 454—460.
Sahashi YL, Suzuki T., Nishikawa T., Tanaka T., Takahashi M., Inaba S., Miyazawa E. Metabolic activities of vitamin D in animals. 1. Decrease of sulfate metabolism in vitamin D deficient chicks.— J. Vitaminol., 1962, 8, N 2, p. 121—127.
Sahashi Y., Suzuki 1., Higaki M., Takahashi M., Asano T., Hasegawa T., Miyazawa E. Metabolic activities of vitamin D in animals. VI. Physiological activities of vitamin D sulfate.—J. Vitaminol., 1967, 13, N 1, p. 37—40.
Sakamoto H., Sugimoto A., Kaneko C. Chemical modifications of androsta-l,4-diene-
dione. I. Synthesis of 2p- and la-hydroxy derivatives of 3P-hydroxyandros- ta-5,7-diene-3, 17-dione 17-ethylene ketal.— Chem. and Pharm. Bulk, 1974, 22, N 12, p. 2903—2909.
Sakamoto H., Sugimoto A., Kaneko C., Suda T., Sasaki S. Chemical modifications of androsta-l,4-diene-3,17-dione. II. Synthesis of 17-nor-vitamin D analogues having
a hydroxy group at la- or 20-position and biological activity of la-hydroxy-17-nor-17,17- ethylenedioxyvitamin D.— Chem. and Pharm. Bull., 1975, 23, N 8, p. 1733—1737.
Salwa H., Jaworska R., Bury Z., Lewenstein W., Vaedthe J., Czarnocka A., Jedrzejuk J. Cholecalciferol. Pol. Pat. N 50925, 1966.—Chem. Abstrs, 1967, 67, N 7, 32894.
Salwa H., Jaworska R., Lewenstein W., Bury Z., Vaedtke J., Jedrzejuk J., Czarnocka A. Isolation of cholecalciferol by complex formation with 7-dehydrocholesterol. Pat. USA N 3367950, 1968,—Chem. Abstrs, 1968, 68, N 26, 117136.
Sanders G. M., Havinga E. Studies on vitamin D and related compounds. XVII. The photo formation of lumisterol.— Rec. trav. chim., 1964, 83, N 7, p. 665—671.
Sanders G. M.,"Pot J., Havinga E. Some recent results in the chemistry and stereochemistry of vitamin D and its isomers.— Fortschr. Chem. org. Naturst., 1969, 27, p. 131—157.
Saunderson С. P., Crowfoot Hodgkin D. The crystal structure of suprasterol. II.— Tetrahedron Lett., 1961, N 16, p. 573—578.
Schaaf К. H. 7-Dehydrocholesterol. Pat. USA N 2542291, 1951. Chem. Abstrs, 1951, 45, N 17, 7606.
Schaaf К. H. 7-Dehydrosterols. Pat. USA N 2546788, 1951.— Chem. Abstrs, 1951, 45, N 17, 7608.
Schaaf К. H., Schmukler S., Klein H. C. Purified crystalline vitamin D3. Pat. USA N 3334118, 1967,—Chem. Abstrs, 1967, 67, N 20, 93976.
Schaltegger H. Die direkte Photobromierung der Cholesterylester in der Allylstellung (C7-Position) Sterineals ionoide Systeme. III.— Helv. chim. acta, 1950, 33, N 7, S. 2101 — 21Ю.
Schaltegger H., Milliner F. X. Uber die epimeren 7-Brom-cholesterylester und die Konfi- guration der С-7-Substituenten in der Cholesterinreihe.— Helv. chim. acta, 1951, 34, N4, S. 1096—1110.
Schaltegger H. Photochemical production of 7-bromocholesteryl esters. Pat. USA N 2633451, 1953.— Chem. Abstrs, 1954, 48, N 8, 4598.
Schaltegger H., Milliner F. Verfahren zur herstellung von physiologisch wirksamen kris- tallisierten vitamin D3-estern. Swiss. Pat. N 314148, 1956.— РЖХим, 1958, N 22, 74998.
Schenk Fr., Buchholz K., Wiese O. Untersuchungen am 7-Dehydrocholesterin.— Chem. Ber., 1936, 69, N 12, S. 2696—2705.
Schenk F. Kristallisierter Vitamin D3.— Naturwissenschaften, 1937, 25, S. 159.
Schenk G. O., NeumUller O. A., Eisfild IF. A6-Steroid-7a-hydroperoxyde und 7-Ketone durch Allylumlagerung von A6-Steroid-5a-hydroperoxyden.— Ann., 1958, 618, S. 202— 210.
Schenck F. 7-Bromocholesterol. Ger. Pat. N 834697, 1953.— Chem. Abstrs, 1957, 51, N 19, 14840.
Schlatmann J. L. M. A., Havinga E. Studies on vitamin D and related compounds. XVI. Synthesis of model compounds for the study of the previtamin D *=; vitamin D interconversion.— Rec. trav. chim., 1961, 80, N 9, p. 1101 — 1114.
Schlatmann J. L. M. A., Pot J., Havinga E. Studies on vitamin D and related compounds. XVIII. An investigation into the inter conversion of precalciferol and calciferol and of analogous compounds.— Rec. trav. chim., 1964 , 83, N 9-10,-p. 1173—1184.
Schmid H., Karrer P. Verbesserung und Erweiterung der Bromierungsmethode mit Brom- succinimid.— Helv. chim. acta, 1946, 29, N 3, S. 573—581.■
Schmutz J., Schaltegger H., Sanz M. A2’4-6-Cholestatrien. Beitragzummechanismus der HBr-Abspaltung aus 7-Brom-cholesterylbenzoat.— Helv. chim. acta, 1951, 34, N 4, S. 1111 — 1122.
Schnoes H. K., DeLuca H. F. Synthetic analogs of la, 25-dihydroxyvitamin D3 and their biological activity.— Vitamins and Hormones, 1975, 32, p. 385—406.
Schoreder С. H., Lechnir R. J., Cleveland P. G., DeLuca H. F., Dersl P. H. 22-dehydro- -25-hydroxycholecalciferol and process for preparing same. Pat. USAN3786062, 1974.— РЖХим, 1974, 23Н472П.
Schubert K. Kristallisierter Dihydrovitamin D2-H.— Naturwissenschaften, 1954, 41, N 10, S. 231.
Schubert K- Zur konfiguration des Dihydrovitamins D2-H.— Biochem. Z., 1954, 32 6, N 2, S. 132—138.
Schubert K., Wehrberger K. Zum Auftreten von Jsomeren des Dihydrovitamins D2-II bzw. Dihydrotachysterins.— Biochem. Z., 1956, 328, N 3, S. 199—215.
Sebrell W. H., Harris R. S. The vitamins. Chemistry, physiologe, pathology. Vol. 2. New York, Acad. Press Inc. Publ., 1954, p. 131—266. 766 p.
Seki M., Rubio-Lightbourn J., Morisaki M., Ikekawa N.Synthesis of active forms of vitamin D.IV. Synthesis of 24, 25- and 25, 26-dihydroxycholesterols.— Chem. and Pharm. Bull., 1973, 21, N 12, p. 2783—2785.
Seki M., Koizumi X., Morisaki M., Ikekawa N. Synthesis of active forms of vitamin D. VI. Synthesis of (24R) and (24S)-24, 25-dihydroxyvitamin D3.— Tetrahedron Lett 1975, Nl,p. 15—18.
Semmler E. J., Holick M. F., Schnoes H. K., DeLuca H. F. The synthesis of la, 25-dihyd- roxycholecalciferol— a metabolically active form of vitamin D3.— Tetrahedron Lett., 1972, N 40, p. 4147—4150.
Setz P. Photochemische Umwandlungen der Bestrahiungsprodukte des Ergosterins.— Hoppe-Seyler’s Z. physiol. Chem., 1933,215, S. 183—192.
Shaw W. H., Jefferies J. P. The determination of vitamin D and related compounds.— Analyst, 1957, 82, p. 8—16.
Sheppard A. J., La Croix D. E., Prosser A. R. Separation of vitamins D2 and D3 as isotachysterols D2 and D3 by gas-liquid chromatography.— J. Assoc. Offic. Anal. Chem , 1968, 51, N 4, p. 834—838.
Sheves M., Mazur Y. The vitamin D-cyclovitamin D rearrangement.— J. Amer. Chem. Soc., 1975, 97, N 21, p. 6249—6250.
Sheves M., Berman E., Freeman D., Masur Y. Conformation equilibria in vitamins D. The synthesis of la-hydroxy-3-epivitamin D3 (la-hydroxy-3a-cholecalciferol.)— J. Chem. Soc. Chem. Communs, 1975, N 15, p. 643—644.
Shue G. M., Friedman L., Tolle C. D. An improvement in the vitamin D line test.— Anal. Chem., 1952, 24, N 11, p. 1841 — 1843.
Siegfried A. G. Previtamin D, vitamin D and their esters, by UV irradiation of provitamin D. Fr. Pat. N 1597408, 1970,—Chem.' Abstrs, 1971, 75, N 3, 20801.
Sine S. M., Conklin T. E., Okamura W. H. Studies on vitamin D and its analogs. VI. 3-Deoxy-A-homovitamin D3, a model synthesis.— J. Org. Chem., 1974, 39, N 25, p. 3797—3799.
Sixma F. L. J., Riem R. H. Mechanism of the Wohl-Ziegler reaction.— Koninkl. Ned. Acad. Wetenschap. Proc. B, 1958, 61, p. 183—187.— Chem. Abstrs, 1959, 53, N 3, 2123.
Sklan D., Budowski P. Simple separation of vitamins D from sterols and retinol by argentation thin-layer chromatography.— Anal. Chem., 1973, 45, N 1, p. 200—201.
Sklan D., Budowski P. Conversion of calciferols to isotachysterols by trifluoroacetic acid.— Anal. Biochem., 1973, 52, N 2 p, 584.—588.
Sklan D., Budowski P., Katz M. Determination of 25-hydroxycholecalciferol by combined thin layer and gas chromatography.— Anal. Biochem., 1973, 56, N 2, p. 606—609.
Snoeren A. E., C., Daha M. R., Lugtenburg J., Havinga E. Studies on vitamin D and related compounds. XXL Photosensitized reactions.— Rec. trav. chim., 1970, 89, N 3, p. 261—264.
Sobel A. E., Mayer A. M., Kramer B. New colorimetric reaction of vitamins D2 and D3 and their provitamins.— Ind. Eng. Chem. Anal. Ed., 1945, 17, N 1, p. 160—165.
Sobel A. E., Owades P. S., Owades J. L. Sulfate esters as intermediates in the formation of 7-dehydrocholesterol and dicholesteryl ether.— J. Amer. Chem. Soc., 1949, 71, N 4, p. 1487—1489.
Sperti G., Norris P., Withrow R., Schneider H. Process for treating food substances with ultraviolet light. Pat. USA N 1982029, 1934.—Zentr. Bit, 1935, I, N 14, 2277.
Spring F. S., Swain G. Dehalogenation of 6-chloro-3-benzoyloxy-A4-cholestene.— J. Chem. Soc., 1941, part 1, p. 83—88.
Spring F. S., Swain G. The conversion of 6-chloro-3-benzoyloxy-A4-cholestene into A4,6- cholestadienyl benzoate.— J. Chem. Soc., 1941, part 1, p. 320—323.
Steenbock H., Black A. Fat-soluble vitamins. XXIII. The induction of growth promoting and calcifying properties in rats and their unsaponifable constituents by exposure to light.—J. Biol. Chem., 1925, 64, N 2, p. 263—298.
Stern P. FL, DeLuca H. F., Ikekawa N. Bone resorbing activities of 24-hydroxy stereoisomers of 24-hydroxyvitamin Ds and 24, 25-dihydroxyvitamin D3.— Biochem. and Biophys. Res. Communs, 1975, 67, N 3, p. 965—971.
Sternberg J. C., Stillo H. S., Schwendeman R. H. Spectrophotometric analysis of multicomponent systems using the least squares method in matrix form. The ergosterol irradiation system.—Anal. Chem., 1960, 32, N 1, p. 84—90..
Sterol derivatives. Brit. Pat. N 454260, 1936.— Chem. Abstrs, 1937, 31, N 4, 1041.
Steuerle H. Bestimmung von vitamin D3 und seinen fotoisomeren in D3-harzen sowie in ■ mischungen mit vitamin A-acetat.— J. Chromatogr., 1975, 115, N 2, p. 447—453.
Stokes W. M., Fish W. A., Hickey F. C. Metabolism of cholesterol in the chick embryo.
■ II. Isolation and chemical nature of two companion sterols.— J. Biol. Chem., 1956, 220, N 1, p. 415—430.
Strafing J., Backer H. J. Compounds related to provitamin D3. I. 7-Dehydrocholesteryl chloride and bromide.— Rec. trav. chim., 1950, 69, N 7-8, p. 904—908.
Strating J., Backer H. J. Compounds related to provitamin D3. II. The sulphur analogue of provitamin D3.— Rec. trav. chim., 1950, 69, N 7-8, p.909—920.
16 8-269--_
Strating J., Backer H. J. Compounds related to provitamin D3. III. Homocholesterol and the corresponding provitamin (3-homoprovitamin D3).— Rec. trav. chim., 1951, 70, N 4, p. 389—402.
Strating J. Compounds related to provitamin D3. IV. 3-Methylcholesterol and the corresponding provitamin (3-methylprovitamin D3).— Rec. trav. chim., 1952, 71, N 8, p. 822— 830.
Suda T., DeLuca H. F., Schnoes H. K., Blunt J. W. The isolation and identification of • 25-hydroxyergocalciferol.— Biochemistry, 1969, 8, N 9, p. 3515—3520.
Suda T., DeLuca H. F., Schnoes H., Blunt J. IF. 25-Hydroxyergocalciferol: a biologically active metabolite of vitamin D2.— Biochem. and Biophys. Res. Communs, 1969, 35, N 2, p. 182—185.
Suda T., Hallick R. B., DeLuca H. F., Schnoes H. K. 25-Hydroxydihydrotachysterol3. Synthesis and biological activity.— Biochemistry, 1970, 9, N 8, p. 1651—1657.’
Suda T., DeLuca H. F., Schnoes H. K., Ponchon C., Tanaka Y., Holick M. F. 21, 25- Dihydroxycholecalciferol. A metabolite of vitamin D3. Preferentially active on bone.— Biochemistry, 1970, 9, N 14, p. 2917—2922.
Suda T., DeLuca H. F., Schnoes H. K., Tanaka Y., Holick M. F. 25, 26-Dihydroxycho- lecalciferol, a metabolite of vitamin D3 with intestinal calcium transport activity. — Biochemistry, 1970, 9, N 24, p. 4776—4780.
Suda T., DeLuca H. F., Hallie R. B. Synthesis of (26, 27-3H)-25-hydroxycholecalcife- rol.— Anal. Biochem., 1971, 43, N.I, p. 139—146.
Takahashi R. Polarographic reduction of vitamin A, P-carotine and vitamin D.— Rev. Polarography, 1961, 9, p. 247—248.
Takahashi R., Tachi J. Polarographic studies on fat-soluble vitamins in nonaqueous media. II. Polarography of vitamin A and its related compounds in acetonitrile-benzene mixture as solvent.— Agr. and Biol. Chern., 1962, 26, N 11, p. 771—776.
Takahashi R., Tachi I. Polarographic studies on fat-soluble vitamins in nonaqueous media. III. Mechanisms of electrode-reductions of vitamin A and its related compounds in acetonitrile-benzene mixture as solvent.— Agr. and Biol. Chern., 1962, 26, N 11, p. 777—782.
Takahashi R. Polarographic studies on fat-solubre vitamins in nonaqueous media. IV. Polarography of vitamin D.— Agr. and Biol. Chern., 1963, 27, N 1, p. 8—11.
Tanaka T., Takahashi M., Miyazawa E., Higaki M., Inaba S., Nishikawa T., Suzuki T., Sahashi Y. Metabolic activities of vitamin D in animals. II. Action of vitamin D3 in active sulfate metabolism of chicks.— J. Vitaminol., 1963, 9, N 1, p. 62—74.
Tanaka Y., DeLuca H. F. Bone mineral mobilization activity of 1,25-dihydroxycholecal- ciferol, a metabolite of vitamin D.— Arch. Biochem. and Biophys., 1971, 146, N 2 p. 574—578.
Tanaka Y., DeLuca H. F. Inhibition of the metabolism of 25-hydroxycholecalciferol by actinomycin D and cycloheximide.— Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1971, 68, N 3, p. 605— 608.
Tanaka Y., DeLuca H. F., Omdahl J., Holick M. F. Mechanism of action of 1,25-dihyd- roxycholecalciferol on intestinal calcium transport.— Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1971, 68, N 6, p. 1286—1288.‘
Tanaka Y., Frank H., DeLuca H. F. Role of 1,25-dihydroxycholecalciferol in calcification of bone and maintenance of serum calcium concentration in the rat.— J. Nutf., 1972, 102, N 12, p. 1569—1577.
Tanaka Y., DeLuca H. F. Role of 1,25-dihydroxyvitamin D3 in maintaining serum phosphorus and curing rickets.— Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1974, 71, N 4, p. 1040—1044.
Tanaka Y., DeLuca H. F., Ikekawa N., Morisaki M., Koizumi N. Determination of stereochemical configuration of the 24-hydroxyl group of 24, 25- dihydroxyvitamin D3 and its biological importance.— Arch. Biochem. and Biophys., 1975, 170, N 2, p. 620—626.
TanakaY., Lorenc R. S., DeLuca H. F. The role of 1,25-dihydroxyvitamin D3 and parathyroid hormone in the regulation of chick renal 25-hydroxyvitamin Ds-24-hydroxylase.— Arch. Biochem. and Biophys., 1975, 171, N 2, p. 521—526.
Tanaka Y., Frank H., DeLuca H. F., Koizumi N., Ikekawa N. Importance of the stereochemical position of the 24-hydroxyl to biological activity of 24-nydroxyvitamin D3.— Biochemistry, 1975, 14, N 15, p. 3293—3296.
Tanret C. Sur un nouveau principe immediat de 1’ergot de seigle, Г ergosterine.— C. r. Acad, sci., 1889, 108, N 2, p. 98—100.
Tanret C. Sur un nouveau principe immediat de Fergot de seigle: I’erogsterine.— Ann. chim. [6], 1890, 20, p. 289—297.
Tanret C. Sur [’ergosterine et la fongisterine.— C. r. Acad. Sci., 1908, 147, N 1, p. 75—77.
Taylor A. N., Wasserman R. H. Vitamin D3-induced calcium-binding protein: partial purification electrophoretic visualization and tissue distribution.— Arch. Biochem. and Biophys., 1967, 119, N 1—3, p. 536—540.
Teng J. I., Kulig M. J., Smith L. L. Sterol metabolism. XXII. Gas chromatographic differentiation among cholesterol hydroperoxides.— J. Chromatogr., 1973,75, N 1 p 108 113.
Toyoda M., Tawara У. Vitamin D3. Ger. Offen. N 2062035, 1971.— Chern. Abstrs 1971 75, N 9, 64120.
Toyoda M., Tawara У. Vitamin D3 mixtures. Pat. USA N 3661939, 1972.— Chern. Abstrs 1972, 77, N 9, 62246.
Trammel C. L., Raisz L. G., Blunt J. IF., DeLuca H. F. 25-Hydroxycholecalciferol: stimulation of bone resorption in tissue culture.—Science, 1969, 163, N 3874, p. 1450 1451.
Trammel C. L., Raisz L. G., Hallick R. B., DeLuca H. F. 25-Hydroxydihydrotachysterol3- stimulation of bone resorption in tissue culture.— Biochem. and Biophys. Res. Communs 1971, 44, N 5, p. 1096—1101.
Tsai H. C., Wong R. G., Norman Л. W. Studies on calciferol metabolism. IV. Subcellu- lar localization of 1,25-dihydroxyvitamin D3 in intestinal mucosa and correlation with increased calcium transport.— J. Biol. Chern., 1972, 247, N 17, p. 5511 —5519.
Tsai H. C., Midgett R. J., Norman A. W. Studies on calciferol metabolism. VIL The effects of actinomycin D and cycloheximide on the metabolism, tissue and subcellular localization, and action of vitamin D3.— Arch. Biochem. and Biophys., 1973 157 N 2, p. 339—347.
Tsai H. C., Norman A. W. Studies on calciferol metabolism. VIII. Evidence for a cytoplasmic receptor for 1,25-dihydroxyvitamin D3 in the intestinal mucosa.— J. Biol Chem 1973, 248, N 17, p. 5967—5975.
Tschapke H., Plessing H. Chemische Vitamin D-Bestimmung mit Zinn (Il)-chlorid. Naturwissenschaften, 1955, 42, N 14, S. 417.
Tsuda К., Ko Arima, Hayatsu R. Cholesterol and related compounds. 1. Structure of a new non-conjugated cholestadienol from 7-bromocholesterol.— J. Amer. Chem. Soc 1954 , 76, N 11, p. 2933—2938.
Tsukida K-, Saiki K. Determination of vitamins D by gas-liquid chromatography. I. Differentiation and assay of vitamins D2 and D3.— J. Vitaminol., 1970, 16, N 4 p. 293 296.
Tsukida K., Saiki K. Determination of vitamins D by gas-liquid chromatography. II. Rapid assay for vitamin D2 in the presence of vitamins A and E.— J. Vitaminol 1972 18, N 3, p. 165—171.
Tsukida K., Saiki K. Mass spectrometric determination of vitamins D in a mixture. Int. J. Vitam. and Nutr. Res., 1972, 42, p. 242-252.
Tulecki J., Adamczewska Z. Chromatografia produktow naswietleft ergosterolu. I. Krzywe adsorpcji ergosterolu, witaminy D2 i ich esterow na tlenku glinowym i krzemionce.— Pr Komis, farm. PTPN, 1961, 1, N 2, s. 27—34.
Tulecki J., Adamczewska Z. Chromatografia produktow naSwietleft ergosterolu. II. Kolum- nowa chromatografia estrow 3,5-dwunitrobenzoesowych ergosterolu i witamin D»Pr Komis, farm. PTPN. 1965, 3, s. 121—128.
Tulecki J., AdamczewskaZ. Chromatografia produktow naswietleft ergosterolu. III. Kolum- nowa chromatografia estrow 3,5-dwunitrobenzoesowych ergosterolu i witaminy D2 na zelu •krzemionkowym.— Pr. Komis, farm. PTPN, 1966, 4, s. 83—89.
Tulecki J., Adamczewska Z. Chromatografia produktow naswietleft ergosterolu. IV. Ko- lumnowa chromatografia estrow 3,5-dwunitrobenzoesowych ergosterolu, tachysterolu i witaminy D2 na tlenku glinowym i zelu krzemionkowym.— Pr. Komis, farm. PTPN 1966, 4, s. 91 — 102.
Tulecki J., Skwarski D. Metody otrzymywania 7-dehydrocholesterolu. I. Odczepianie bro- mowodoru przy uzyciu chininy i papaweryny.— Pr. Komis, farm. PTPN, 1966, 5, s. 95— 98.
Tulecki J., Adamczewska Z. Chromatografia produktow naswietleft ergosterolu. V- Wyod- rebnienie 3,5-dwunitrobenzoesanu witaminy D2 z produktow fotolizy ergosterolu.— Diss, pharm. et pharmacol. PAN, 1967, 19, N 1, s. 75—79.
Tuteck. J., Skwarski D. Metody otrzymywania 7-dehydrocholesterolu. II.— Ann. pharm. (Poznan), 1967, 6, s. 63—67.
Tulecki J., Skwarski D. Metody otrzymywania 7-dehydrocholesterolu III.— Ann. pharm. (Poznan), 1969, 7, s. 9—12.
Tulecki J., Skwarski D. Metody otrzymywania 7-dehydrocholesterolu. IV.— Ann. pharm. (Poznan), 1969, 7, s. 13—15.
Turner A. B. Applications of high-potential quinones. II. Syntheses of steroidal 1,4,6- trien-3-ones.— J. Chem. Soc. C, 1968, N 20, p. 2568—2570.
Ueno Y. Reactions of N,N-dibromobenzensulfonamide on cholesteryl acetate.—J. Pharm. Soc. Japan, 1952, 72, p. 1622—1625.
Van Dam M. J. D., De Kleuver G. J., De Heus J. G. Thin-layer chromatography of weakly polar steroids.— J. Chromatogr., 1960, 4, N 1, p. 26—33.
Van de Vliervoet J. L., Westerhof P., Keverling Buisman J. A., Havinga E. Studies on vitamin D and related compounds. VI. The synthesis and properties of dihy drotachysterol3.— Rec. trav. chim., 1956, 75, N 9—10, p. 1179—1186.
Van tier J. E., Smith L. L. Chromatography of some cholesterol autoxidation products on sephadex LH-20.— J. Chromatogr., 1969, 41, N 1, p. 37—42.
Van Lier J. E., Smith L. L. Autoxidation of cholesterol via hydroperoxide intermediates.— J. Org. Chem., 1970, 35, N 8, p. 2627—2632.
Velluz L., Petit A., Michel G., Rousseau G. Sur un stade non photochimique dans la formation des calciferols.— C. r. Acad, sci., 1948, 226, N 16, p. 1287—1289.
Velluz L., Petit A., Amiard G. Sur un stude non photochimique dans la formation des calciferols. Essais d’interpretation.— Bull. Soc. chim. France, 1948, 15, p. 1115—1120.
Velluz L., Amiard G. Le precalciferol.— C. r. Acad, sci., 1949, 228, N 7, p. 692—694.
Velluz L., Amiard G. Equilibre de reaction entre precalciferol et calciferol.— C. r. Acad, sci., 1949, 228, N 10, p. 853—855.
Velluz L., Amiard G. Nouveau precurseur de la vitamine D3.— C. r. Acad, sci., 1949, 228, N 12, p. 1037—1038.
Velluz L., Amiard G., Petit A. Le precalciferol. Ses relations d’equilibre avec le calciferol.— Bull. Soc. chim. France, 1949, 16, p. 501—507.
Velluz L., Amiard G. Recherches sur le precalciferol.— Bull. Soc. chim. France, 1955, N 2, p. 205—208.'
Velluz L., Amiard G., Goffinet B. Le precalciferol. Structure et photochimie. Son role dans la genese du calciferol et des photoisomeres de I’ergosterol.— Bull. Soc. chim. France, 1955, N 10, p. 1341—1348.
Velluz L., Amiard G., Goffinet B. Epoxydes derives du calciferol et du precalciferol.— C. r. Acad, sci., 1955. 240, N 21, p. 2076—2078.
Velluz L., Amiard G., Goffinet B. Transformation photochimique du precalciferol en tachysterol.— C. r. Acad, sci., 1955, 240, N 22, p. 2156—2157.
Velluz L., Amiard G., Goffinet B. Regression photochimique du precalciferol vers le lumisterol et I’ergosterol.— C. r. Acad, sci., 240, N 24, p. 2326—2328.
Velluz L., Amiard G. Preparation of vitamin D3. Pat. USA N 2707710, 1955.— Chem. Abstrs, 1956, 50, N 9, 6517
Velluz L., Amiard G. Process of preparing vitamin D2. Pat. USA N 2757182, 1956.— Chem. Abstrs, 1956, 50, N 22, 17344.
Velluz L., Amiard G., Goffinet B. Analogues etio du precalciferol.— Bull., Soc. chim. France, 1957, N 7, p. 882—886.
Velluz L., Amiard G., Goffinet B. Analogues etio du precalciferol.— C. r. Acad, sci., 1957, 244, N 13, p. 1794—1796.
Velluz L., Amiard G., Goffinet B. Analogue du precalciferol et son obtention. Fr. Pat. N 1192166, 1959,— Chem. Zbl., 1961, N 51, 18426.
Velluz L., Amiard G., Goffinet B. Analogue du precalciferol et son obtention. Fr. Pat. N 1192180, 1959,— Chem. Abstrs, 1962, 56, N 6, 6060.
Velluz L., Amiard G. La condition de i’equilibre precalciferol calciferol.— C. r. Acad, sci., 1961, 253, N 4, p. 603—606..
Verloop A., Koevoet A. L., Havinga E. Studies on vitamin D and related compounds. III. Short communication on the cis-trans isomerization of calciferol and the properties of «trans» — vitamin D2.— Rec. trav. chim., 1955, 74, N 9, p. 1125—1130.
Verloop A., Koevoet A. L., Havinga E. Studies on vitamin D and related compounds. VIL Some remarks on the stereochemistry of the trienoic systems of vitamin D and related compounds.— Rec. trav. chim., 1975, 76, N 8, p. 689—702.
Verloop A., Koevoet A. L., van Moorselaar R., Havinga E. Studies on vitamin D and related compounds. IX. Remarks on the iodine catalyzed isomerization of vitamin D and related compounds.— Rec. trav. chim., 1959, 78, N II, p. 1004—1014.
Verloop A., Corts G. J. B., Havinga E. Studies on vitamin D and related compounds. X. Preparation and properties cis-isotachysterol2.— Rec. trav. chim., 1960, 79, N 2, p. 164—178.
Vitamins D and рге-vitamins D. Fr. Pat. N 1327114, 1963.— Chem. Abstrs, 1964, 60, N 1, 637.
Vogel H., Knobloch H. Chemie und technik der vitamine. I. Stuttgart, 1950, S. 151—230. 485 p.
Wander A. 7-Bromocholesteryl benzoat. Swiss. Pat. N 273397, 1951.— Chem. Abstrs, 1952, 46, N 11, 5096.
Wander A. 7-Bromosteroids. Brit. Pat. N 671425, 1952.— Chem. Abstrs, 1953, 47, N 5, 2219.
Wander A. 7-Dehydrocholesterol. Swiss. Pat. N 278937, 1952.— Chern. Abstrs, 1953, 47, N 10, 4923.
Wander A. 7-Bromocholesteryl esters. Swiss. Pat. N 304710, 1955.— Chem. Abstrs, 1957, 51, N 4, 2891.
Wander A. 7-Dehydrocholesterol. Swiss. Pat. N 305111, 1955.— Chem. Abstrs, 1957 , 51, N 3, 2067.
Wander A. 7-Dehydrocholesteryl butyrate. Swiss. Pat. N 311199, 1956.— Chem. Abstrs, 1957, 51, N 10, 7447.
Wander A. 7-Dehydrocholesterol 3-esters. Swiss. Pat. N 351960, 1956.— Chem. Abstrs, 1962, 56, N 12, 14376.
Wander A. 7-Dehydrocholesterol. Brit. Pat. N 760460, 1956.— Chem. Abstrs, 1957, 51, N 12, 9722.
Wander A. 7-Dehydrocholesterol. Ger. Pat. N 956509, 1957.— Chem. Abstrs, 1959, 53, N 4, 3280.
Wander A. Physiologically active esters of vitamin D3 and a method of making same. Brit. Pat. N 730245, 1955.— Chem. Abstrs, 1956, 50, N 8, 5783.
Wang Yu, Ting Hung-shium, Huang Jing-jain, Chow Yung-chi, Huang Yao-tseng. Studies on vitamin D. I. 7,8-Dihydroxy-7,8-dihydroxyvitamin D2.— Hua Hstieh Pao, 1958 24, p. 126—134; Chem. Abstrs, 1959, 53, N 6, 5331.
Wasserman R. H., Taylor A. N. Vitamin D3-induced calcium-binding protein in chick intestinal mucosa.— Science, 1966, 152, N 3723, p. 791—793.
Wasserman R. H., Corradino R. A., Taylor A. N. Vitamin D-dependent calcium-binding ■ protein. Purification and some properties.— J. Biol. Chem., 1968, 243, N 14, p. 3978— 3986.
Wasserman R. H., Taylor A. N. Vitamin D-dependent calcium-binding protein. Response to some physiological and nutritional variables.— J. Biol. Chem., 1968, 243, N 14 p. 3987—3993.•
Wasserman R. H., Corradino R. A. Metabolic role of vitamins A and D.— Ann. Rev. Biochem., 1971, 40, p. 512—532.
Wasserman R. H., Corradino R. A., Fullmer C. S., Taylor A. N. Some aspects of vitamin D action: calcium absorption and the vitamin D-dependent calcium-binding protein.— Vitamins and Hormones, 1975, 32, p. 299—324. -
Webster T. A., Bourdillon R. B. Notes on the irradiation of ergosterol.—■ Biochem. J., ■1928, 22, N 5, p. 1223—1230.
Werder F. Ubep Dihydrotachysterin.— Hoppe-Seyler’s Z. physiol. Chem., 1939, 260, S. 119—134.
Werder F. Zur Kenntnis der Dihydrovitamine D2.— Ann., 1957, 603, S. 15—24.
Werder F. Preparation of dihydrovitamins D2. Ger. Pat. N 1038037, 1958; Pat. USA N 2999100, 1961.—Chem. Abstrs, 1960, 54, N 17, 17476.
Westerhof P., Keverling Buisman J. A. Investigations on sterols. VI. The preparation of dihydrotachysterol.— Rec. trav. chim., 1956, 75, N 5, p. 453—462.
Westerhof P., Keverling Buisman J. A. Investigations on sterols. VIII. Some hitherto unknown irradiation products of ergosterol.— Rec. trav. chim., 1956, 75, N 9, p. 1243— 1251.
Westerhof P., Keverling Buisman J. A. Investigations on sterols. IX. Dihydroderivatives - of ergocalciferol.— Rec. trav. chim., 1957, 76, N 8, p. 679—688.
Westerhof P., Keverling Buisman J. A. Investigations on sterols. XII. The conversion of dihydrovitamin D2-I and D2-II into dihydrotachysterol2.— Rec. trav. chim., 1959, 78, N 8, p. 659—662.
Westerhof P. Werkwijze voor be bereiding van dihydrotachysterol of esters daarvan door reductie van tachysterol, precalciferol of esters daarvan. Dutch. Pat. N 93270, 1960.—■ РЖХим, 1961, 22Л250.
Wicha J., Bal K. Synthesis of 25-hydroxycholesterol from 3fl-hydroxyandrost-5-en-17-one. A method for stereospecific construction of a sterol side-chain.— J. Chem. Soc. Chem. Communs, 1975, N 23, p. 968—969.
Wildi B. S. Oxidation of steroids. Pat. USA N 2698853, 1955. Chem. Abstrs, 1955, 49, N 10, 7008.
Wilkie J. B., Jones S. W., Kline O. L. Determination of vitamin D by chemical method involving chromatography and color inhibition.— J. Amer. Pharm. Assoc., 1958, 47, p. 385—394.
Wilson P. W., Lawson D. E. M., Kodicek E. Gas-liquid chromatography of ergocalciferol and cholecalciferol in nanogram quantities.— J. Chromatogr., 1969, 39, N 1, p. 75—77.
Windaus A., Hess A. F. Sterine und antirachitisches Vitamin.— Nachr. Ges. Wiss., Gottingen, math.-phys. kl.,_ 1926, S. 175—184.
Windaus A., Brunken J. Uber die photochemische Oxydation des Ergosterins.— Ann., 1928, 460, S. 225—239.
Windaus A., Kygh 0. Uber die Ester des Ergosterins und ihr Verbal ten bei der Ultravio- lettbestrahlung.— Nachr. Ges. Wiss. Gottingen, math.-phys/kl., 1928, N 2, S. 202—216.
Windaus A., Westphal K., Werder K., Rygh 0. Einige Beobachtungen uber die Ultravic^ lettbestrahlung des Ergosterins.— Nachr. Ges. Wiss., Gottingen, math.- phvs. kl.. 1929 N 1, S. 45—58.
Windaus A. Einige weitere Erfahrungen uber as bestrahle Ergosterin.— Nachr. Ges. ■ Wiss., Gottingen, math.- phys. kl., 1930, N 1, S. 36—57.
Windaus A., Gaede J., Koser J., Stein G. Ober einige krystallysierte bestrahllungsprodukte aus Ergosterin und Dehydroergosterin.— Ann., 1930, 483, S. 17—30.
Windaus A., Auhagen E. Uber die Bestandigkeit des bestrahlen Ergosterins.— Hoppe- Seyler’s Z. physiol. Chern., 1931, 196, S. 108—120.
Windaus A., LUttringhaus A. Einige Bemerkungen uber das antirachitische Vitamin aus bestrahltem Ergosterin.— Hoppe-Seyler’s Z. physiol. Chern., 1931, 203, S. 70—75.
Windaus A., LUttringhaus A., Deppe M. Uber das krystallisierte Vitamin D«.— Ann. ■1931, 489, S. 252—269.
Windaus A., Liitrringhaus A. Uber das Verhalten des Ergosterins und einiger seiner Deri- vate gegentiber Maleinsaure-anhydrid.— Chem. Ber., 1931, 6B, N 4, S. 850—854.
Windaus A., LUttringhaus A., Busse P. Neue Beobachtungen an besirahlungs Producten ■des Ergosterins.— Nachr. Ges. Wiss., Gottingen, 1932, S. 150—159.
Windaus A., Linsert 0., Liitrringhaus A., Weidlich G. Uber das kristallisierte Vitamin D2.— Ann., 1932, 492, S. 226—24.1.
Windaus A., Dithmar K., Fernholz E. Uber das Lumisterin.— Ann., 1932 , 493, S. 259— 271.
Windaus A., Werder F., LUttringhaus A. Uber das Tachisterin.— Ann., 1932, 499, S. 188—200.
Windaus A., Langer R. Uber das 22-Dihydroergosterin.— Ann., 1933, 508, S. 105—114.
Windaus A., Inhoffen H. H., Reichel S. Uber die Konstitution des Ergosterins.— Ann., 1934, 510, S. 248—259.
Windaus A., Lettre H., Schenk F. Uber das 7-Dehydrocholesterin.— Ann., 1935 520, • S. 98—106.
Windaus A., Schenk F., Werder F. Uber das antirachitisch Wirksame Bestrahlungspro- dukte aus 7-Dehydrocholesterin.— Hoppe-Seyler’s Z. physiol. Chem., 1936, 241, S. 100— 103.
Windaus A., Thiele W. Uber die Konstitution des Vitamins D2.— Ann., 1936, 521, ■ S. 160—175.
Windaus A., Grundmann W. Uber die Konstitution des Vitamins D2.— Ann., 1936, 524 S. 295—299.
Windaus A., Trautmann G. Uber das krystallisierte Vitamin D4.— Hoppe-Seyler’s Z. physiol. Chem., 1937, 247, S. 185—188.
Windaus A., Schenk F. Dehydrosterol compounds. Pat. USA N 2098984, 1937.— Chem. Abstrs, 1938, 32, N 1, 196.
Windaus A., Schenk F. 7-Hydroxycholesterol. Pat. USA N 2098985, 1937.— Chem. ■ Abstrs, 1938, 32, N 1, 196.
Windaus A., Dimroth K. Die Konstitution des Lumisterins Und der Erhitzungsprodukte • des Vitamins D2 (calciferols).— Chem. Ber., 1937, 70, N 2, S. 376—379.
Windaus A., Buchholz K. Uber ein Keton des Vitamins D2.— Hoppe-Seyler’s Z. physiol. ■ Chem., 1938, 256, S. 273—276.
Windaus A., Schenk F., Werder F. Abtrennung des antirachitische wirkenden Bestand- ■ teils aus bestrahltem 7-Dehydrochoiesterin. D. R. Pat. N 661686, 1938.— Chem. ZbL, ■ 1938, II, 2793.
Windaus A., Deppe M., Wunderlich W. Uber einige Bestrahllungsprodukte aus 7-Dehydrocholesterin.— Ann., 1938, 533, S. 118—127.
Windaus A., Linsert 0., Eckhardt H. J. Uber iso-Dehydro-cholesterin (A6,8-Cholestadien- -3-01).— Ann., 1938, 534, S. 22—41.
Windaus A., ZUhlsdorff G. Uber ein Bestrahlungsprodukt des A6,8-Cholestra-dienols.— Ann., 1938, 536, S. 204—216.
Windaus A., Deppe M., Roosen-Runge G. Uber die Pyro-vitamine D3 und ihre Dehydro- derivate.— Ann., 1939, 537, S. 1—10.
Windaus A., Giintzel B. Uber einige Bestrahllungsprodukte des 22-Dihydroergosterins.— Ann., 1939, 538, S. 120—127.
Windaus A., Naggatz I. Uber das 7-Dehydro-epicholesterin.— Ann., 1939, 542, S. 204— 218.
Windaus A., Kaufmann 0. Uber das Dehydro-cholestenon und seine hydrierung mit Alu- minium-iso-propylat.— Ann., 1939, 542, S. 218—224.
Windaus A., Roosen-Runge C. Zur Konstitution des Dihydrovitamins D2 and D3.— Hoppe- Seyler’s Z. physiol. Chem., 1939, 260, S. 181—184.
Windaus A., Buchholz К. Uber die Hydrierung des Ergosterons.— Chem. Ber., 1939, 72B, N 3, S. 597—599.
Windaus A., Dimroth K., Breywisch IF. Uber den photochemischen Vorgang bei der Bil- dung der Photo-pyrocalciferole.— Ann., 1940, 543, S. 240—247.
Windaus A., Riemann U. Uber die Einwirkung von Bleitetra-acetat auf einige Sterinderi- vate.— Hoppe-Seyber’s Z. physiol. Chem., 1942, 2 74, S. 206—214.
Windaus A. Nachtrag zu der Arbeit «Uber die Einwirkung von Bleitetra-acetat auf einige Sterinderivate».— Hoppe-Seyler’s Z. physiol. Chem., 1942, 276, S. 280—281.
Windaus A., Schenk F. Antirachitic products from sterols. Ger. Pat. N 763984, 1952.— Chem. Abstrs, 1955, 49, N 4 , 2684.
Wing R. M., Okamura W. H., Pirio M. R., Sine S. M., Norman A. W. Vitamin D in solution : conformations of vitamin D3, la, 25-dihydroxyvitamin D3 and dihydrotachysterols.— Science, 1974, 186, N 4167, p. 939—941.
IFing R. Л4., Okamura IF. H., Rego A., Pirio M. R., Norman A. IF. Studies on vitamin D and its analogs. VIL Solution conformations of vitamin D3 and la, 25-(OH)2D3 by high resolution proton magnetic resonance spectroscopy.— J. Amer. Chem. Soc., 1975, 97, N 17, p. 4980—4985.
Wintersteiner 0., Bergstrom S. The products formed by the action of oxygen on colloidal solutions of cholesterol.— J. Biol. Chem., 1941, 137, N 2, p. 785—786.
Wintersteiner 0., Ruigh IF. L. 7-Benzoxysterols and their use in the preparation of 7-de- hydrosterols.— J. Amer. Chem. Soc., 1942, 64, N 5, p. 1177—1179.
Wintersteiner 0., Ruigh IF. L. On the epimeric 7-hydroxycholesterols.— J. Amer. Chem. Soc., 1942, 64, N 10, p. 2453—2457.'
Wintersteiner 0., Moore M. The preparation and properties of the 7-epimeric cholestane- diols-3P, 7,— J. Amer. Chem. Soc., 1943, 65, N 8, p. 1503—1507.
Wintersteiner 0., Ruigh IF. L. 3-Hydroxy-7-dehydro-As-polyhydrocyclopentenophenant- hrenes. Pat. USA N 2411177, 1946.— Chem. Abstrs, 1947, 41, N 5, 1398.
Wintersteiner 0., Moore M. The Pyrolysis of 3P-acetoxycholestan-7a-yl benzoate. Ae- Cholestenol.— J. Amer...Chem. Soc., 1950, 72, N 5, p. 1923—1930.
IFittigG.,Schollkopf U. Uber triphenyl-phosphinmethylene als olefinbildende reagenzien.— Chem. Ber., 1954 , 87, N 9, S. 1318—1330.
Wohl A. Bromierung ungesattigter Verbindungen mit N-Brom-acetamid, ein Beitrag zur Lehre vom Verlauf chemischer Vorgange.— Chem. Ber., 1919, 52, N 1, S. 51—63.
Wohl A., Yaschinowski K. Weitere Versuche fiber Bromierung ungesattigter Verbindungen mit N-Bromacetamid.— Chem. Ber., 1921, 54, N 1, S. 476—484.■
Wolinsky J., Baxter L. L., Hamsher J. Thermal isomerization of ergosterol and dehydrocholesterol.— J. Org. Chem., 1968, 33, N 1, p. 438—439.
Wong R. G., Myrtle J. F., Tsai H. C., Norman A. IF. Studies on calciferol metabolism. V. The occurrence and biological activity of 1,25-dihydroxyvitamin D3 in bone.— J. Biol. Chem., 1972, 247, N 18, p. 5728—5735.
Woorward R. B., Sondheimer F., Taub D. The total synthesis of some naturally occurring steroids.— J. Amer. Chem. Soc., 1951, 73, N 7, p. 3547—3548.
Woodward R. B., Sondheimer F., Taub D. The total synthesis of cholesterol.— J. Amer.
■ Chem. Soc., 1951, 73, N 7, p. 3548.
Woodward R. B., Sondheimer F., Taub D., Heusler K., MeLamore N. M. The total synthesis of steroids.— J. Amer. Chem. Soc., 1952, 74, N 17, p. 4223—4251.
Wunderlich IF. Uber das 7-Dehydrositosterin.— Hoppe-Seyler’s Z. physiol. Chem., 1936, 241, S. 116—124.
Ziegler K., Spath A., Schaaf E., Schumann IF., Winkelmann E. Halogenierung ungesattigter substanzen in der allylstellung.—-Ann., 1942, 551, S. 80—119.
Ziffer H., Vanden Heuvel IF. J. A., Haahti E. 0., Horning E. C. Gas chromatographic behavior of vitamins D2 and D3.— J. Amer. Chem. Soc., 1960, 82, N 24, p. 6411—6412.
Предметный указатель
Альдегид Heilbron 119 7-Аминохолестерин 73 Андроста-5,7-диен-Зр-ол 30 Андроста-5,7-диен-Зр, 17 р-диол 30•
Андрост-5-ен-З р-ол-17-он 98
Аппараты облучательные 151—152
3-Ацетокси-6-(диметиламинометнл)-цик- логексанон 118
п-Ацетоксициклогексанон 129
Бензоилирование холестерина 160—162 Бензойная кислота, количественное определение 162
Бихолестадиенол 65
Бромирование
— аллильное 74—76
— бензоата холестерина 163—165
— эфиров холестерина 76—80 4-Бромхолест-5-ен-3 Р-ол-7-он, бензоат 79, 143, 202
3 р-Бромхолест-5-ен 201 5ст-Бромхолест-6-ен-Зр-ол, бензоат 80—81 7 а-Бромхолест-5-ен-Зр-ол — ацетат 76, 201
— бензоат 76—77, 201—202
— дегидробромирование 80—84
— ИК-спектр 202
— количественное определение 164—165 — получение 163—164
— полярография 143
7 р-Бромхолест-5-ен-З р-ол, бензоат 76— ■ 78, 80—82, 202
Видеин-3 146
Видеин D3 146
Видехол (см. Витамин D3, аддукт с холестерином)
Витамин D3 7, 50, 171
Витамин О2 50, 56, 171
— биологическая активность 27—29 — ГЖХ 140—142
— ИК-спектр 144, 171
— кристаллический 157—158
— масс-спектрометрия 145, 171
— метаболизм 17
— окисление 68—70
Витамин D2— полный синтез 117—124
— полярография 142—143
— потребность 48
— применение 48—49
роль в организме 12—14
структура 8—11
— технология получения 146—158
— УФ-спектроскопия 144
— химическая изомеризация 67—68
— хроматография бумажная 135—136
— — колоночная 136
тонкослойная 137—138
— эфиры 172
биологическая активность 32
— ЯМР-спектроскопия 145
Витамин D3 57, 172
— аддукт с 7-дегидрохолестерином 158—•
с холестерином 158—159, 173
— ацетат 33, 153
— биологическая активность 12—14, 27—
29
— ГЖХ 140—142
— идентичность природному антирахити- ческому фактору 8
— ИК-спектроскопия 144, 172
— количественное определение в спирта- вом концентрате 156—157.
— в масляных растворах 157
— конформеры 46
— кристаллический 158—160
— масс-спектрометрия 145, 172
— метаболизм 15—26
— полярография 142—143
— потребность и клиническое применение 48—49
— препарат для птицеводства 146, 154— 156
— применение в сельском хозяйстве 48—■ 49
— реакции цветные 132—135
— синтез полный 119—127
— спиртовый концентрат
получение 154—156
— состав 139, 156
— стабильность на адсорбентах 140
Витамин D3 — структура 11 — технология получения 146—160 — УФ-спектроскопия 144 — хроматография бумажная 135—136 — ■— колоночная 136—137 — — тонкослойная 137—140 — эфиры 173 — ЯМР-спектроскопия 145, 173 Витамин О4 173 — биологическая активность 27—29 Витамин D5 28—29, 173 Витамин D6 28—29, 173 Витамин D7 28—29, 173
Газожидкостная хроматография 140—142 Гомохола-5,7-диен-25-овая кислота 98 i-Гомохолановая кислота, метиловый эфир 99
Дегидробромирование 80—84 — бензоата 7-бромхолестерина 165—167 — определение конца реакции 167 Дегидробромирующие агенты 83—84 7-Дегидрокампестерин 28, 71, 185 — бензоат 185 22-Дегидро-25-оксихолекальциферол 36 7-Дегидро-Р-ситостерин 185 — получение 28, 71—72 — эфиры 185 7-Дегидростигмастерин 28, 71—72, 185 — эфиры 185 7-Дегидрохолестерин27, 57 183 — ацетат 184 ИК-спектр 184 — бензоат 184 ИК-спектр 184 количественное определение 168 — ГЖХ 141—142 — количественное определение 170 — — — в облученном растворе 156 — кристаллизация 169 — облучение ртутно-кварцевыми лампами 148—150
эритемными лампами 148—151 — полярография 142—143 — продукты фотоокисления 153 — производные 184—185 — распространение 71 — синтез по Windaus 71—74 — стабильность на адсорбентах 140 — технология получения 160—170 — хроматография бумажная 135—136 колоночная 136—137 — — тонкослойная 137—140 — эфиры 184 — — облучение 153 24-Дегидрохолестерин (см. Холеста-5,24- диен-3 р-ол)
З-Дезоксивитамин D2 119
З-Дезокси-1 а, 25-диоксихолекальциферол 177
— биологическая активность 39, 45—47' З-Дезокси-1 а-оксихолекальциферол 176 — биологическая активность 39, 45—47 — масс-спектр 176 — синтез 114—116 а-Декагидронафтнлиденэтилбромид 118 Десмостерин (см. Холеста-5,24-диен-Зр-ол) 1,5-Диазобицикло-3,4,0-нонен-5 82 1а, Зр-Днацетат-9, 10-секохолеста-5 (10), 8-диен-6-ин 131
5а, бр - Дибр омхо лестер ин
— бензоат 79, 143, 202
Дигидровитамин Г)21 65—67, 181
— эфиры 181
Дигидровитамин D2 II 66—67, 181
— эфиры 181
Дигидровитамин D2 IV 66—67, 181 — биологическая активность 46—47 — эфиры 181
Дигидровитамин D2V 66—67, 182
Дигидровитамин D2 VI 66—67, 182
Дигидровитамин D3 I 67, 181
Дигидротахистерин-2 179
— биологическая активность 41—42, 45— 47
— получение 67
— хроматография 137
— эфиры 179
Дигидротахистерин-3 179
— биологическая активность 41—42, 45— 47
— масс-спектр 179
— получение 67
— 4-фенилазобензоат 179
Дигидроэргокальциферол (см. Витамин DJ 22-Дигидроэргостерин 27, 71, 185 Диметиламид ЗР-окси-биснорхола-5,7-ди- еновой кислоты 29—30
Диметиламино-б«с-норхола-5,7-диен-Зр-ол 29—30
1-Диметиламино-1 -метоксиэтилен 126 2-(Диметиламинометил)-циклогесанон 117 4,4-Диметилвитамнн D3 33, 178 —3,5-динитробензоат 178
17-(1,6-диметил гептил )-андроста-5,7-диен-
Зр-ол 29—30
17-(1,7-Диметилоктил)-андроста-5,7-диен- Зр-ол 29—30
20,25-Диокси-27-норхолекальциферол 36 1а,2а-Диоксихолекальциферол 37 1а,24-Диоксихолекальциферол 35, 137 1а, 25-Диоксихолекальциферол 174 — биологическая активность 20—21, 34, 44—48
— выделение и идентификация 18—20
— ГЖХ 142
масс-спектр 174
— синтез 99—104
хроматография колоночная 137
— ЯМР-спектр 174
25-Диоксихолекальциферол 36
25-Диоксихолекальциферол 175 — биологическая активность 22—23, 35 — выделение и идентификация 21—22 — масс-спектр 175 — синтез 104—106
— хроматография колоночная 137
— ЯМР-спектр 175
26-Диоксихолекальциферол
— биологическая активность 23, 36
— выделение и идентификация 23
— ГЖХ 142
— масс-спектр 175
— синтез 106—108
— хроматография колоночная 137
1а, 25-Диоксихолестерин (см. Холест-5 ен- 1а ,3р ,25-триол)
24,25-Диоксихолестерии 104, 108
25,26-Диоксихолестерин 106
1а,25-Диокси-3-эпивитамии D3 39
1а,25-Диоксиэргокальциферол 36
N, М-Диэтилциклогексиламии 82
Изоамилтрифосфоиийбромид 124
Изовитамин D2 56, 67—68, 121, 180
Изовитамии D3
— биологическая активность 43
— масс-спектр 180
Изодегидрохолестерии (см. Холеста-6,8 (Э)-диен-Зр-ол)
Изокетовитамии D3 69—70
Изопирокальциферол-2 56, 194
— ГЖХ 140—141
— структура 60—61
Изопирокальциферол-3 57, 194
— ГЖХ 140—141
— структура 60—61
Изотахистерии-2 56, 67—68, 121, 130, 180
— 4-метил-3,5-дииитробензоат 180
— полярография 142—143
Изотах истер ин-3
— биологическая активность 42, 45
— масс-спектр 180
— получение 42—43
ИК-спектроскопия 144—145
Источники УФ-излучеиия 146—151
ЗР-Йодхолест-5-еи 201
Кальциферол (см. Витамин D2)
Кальцийсвязывающий белок 13
Кальций
— мобилизация из кости 14
— транспорт в кишечнике 13—14
Кампестерин 28
Катализатор Линдлара 124, 130—131
З-Кетовитамии D2 68, 70
З-Кетовитамии D3 31—32
Кетон 250 43—44
— биологическая активность 44
— получение 43
— распростраиеиие 44
7-Кетохолестерии (см. Холест-5-ен-ЗР-ол 7-он)
Колориметрические методы определения 132—135
Кротилбромид 124
Лампы
— бактерицидные 148—149
— ртутно-кварцевые 147—148
— эритемные 148—151
Ланоста-5,7-диеи-Зр-ол 33
Латостерии (см. Холест-7-еи-30-ол)
Люмикальциферол 63
Люмистерии-2 50, 55—57, 56, 192
— биологическая активность 56
— ИК-спектроскопия 144—145
— полярография 142—143
— структура 55—56
— УФ-спектроскопия 144
— химические свойства 56
— хроматография 136
— эфиры 192
Люмистерии-3 57, 192
— биологическая активность 57
— ИК-спектр 193
— получение 57
— хроматография 136, 140
— эфиры 192
9а-Люмистерии (см. Пирокальциферол)
Масс-спектрометрия 145
Мезитойиая кислота (см. 2,4,6-Триметил- беизойиая кислота)
8-Метилгидриидаи-1,4-диои 122
8-Метилгидриидаи-4-ол-1-ои 122
Метилметакрилат 125
Метилортогидроцитроиеллат 126
За-Метилхолекальциферол 32
1-Метилциклогекс -З-еи-1, чис-2-дикарбо- иовая кислота 125
4-Метилциклогекс-3-ен-1, транс-2-диол-Х- беизоат 126
З-Метилциклогексеи-2-ои-1 -пропионовая кислота 122
5-Метокси-2-метилбеизойиая кислота 127
Минерализация костной ткани 14
24-Нор-25-оксивитамии D3 40
26-Норхолеста-5,7-диен-3|3-ол-25-он 89
27-Норхолест-5-ен-3|3-ол-25-ои 104, 106
26-Норхолест-5-еи-25-ои 88'
Окисление по Оппеиауэру 130
зр-Окси-бис-норхол-5-еновая кислота 93 25-Окси-26,27-бис-норхолекальциферол 36 la-Оксивитамии D2 (см. 1а-Оксиэргокаль- циферол)
la-Оксивитамии D3 (см. 1а-Оксихолекаль- циферол)
25-Оксидигидротахистерин-З
— биологическая активность 41—42
— масс-спектр 180
22 З-Окси-22,23-дигидр оэргокальци- ферол 36
1а-Окси-7,8-дигидроэргостерии 116
25-оксиизотахистерии-З 42
3-3-Оксиметил-4-метилциклогекс-3-еи-1- ол 127
1а-Окси-17-иор-17, 17-этилендиоксиви- тамин D 40 ■
20 -Окси-17- нор -17, 17-этил ендиоксивита- мин D 40
30-Оксинорхол-5-еновая кислота 93 25-Окси-27-норхолекальциферол 36 1а-Оксипрегнакальциферол 40 1а-Оксипрекальциферол-3131 25-Оксипрекальциферол-391, 192 24-Окси-25,26,27-тринорхолекальцифе- рол 36
1а-Оксихолекальциферол 85, 176
— биологическая активность 38—39, 45— 49'
— ГЖХ 142
— ИК-спектр 176
— масс-спектр 176
— синтез 109—114
— — полный 119, 131
2а-Оксихолекальциферол 37, 177 20-Оксихолекальцнферол 37, 177 4а-Окснхолекальциферол 37, 177 11а-Оксихолекальциферол 34, 177 24-Оксихолекальциферол — биологическая активность 35 — хроматография 137 25-Оксихолекальцнферол 173 — биологическая активность 17, 34—35, 44—48
— выделение и идентификация 16—17
— ИК-спектр 174
— масс-спектр 174
— синтез 88—98
— хроматография 137
— ЯМР-спектр 174
1а-Оксихолестерин (см. Холест-5-ен-1а, 30-диол)
4а-Оксихолестерин (см. Холест-5-ен-30, 4а-диол)
40-Оксихолестерии (см. Холест-5-ен-30, 40-диол)
7а-Оксихолестерин (см. Холест-5-ен-30, 7а-диол)
70-Оксихолестерин (см. Холест-5-ен-30, 70-диол)
24-Оксихолестерин 101
25-Оксихолестерин (см. Холест-5-ен-30, 25-диол)
30-Оксихол-5-еновая кислота 91, 94
20 (S), 25-Оксихолестерин 96 п-Оксициклогексанон 119 la-Окси-З-эпивитамин D3 176 — биологическая активность 39 — ЯМР-спектр 176 1а-Оксиэргокальциферол 39 — масс-спектр 176 — синтез 116
25-Оксиэр гокальцифер ол
— биологическая активность 36
— выделение и идентификация 17
— масс-спектр 174
— синтез 116
Октагидровитамин D2 67 Омыление
— бензоата 7-дегидрохолестерина 168—
— определение конца реакции 170
Пирокальциферол-2 56, 193
— ГЖХ 140—141
— структура 60—61
— эфиры 194
Пирокальциферол-3 57
— структура 60—61
— эфиры 194
Полярография 142—143
Превитамин-2 51, 53—54, 56, 191
— 3,5-динитробензоат 191
— изомеризация в витамин О2 57—59
— ИК-спектр 191
— полярография 142—143
— структура 53—54
— хроматография 136, 138
Превитамин-3 53, 57, 127, 191
— биологическая активность 54
— 3,5-динитробензоат 191
— изомеризация в витамин D3 57—59
— ИК-спектр 192
— синтез полный 124—127
— хроматография 139—140
Прекальциферол (см. Превитамин)
Прегненолон 96
Провитамин D2 (см. Эргостерин)
Провитамин D3 (см. 7-Дегидрохолестерии)
Растворители для УФ-облучения провитаминов 152
Реабсорбция фосфора (в почечных канальцах) 14
Реактив Nield 132
Реакции
— Либермана — Бурхарда 133
— Розенхейма 134—135
— с ароматическими альдегидами 134
— с 1,3-дихлоргидрином глицерина 134
— с йодом 134
— с SbCl3 132—133
— cSbCl5 134
— с тетрацианэтиленом 135
— с хлоридом олова 135
— цветные 132—135
— Чугаева 133—134
— Wittig 120, 124, 127—128
Регуляция метаболизма витаминов D 24—
26
9,10-Секоандроста-5,7,10 (19)-тр иен-30, 170-диол 178
9,10-Секоандроста-5, 7, 10 (19)-триен-30 ол 178
5,10-Секохолест-1 (10)-ен-5-он ПО
9,10-Секоэргоста-5(10),6 (транс), 8,22-тет- раен-30-ол (см. Тахистерин-2)
9,10-Секоэргоста-5(10), 6 (цис), 8,22-тет- раен-30-ол (см. Превитамнн-2)
0-Ситостерин 28
Соединение Linsert 63 Стигмастерин 28, 94 Супрастерин-21 50, 56, 194 — биологическая активность 63 — структура 61—63 — эфиры 194
Супрастерин-3 I 57, 194—195
ИК-спектр 195
ЯМР-спектр 195
Супрастерин-2 II 50, 56, 195
— биологическая активность 63
структура 62—63
эфиры 195
Супрастерин-3 II 57, 195
ИК-спектр 195
ЯМР-спектр 195 Супрастерин III 63 Тахистерин-2 50,54—55,56,193 — биологическая активность 40, 55 — полярография 142—143 — синтез полный 127—129
структура 54—55.
— УФ-спектроскопия 144
хроматография 136
эфиры 193
Тахистерин-3 57, 193
U-Тахистерин 121, 130 193 — УФ-спектр 193 U-Тахистерои 130 Тиохолекальциферол 31 Токсистерин 50, 63—65 Токсистерин А 64—65, 195 — эфиры 195
5,6-траяс-Витамин D2 40—41,45—48,
6, 179
— изомеризация в витамин D2 119—120 — получение 67—68 — полярография 142—143 — синтез полный 119—120
— эфиры 179
5,6-траяд-Витамин D3 124, 179
— биологическая активность 40—41,45— 48
— масс-спектр 179 — получение 67—68 5,6-транг-25-Оксивитамин D3 41, 49 транс-Пента-2,4-диеновая кислота 125 2,4,6-Триметилбеизойиая кислота 125 3,7,8-Триол витамина D2 69—70 3,5,6-Триол витамина D3 69—70 1а,24,25-Триоксихолекальциферол — биологическая активность 24, 35 — выделение и идентификация 23—24 — масс-спектр 175 — синтез 108—109 — хроматография 137 Трифенилфосфинметилен 119
УФ-спектроскопия 144—145 Фотоизопирокальциферол-2 56, 194 ■— структура 60—61 Фотопирокальциферол-2 56, 194 — структура 60—61 3|3-Фтор-7-бромхолест-5-ен 86 Зр-Фторпрекальциферол-З 192
Зр -Фтор -9,10-секохолеста-5,7,10(19) -триен- (Зр-фторхолекальциферол) 178
— биологическая активность 31
ИК-спектр 178
масс-спектр 178
ЗР-Фторхолеста-5,7-диен 31, 85, 186
ИК-спектр 186
масс-спектр 186
получение 86
ЯМР-спектр 186
Зр-Фторхолест-5-ен (Зр-фторхолестерин)
201
— ИК-спектр 201
— окисление 72
Фукостерин 92, 101, 190
— 24,28-эпоксид 92—93
9а-Хлор-дез-АВ-холестан-8-он 124, 125»
131
л-Хлор надбензойная кислота 126
Р-Хлорпропионовый эфир 122
Зр-Хлорхолест-5-ен 201
7а-Хлорхолестерин 77—78
7Р-Хлорхолестерин 77—78
Холекальциферол (см. Витамин D3)
Холекальциферол — холестерин (см. Витамин D3, аддукт с холестерином)
Холеста-5,7-диен-1а,Зр-диол 112, 113,
185
— диацетат 185
Холеста-5,7-диен-Зр, 19-диол 85
Холеста-5,7-диен-ЗР,25-диол 88, 185
— ацетат 185
ЯМР-спектр 185
Холеста-5,23-диен-3р,25-диол 92
Холеста-5,25-диен-Зр,24-диол 92
Холеста-1,5-диен-ЗВ-ол 113
Холеста-4,6-диен-3р-ол 81—84, 186
ИК-спектр 187
хроматография 139
эфиры 186—187
Холеста-4,7-диен-Зр-ол 190
Холеста-5,7-диен-1а-ол 186
Холеста-5,7-диен-Зр-ол (см. 7-Дегидро- холестерин)
Холеста-5,8(9)-диен-Зр-ол 84, 187
ИК-спектр 188
хроматография 139
— эфиры 187
Холеста-5,24-диен-ЗР-ол 92, 94, 104, 106,
190
— масс-спектр 190
— 24,25-эпоксид 104
— эфиры 190
Холеста-5,25-диеи-ЗР-ол 106
Холеста-6,8(9)-диен-ЗР-ол 190
— эфиры 72, 190
Холеста-6,8(14)-диен-3р-ол 189
— эфиры 83—84, 189
Холеста-7,9(11)-диен-Зр-ол 188
— ИК-спектр 188
— эфиры 188—189
Холеста-7,14-диен-Зр-ол 189
— ИК-спектр 189
— бензоат 189
Холеста-8,14-диен-Зр-ол 82—84, 187
И К-спектр 187
хроматография 139
— эфиры 187
Холеста-4,6-диен-3-ои 73
Холеста-4,7-диен-3-он 69—70
Холеста-5,7-диен-1а,30,25-триол, триацетат 185
Холеста-5,7-диен-ЗР,24,25-триол, диацетат 185
Холеста-5,7-диен-ЗР ,25,26-триол 106, 185 — диацетат 185
5а-Холестан-бр ,25-диол-З-он 101
5а-Холестан-Зр-ол 90 5а-Холестан-Зр-ол-6-он 110
5а-Холестан-Ж-ол-7-он 77
Холестан-ЗР, 5а, бР-триол 73
Холестаи-Зр ,5а,25-триол 90
Холеста-2,4,6-триен 81—84, 139, 190
Холеста-3,5,7-триен 191
Холеста-4,6,8(14)-триен 83—84, 139, 191
Холеста-1,4,6-триен-25-ол-3-он 101
Холеста-1,4,6-триен-З-он 113
Холеста-1,5,7-триен-З-он 113
Холест-5-ен-1а,Зр-диол НО, ИЗ, 114, 197
ЯМР-спектр 197
Холест-5-ен-Зр,4а-диол 87, 198
диацетат 198
Холест-5-ен-Зр,4р-диол 87, 198
эфиры 198
Холест-5-ен-Зр,7а-диол 71—73, 76—78.
198
ИК-спектр 198
хроматография 139
- эфиры 198
Холест-5-ен-Зр,7р-диол 71—73, 76—78,198
ИК-спектр 199
полярография 143
хроматография 139
— эфиры 198—199
Холест-5-ен-Зр,25-диол 88, 94, 106, 199
ИК-спектр 199
масс-спектр 199
эфиры 199
Холест-5-ен-Зр,4Р-диол-7-он 87, 200
- эфиры 200
Холест-5-ен-1а-ел 115, 197
— ацетат 197
ЯМР-спектр 197
Холест-7-ен-Зр-ол 197
ИК-спектр 197
масс-спектр 197
эфиры 197
5а-Холест-1-ен-бр-ол-3-он 110
Холест-5-ен-3|3-ол-7-ои 71—73, 125, 200
ИК-спектр 200
— полярография 143
— эфиры 200—201
Холест-4-ен-З-он 201
Холест-5-ен-З-он 201
Холест-5-ен-1а,Зр,25-триол 48, 100—104,
200
Холест-5-ен-Зр,4р,7а-триол 200
Холест-5-ен-Зр,25,26-триол 106 Холестерин 11, ИЗ, 195 — бензоат 195 ИК-спектр 196 количественное определение 162 получение 160—161 полярография 142—143 — ИК-спектр 196 Холестерин— масс-спектр 196 — синтез полный 119 — хроматография 135, 137—140 — эфиры 79, 195—196 Хроматография — бумажная 135—136 — газожидкостная 140—142 — колоночная 136—137 — тонкослойная 137—140
3,5-Цикловитамин D3 68 Циклогексилиденэтилбромид 117 3,5-Цикло-5а-холест-24-ен-6р-ол 93 Цитраконовый ангидрид 128 Цитронеллонитрил 126 цис-Гидр индан-1,4-дион 123 цис-Изотахистерин-2 56
5,8-Эпидиоксигомохола-6,23-диен-25-овая кислота 98
5,8-Эпидиокси-23-норхола-6,22-диен-Зр, 24-диол 97
5,8-Эпидиокси-23-норхол-6-ен-24-аль 97 Эпихолекальциферол 30, 86 Эпиэргокальциферол 30, 118 5,6-Эпоксид витамина D2 69—70 7,8-Эпоксид витамина D2 69—70 1а,2а-Эпоксихолеста-4,6-диен-3-он 112 25,26-Эпоксихолестерин 107 Эргокальциферол (см. Витамин D2) Эргоста-1,4,6,22-тетраен-З-он 116 Эргоста-4,6,22-триен-3-он 116 9р,10а-Эргоста-5,7,22-триен-ЗР-ол (см. Лю- мистер ин-2)
Эргостерин 6, 56, 97, 182—183
— ИК-спектр 144—145, 183
— облучение 147—150
— перекись 183
— получение 160
— распространение 71
— хроматография 135—138
— эфиры 182
ИК-спектры 183
96-Эргостерин (см. Изопирокальциферол) (5)-3-Этинил-4-метилциклогекс-3-ен-1-ол 124, 127
Этиокальциферол (см. 9,10-Секоандроста- 5,7,10(19)-триен-3р-ол) 2-Этоксибутадиен 128
Эфир Hageman 122
ЯМР-спектроскопия 145
Оглавление
33Предисловие
3
3
Глава I. ИСТОРИЯ ОТКРЫТИЯ И ИССЛЕДОВАНИЯ ВИТАМИНОВ D .5
Глава II. МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ ВИТАМИНОВ D В ОРГАНИЗМЕ И
ИХ МЕТАБОЛИЗМ 12
Биохимическая основа действия витаминов D 12
Транспорт кальция в кишечнике 13
Мобилизация кальция из кости 14
Минерализация костной ткани 14
Роль витаминов D в реабсорбции фосфора в почечных канальцах 14
Выделение, идентификация и биологические свойства активных метаболитов витаминов D 15
25-Оксихолекальциферол (25-OHD3) 16
1а, 25-Диоксихолекальциферол (la, 25-(ОН)2 D3) 18
24/?,25-Диоксихолекальциферол (24Р,25-(ОН)гб3) 21
25,26-Диоксихолекальциферол 23
1а,24,25-Триоксихолекальциферол (la,24,25-(OH)3D3) . . . .23
Регуляция метаболизма витаминов D 24
Глава III. СТРОЕНИЕ И БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ВИТАМИ- ■
НОВ D, ИХ МЕТАБОЛИТОВ И СИНТЕТИЧЕСКИХ АНАЛО
ГОВ 27
Влияние структуры боковой цепи на биологическуюактивность 27
Роль заместителя при С3 30
Эфиры витаминов D 32
Введение метильных групп в молекулу витаминов D 33
Оксипроизводные витаминов D 33
Псевдоаналоги 1а,25-диоксихолекальциферола 40
5,6-тро«с-Витамин D3 и 5,6-тряяс-25-оксивитаминD3 . . . .40
Дигидротахистерин и 25-оксидигидротахистерин 41
Изотахистерин-3 и 25-оксиизотахистерин-З 42
Изовитамин-3 43
Кетон 250 43
Молекулярная топология и биологическая активность44
Потребность в витамине D и клиническое применение его препаратов 48
Глава IV. СИНТЕЗ И ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИТАМИНОВ D . . .50
Фотохимическая изомеризация провитаминов D (обратимые ре
акции) 50
Продукты фотохимической изомеризации провитаминов D . . . .53
Превитамины 53
Тахистерины 54
Люмистерины 55
Обратимая термическая изомеризация превитаминов D в витамины D 57
Термическая изомеризация витаминов D (необратимые реакции)60
Пирокальциферол-2 и изопирокальциферол-2 60
Фотопирокальциферол-2 и фотоизопирокальциферол-2 . . . .61
Фотохимическая изомеризация витаминов П(необратимые реакции)61
Супрастерины I, II и III 62
Соединение Linsert 63
Люмикальциферол 63
Фотохимическая изомеризация провитаминов D (необратимые реакции) 63
Токсистерины 63
Бихолестадиенол 65
Реакции гидрирования витаминов D 65
Реакции химической изомеризации витаминов D и родственных соединений 67
Реакция окисления витаминов D 68
Г л а в a V.
СИНТЕЗ ПРОВИТАМИНОВ D 71
Метод синтеза провитаминов D по Windaus 71
Реакция аллильного бромирования 74
Реакция дегидробромирования 80
Другие методы получения провитаминов D 84
Влияние заместителя в кольце А на введение двойной связи С,—С, 86
Глава VI.
СИНТЕЗ АКТИВНЫХ МЕТАБОЛИТОВ И АНАЛОГОВ ВИТАМИНОВ D 88*
Синтез 25-оксихолекальциферола 88-
Синтез 1а,25-диоксихолекальциферола (la,25-(OH)2D3) 99
Синтез 24,25-диоксихолекальциферола104
Синтез 25,26-диоксихолекальциферола 106
Синтез 1а,24,25-триоксихолекальциферола 108
Синтез 1а-оксихолекальциферола109
Синтез 3-дезокси-1а-оксихолекальциферола114
Гидроксилированные аналоги витамина D2116
Глава VII.
ПОЛНЫЙ СИНТЕЗ ВИТАМИНОВ D И РОДСТВЕННЫХ СОЕ
ДИНЕНИЙ 117
Частичный синтез витаминов D2 и D3 119
Полный синтез витаминов Dnolnhoffen120
Полный синтез витамина D3 по Lythgoe'124
Полный синтез тахистерина127
Частичный синтез других изомеров витаминов D129
Полный синтез 1а-оксивитамина D3131
Глава VIII.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ВИТАМИНОВ D И РОДСТВЕННЫХ СОЕДИНЕНИЙ132
Цветные реакции и колориметрические методы определения . . . 132
Хроматография витаминов D и родственных соединений135
Газожидкостная хроматография 140
Полярография 142
УФ-, ИК-, ЯМР- и масс-спектроскопия144
Глава IX.
ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ ВИТАМИНОВ D2 И D3 . ... 146
Факторы, влияющие на процесс фотохимической изомеризации провитаминов D 146
Источники ультрафиолетового излучения146
Облучательные аппараты 151
Растворители 1^2
Влияние температуры 152
Влияние кислорода 152
Облучение эфиров провитаминов D153
Получение спиртового концентрата витамина D154
Фотохимическая изомеризация провитаминов D154
до 40—50%-ной конверсии
Фотохимическая изомеризация провитаминов D до 90—95%- ной конверсии 155
Методы аналитического контроля156
Получение кристаллических витаминов D157
Получение кристаллического витамина D2157
Получение кристаллического витамина D3158
Получение провитаминов D160
Получение эргостерина160
Получение 7-дегидрохолестерина160
Гл а в а X. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ КОНСТАНТЫ ВИТАМИНОВ D
И РОДСТВЕННЫХ СОЕДИНЕНИЙ 171
Витамины D171
Метаболиты витаминов D173
Синтетические аналоги витаминов D176
Провитамины D и холестадиены182
Фотоизомеры 191
Холестерин, его изомеры и производные 195
Литература 203
.Предметный указатель 240
РАДА ИВАНОВНА ЯХИМОВИЧ
ХИМИЯ ВИТАМИНОВ D
Печатается по постановлению ученого совета
Института биохимии им. А. В. Паллад ина АН УССР
Редактор А. В. Кучеренко
Оформление художника В. Б. Харика
Художественный редактор Р. И. Калаш
Технический редактор И. А. Ратнер
Корректоры Л. И. Выровая, Е. А. Михалец
Информ, бланк № 1793.
Сдано в набор 26.10.77. Подп. в печ. 13.06.78. БФ 00256. Формат 70x100/16. Бумага тнпогр. № 1. Лит. гарн. Выс. печ. Усл. печ. л. 20,15. Уч.-изд. л. 20,18. Тираж 1000 экз. Заказ 8-269. Цена 3 руб. 50 коп.
Издательство «Наукова думка». 252601, Киев# ГСП, Репина, 3.
Книжная фабрика «Коммунист» РПО «Полиграфкиига» Госкомиздата УССР, 310012, Харькев-12, ул. Энгельса, 11.
АКАДЕМИЯ НАУК УКРАИНСКОЙ ССР
ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ИНСТИТУТ БИОХИМИИ им. А. В. ПАЛЛАДИНА
Р.И-ЯХИМОЬИЧХимид
витаминов
•У
КИЕВ «НАУКОВА ДУМКА» 1978
57.04
Я 90
УДК 577.161.2
Химия витаминов D. Яхимович Р.И< К., «Наук, думка», 1978. с. 248.
В монографии приведен обзор литературы и данные автора по изучению витаминов группы D. Описана история открытия и исследования витаминов D, рассмотрены современные представления о роли витаминов D в организме, их метаболизм и биохимическая основа действия, а также вопросы взаимосвизи между строением витаминов D, их метаболитов и синтетических аналогов и биологической активностью. Значительное внимание уделено проблеме синтеза витаминов D путем фотохимической изомеризации их провитаминов, различным способам получения провитаминов D. Описаны методы синтеза активных метаболитов и аналогов и полного синтеза витаминов D и подобных соединений, методы аналитических исследований, а также технология получения витаминов D2 и D3. Приведены физико-химические константы, данные УФ-, ИК-, ЯМР- и масс-спектроскопии витаминов D и родственных соединений.
Рассчитана на сотрудников научно-исследовательских институтов, преподавателей и студентов вузов, а также на инженеров витаминной промышленности, занимающихся вопросами химии и биохимин стероидов, и в частности витаминов D.
Ил. 16. Табл. 18. Список лит.: 1003 назв.
Ответственные редакторы И. В. ТОРГОВ, Г. М. СЕГАЛЬ
Рецензенты А. А. ЯСНИКОВ, В. П. ВЕНДТ
Редакция физиологической, биохимической и медицинской литературы
Я 2^ 456.78Я 2^ 456.78M221(04h7*M221(04h7*© Издательство «Наукова думка», 1978© Издательство «Наукова думка», 1978
Я 2^ 456.78
Я 2^ 456.78
M221(04h7*
M221(04h7*
© Издательство «Наукова думка», 1978
© Издательство «Наукова думка», 1978